蚌埠医学院医学遗传学试验教学大纲课程名称医学遗传学英文

1、蚌埠医学院医学遗传学实验教学大纲课程名称：医学遗传学英文名称：Medical Genetics课程性质：专业主干课程（独立开课） 适用专业：临床医学（本科）考核方式：实验成绩包括出勤、课堂提问、理论或实验操作、实验结果、实验报告 20%课程简介：医学遗传学实验课是整个医学遗传学教学中一个重要组成部分。本实验教学大纲是根据医学生人才培养目标所需要的基本理论和基本技能的要求，根据本课程的教学性质、条件和教学实践而制定。主要内容有：遗传病电教、人类染色体标本的制备、人类染色体G带标本 制备与核型分析、 遗传咨询等。其目的不仅仅是加深学生对专业理论知识的理解和认识，而且能够掌握遗传学实验的基本方法，接

2、受遗传学实验技能的基本训练，培养学生独立处理问题和解决问题的能力。本课程总计为9学时，由4个实验组成。考核方式：提交实验报告、操作及其实验表现等，占总成绩的20%教材与主要参考书：.夏家辉主译.精编人类遗传学实验指南科学出版社，第1版2009.蔡绍京细胞生物学与医学遗传学实验指南上海：第二军医大学出版社，第 1版,2002.8.曾溢滔主编，遗传病的基因诊断与基因治疗，上海:上海科学技术出版社,1999.细胞生物学与遗传学实验指导金龙金等主编，浙江大学出版社，2005-8。实验一遗传病相关实验由于此部分涉及临床遗传病的内容，出于对病人隐私权的考虑，在实际实验中不易实施。我们通过收集较多的遗传病病

3、例录像，在宏观上内容涉及到人群、种系，群体分析、家系遗传分析等系谱特点和临床特征，使学生更加直观的了解此病的典型症状和发病机理；微观内容涉及到染色体分析、基因突变检测等。这些视频包括单基因病，多基因病，染色体病等。实验二染色体核型分析及其 PTC尝味实验目前染色体的研究几乎深入到每个学科的每一个领域，因为染色体是把细胞与分子联系起来的重要桥梁，故在遗传学研究中或者在医学研究中被广泛重视及应用。近几年相继出现了脆性位点、热点、重排与癌基因激活及抑癌基因丢失，癌基因定位、抑癌基因定位及杂合位点缺失等与染色体相关的理论；另一方面与染色体畸变有关的各类遗传病的研究也使临床 上染色体的分析上了 一个新的

4、台阶。染色体分析相对较简单， 细胞通常采用循环血中的淋巴细胞，胎儿采用羊膜液中的羊膜细胞或胎盘绒毛膜细胞。细胞经过培养，再用植物凝集素（ PHA）刺激细胞分化。当每个染 色体都复制成两个染色体单体时，随后加入秋水仙素，在分裂中期阻止细胞有丝分裂。位于载玻片上的细胞随后被染色，在显微镜下拍照或用计算机进行图像分析。根据染色体形态大小，剪下照片上的染色体，按序分类排贴在纸上，进行核型分析。染色体显带通常通过 G显带或Q （荧光）显带染色技术进行，增加其他染色方法可提 高细胞遗传学诊断的准确性。2-1人类染色体标本的制备（有视频）一、实验目的掌握人类外周血细胞培养方法及染色体标本的制备方法。观察人类

5、染色体的形态和数 目。二、实验原理血液中的T淋巴细胞在体外培养中经一定剂量的植物血凝素（ PHA）刺激，可以返幼 进行细胞分裂，用秋水仙素积累分裂相，用0.075 mol/L-1KCI进行低渗后，经固定、染色，可见到分散的染色体。三、实验准备超净工作台、酒精灯、无菌注射器（1ml、2ml、5m1）、针头、培养瓶、橡皮塞、75%酒精棉球、离心机、定时钟、试管架、量筒、刻度离心管、冰凉玻片，毛细滴管、恒温 水浴锅、RPMI1640、小牛血清、肝素、秋水仙素、植物血凝素（ PHA）、固定液（甲醇：冰 乙酸为3： 1,现用现配）、0.075mol。L-1KCI低渗?仅、Giemsa染液、pH6.8磷酸

6、缓冲液、恒 温培养箱、吹风机、粗天平、5%NaHCO3、显微镜。四、实验方法与步骤（一）接种取500单位/lml的肝素0。2ml湿润针筒后，取静脉血12ml,转动针筒以混匀肝素；随后立即插入灭菌小瓶内，送入超净工作台（消毒、灭菌等略），在火焰旁将血液滴入 23个盛有5ml培养液（4ml RPMIl640、lml小牛血清，5mg PHA ,用5%的NaHCO3调 pH至 7.07.4）的培养瓶内，每瓶 0.20.3ml （7号针头13滴），盖上橡皮塞，轻轻摇动以混匀。（二）培养.将培养瓶放在37 c恒温箱内培养 72h。.在终止培养前24h,将0.01 %的秋水仙素12滴（7号针头）加入培养瓶内

7、，轻 轻摇匀.放回温箱内，继续培养24h。（三）收获.用吸管充分吹打瓶壁，吸取培养物移入刻度离心管内，相对离心管平衡后放入离心 机，离心8min （1000转/分），吸去上清液，留下沉淀物。.低渗处理：力口 8ml预温（370C）的0.075mol。L-1KCI低渗液，用吸管打匀使细胞悬 浮于低渗液中，放回37c恒温水浴锅中，静置 1520min,使白细胞膨胀，染色体分散、红细胞解体。.预固定：加入固定液 12ml打匀。.再离心：1000转/分离心8min ,吸去上清液，留下沉淀物。.固定：沿离心管壁加入新配固定液8ml打匀，固定30min。.再离心：1000转/分离心8min,弃去上清液，留

8、下沉淀物。.再固定：再加入新配固定液8ml,打匀，静置30min。.再离心：1000转/分离心8min,弃去上清液。.第四次固定：加入新配固定液0.5lml打匀成细胞悬液。.制片：用滴管吸细胞悬液23滴，滴在冰水预浸泡的洁净载玻片上，立即用口吹散，在酒精灯上过几次，吹风机吹干或气干。.染色：Giemsa染液（原液：pH6.8磷酸缓冲液为1 ： 9）染色10 min20min、自来 水冲洗、晾干。（四）镜检低倍镜下找到分散良好的分裂相后，换高倍镜、油镜、认真观察。 （五）注意事项. PHA是体外淋巴细胞培养成败的关键问题，因此，要考虑它的质量和浓度。盐水提 取物一般冰冻保存的时间不宜过长，时间长

9、了效价减低。.浓度一般用1 %2% ,每毫升培养液加 0.20.4ml;浓度过高可能会导致红细胞凝 集。.秋水仙素溶液浓度和处理时间。一般最终浓度每毫升培养液0.10.2科的宜，作用时间为35h, 一般秋水仙素溶液的浓度与处理时间有一定的关系。如果处理时间太短，则 标本中的分裂细胞就少，相反，如果处理时间太长，则标本中的分裂细胞虽多，但其染色体缩得太短，以致形态特征模糊。4,培养温度应严格控制在 37 C +0.5 o.双蒸水必须用玻璃蒸储器制备，pH应在67之间。.低渗步骤极为重要，关系到染色体分散的好坏，因此，低渗液浓度与低渗的时间应 掌握适当。.离心机最好用水平式的，速度不宜过快。速度太

10、快细胞团不易打散，反之分裂相易 丢失；固定液应在临用时新鲜配制，固定一定要彻底、均匀。若打散不够，则细胞在玻片上 易集结。.若吹打时用力过猛，细胞易破碎，以致染色体数目不完整；培养液的pH值应掌握在7.4 0.1左右，pH值偏酸发育不良，偏碱时细胞出现轻度固缩。.玻璃器皿都要十分干净、无酸，所用试剂以分析纯为好。.操作过程应保持高度无菌概念，严防细菌和病毒污染；在外周血培养中，PHA对淋巴细胞的作用，个体差异较大。同样方法和条件，分裂相多少及分散情况不一样。因此， 若首次失败，应充分考虑到这些因素。（五）预期实验结果及分析将制作好的片子在油镜下仔细观察，选择较好的分裂相进行照相、剪贴、分组，将

11、照片上的核型进行剪贴，写出实验报告与实验结果。染色体数目为46XX, （XY）为人类正常核型。若某对染色体少了一条（2n-1）,细胞染色体数目为45;或某一对染色体多了一条（2n+1）,细胞染色体数目为 47;若为两种核型， 46, XX/46 , XXY称为嵌合体。以上三种为异常核型。2-2染色体核型分析.实验目的了解人类染色体的形态特征，掌握其核型分析的基本方法。.材料正常人G显带染色体标本影印图片、人染色体标本片、人显带染色体标本片.内容与方法：核型：指某种生物个体或某一分类群 （种、亚种或变种、居群）的一个体细胞全部中期染 色体的数目、大小和形态等特征的总和。用来表述物种的特点和亲缘种

12、属之间的关系。核型分析：将待测细胞的染色体按照该生物固有的染色体形态特征和规定，进行配对、 编号和分组，并进行形态分析的过程过程。Denver体制：按照Denver会议（1960年）提出的染色体命名和分类标准，将人类体细胞的46条染色体按大小（根据长度递减顺序）、着丝粒的位置分成七组（A、B、C、D、E、F、G、）23对的排列，并将副缢痕和随体作为识别染色体的辅助指标。人类染色体核型分析标准是丹佛（Denver）体制（人类有丝分裂染色体的标准命名体制）。该体制规定：每一条染色体可通过相对长度、臂率和着丝粒指数等三个参数予以识别；. 一葩体.短微P）看丝粒（忸缄缁痕） 加*次级缢痕非显色.厘丧幽

13、f制作好后,端粒按着丝粒在染色体长轴的位置，分成:中央着丝粒染色体：1/25/8亚中着丝粒染色体：5/87/8近端着丝粒染色体：7/8至末端不经处理直接染色，整条染色体均匀着色（相对于后面的显带染色体而言）。（一）人类正常染色体及其带型的识别1,非显带染色体的识别：根据染色体按大小（根据长度递减顺序）、着丝粒的位置分A群：包括第1、2、3对染色体，体积大，彼此易于区别，有中央着丝粒，第二对 染色体的着丝粒略偏离中央。B群：包括第4、5对染色体，较大，均为亚中部着丝粒，彼此不易区分。C群：包括6-12对常染色体和 X性染色体，中等大小，为亚中部着丝粒染色体，彼 此间难以区分，第 6对的着丝粒染色

14、体靠近中央，X染色体大小介于第 6对与第7对之间，第9对染色体长臂上有一 次缢痕，第11对染色体上的短臂较长，第 12对染色体的短臂较 短，这些特点有助于染色体的鉴别。D群：包括第13、14、15三对染色体，中等大小，均为近端着丝粒，有随体，彼此间不易区分。E群：包括第16、17、18三对染色体，中等大小，第 16对有中央着丝粒，长臂上有 次缢痕，易于区别，第 17、18对上有亚中部着丝粒，难以区分，后者的短臂较短。F群：包括第19、20两对染色体，体积小，染色体比 G组稍大、均为中央着丝粒性， 呈梅花状；彼此难以区分。G群：包括第21、22两对常染色体和 Y染色体，是最小的一组，均为近端着丝

15、点， 短臂末端有随体，长臂常呈分叉状，21号稍小于22号。丫染色体被隶属于该组，短臂无随体，一般较21、22号大点。上述人的常规核型中，122号为常染色体，男女共有，另一对为性染色体， 决定性别， 男性为XY ,女性为XX ,人的正常核型写法：男 46, XY ;女46, XX。（二）正常人体细胞核型的分析1、计数：将标本片上染色体计数，应为 46条。2、识别：将染色体识别分组。3、染色体核型分析系统进行核型分析4、分析结果：如为男性核型应为46, XY;女性为46, XX。四、复习思考题：1、什么是核型？人的正常核型如何表示？2、判断核型是否正常有些什么表示？ 五、作业：分析男性或女性的 G

16、显带核型。2-3、染色体显带技术一、实验目的了解G显带标本的制作过程；并通过G显带核型分析，初步掌握各号染色体G带的带型特征。二、实验原理G显带染色体：G带技术是其中最常用的技术，由Pardue和Gall （ 1970）建立。中期染色体经胰酶处理及 Giemsa染色后，能在其长轴上显示出明暗交替的横纹，每个染色体都 有特定的带纹，可应用染色体分带技术，来准确地辨别每个染色体。一个细胞中期分裂相的 G显带技术，每个染色体被染成深浅相间的带纹，浅的部分称为明带或浅带，深的部分称为暗带或深带。G带反映了染色体 DNA上A -T的丰富区，在人类中约有 2000条G带可被鉴 别，在间期核呈固缩状态，而且

17、是 DNA晚复制区之一。有相当一部分中度重复序列DNA可能在G带区，Giemsa染料在G带区是与DNA结合，而且与结合 DNA的染色质非组蛋 白有关。G带区位于染色体的两臂上，和 Q带区相对应，而与R带区相反。人类细胞染色体共分24种不同的带纹（22对常染色体和 X、丫染色体）染色体显带技术是在非显带染色体的基础上发展起来的，它能显示染色体本身更细微的结构，有助于准确的识别每一条染色体及诊断染色体异常疾病。显带染色体是染色体标本经过一定程序处理，并用特定染料染色，使染色体沿其长轴显现明暗或深浅相间的横行带纹，称为染色体带，这种染色体显带的技术，称为显带技术。通过显带技术，使各号染色体都显现出独

18、特的带纹，这就构成了染色体的带型。每对同源染色体的带型基本相同而且稳定，不同对染色体的带型不同。在所有的显带技术中，G显带（G banding）是最常见的显带技术，它是将染色体标本用碱、胰蛋白酶或其它盐溶液处理后，再用Giemsa染液染色，在普通显微镜下，可见深浅相间的带纹，称 G带（G band）。G显带方法简便，带纹清晰，染色体标本可以长期保存， 因此被广泛用于染色体病的诊断和研究。一套单倍体染色体带纹数仅有320条带。70年代后期，由于技术的改进，可以从早中期、前中期、晚前期细胞得到更长、带纹更丰富的染色 体。一套单倍体染色体即可显示550850条或更多的带纹。即在原有的带纹上分出更多的

19、带，这种染色体称为高分辨显带染色体（ high resolution banding chromosome , HRBC ）。G带识别注意事项A 一秃二蛇腰三蝶飘B四像鞭炮五黑腰C 六是小白脸 七上（着丝粒上部深染）八下（着丝粒下部深染）九苗条 十号长 臂近带好 十一低（脚深染）来十二高（头深染）D 十三下（下部深染）十四中（中部深染）十五上（上部深染）E十六长臂缢痕大十七长臂带脚镣十八人小肚皮大F 十九中间一点黑二十头重脚轻G二H一像葫芦瓢二十二头上一点黑X 一肩挑Y黑脚丫三、实验准备（材料、试剂、仪器）染色体显带技术的实验准备除必要的器材（普通光学显微镜、37c水浴箱、普通冰箱、立式染缸、

20、直头小吸管、橡皮吸头、 pH试纸、吸水纸、扣染玻璃板、擦镜纸、镣子）和试 剂（0.9%生理盐水、0.025%胰蛋白酶溶液、Giemsa染液、3.8%NaHCO ）外，应选择已制片 的染色体标本背景干净、分裂相较多、染色体分散良好的玻片。片龄25天最宜，此制片需经80 c烘烤四、实验方法与步骤 （一）实验步骤.首先将配制好的 0.025%胰酶溶液装入立式染色缸中并调pH值77.2,并将其放入37 c恒温水浴箱中预温。.取染色体制片一张置胰酶缸中处理15sec左右，迅速投入 0.9%生理盐水缸中漂洗数sec （可准备两缸盐水，做两次漂洗）。.用自来水稀释后的 Giemsa染液（自来水：吉姆萨原液

21、=8 ： 1）扣染15min 20min。.将标本用自来水冲洗、晾干，必要时可封片、镜检。镜检时，先在低倍镜下选择分 散好、长度适中的分裂相，然后转换油镜观察其显带的情况，选择显带好的标本进行G显带核型分析。.挑选出分裂相数目完全且带纹清晰的分裂相，进行显微照相、冲洗、放大，制成人 外周血淋巴细胞G显带中期分裂相照片。（二）G显带核型分析准备G显带中期分裂相照片一张，将各条染色体逐一剪下，根据其大小、带型特 点和着丝粒位置，依次分组、配对和排列组合，待检查无误后，贴在报告纸上。 写出核型的简式（繁式）。（三）注意事项.如在滴片后第二天进行 G显带，可在胰酶处理前，将染色体制片置80 c烤箱烤

22、片两ho.胰酶预温时要注意预温温度，温度过高，胰酶变性失效。.胰酶溶液需在使用前新配制。染色体在胰酶中的处理时间可因制片质量、片龄 不同而不同。在不同个体的染色体制片中也可有差异，此外，不同厂家生产的胰酶或不同批号的胰酶，在处理时间上都可有差别，故每次进行染色体G显带时，最好先试做一张制片，摸索胰酶处理时间，以保证获得最好的染色体G显带标本。（四）预期实验结果及分析.获得带纹清晰的 G显带染色体标本。.在显微镜下观察染色体 G显带核型，分析染色体的数目和结构.结合实验体会，写出实验报告交老师。2.4 PTC尝味实验人类单基因遗传的性状或疾病在上下代之间的传递遵循孟德尔定律，如ABO血型、苯硫月

23、尿尝味能力、眼睑的单与双、耳垂的有或无，能卷舌和不能卷舌及额前发际的形状等均属于 单基因控制的性状， 在一个大的群体中，通过调查分析这些性状，可以对该群体的某一基因频率及基因型频率做出估计。苯硫月K （ phenylthiocarbamide , PTQ是一种白色结晶状药物，由于其含有N-C= S基团而有苦涩味，但对人无毒副作用。不同种族、民族和个体之间，对该物质的尝味能力不同， 人体对苯硫月尿的尝味能力是由一对等位基因（Tt）所控制的性状，T对t为不完全显性。正常尝味者能尝出浓度小于1/750 000 PTC溶液的苦味，为纯合尝味者，基因型为TT;而Tt基因型的个体（杂合子）尝味能力稍低，只

24、能尝出浓度为 1/40 0001/500 000的PTC 溶液的苦涩味，这种个体为PTC杂合尝味者。当 PTC浓度大于1/24 000才能尝出其苦味的人，称为PTC味盲，基因型为t t;有的味盲个体甚至对 PTC结晶也尝不出苦味来。因此， 人类对PTC尝味能力属于不完全显性遗传（半显性遗传）。而且已知纯合体味盲（tt ）者容易患结节性甲状腺肿，因此可以把PTC的尝味能力，作为一种辅助性诊断指标。我国汉族人 群中，PTC味盲名占10%。（一） 器材和试剂.器材 试管、试管架、滴管。.试剂PTC溶液的配制：取PTC粉末0.65g ,加蒸储水500ml摇匀，在室温下放置1 2天即完全溶解成原液。原液

25、的PTC浓度约为1/750。PTC尝味使用液配制：将PTC原液编为1号液，将1号液用蒸储水稀释1倍编为2号液，将2号液再稀释一倍为 3号液以此类推， 直至配成14号PTC容液,14号液浓度为1/6 000 000,将配好的14种不同浓度PTC容液分 别置于消毒好的瓶内。（二）操作程序.让受试者坐在椅子上，仰头张嘴。首先用滴管滴510滴14号液于舌根部，让受试者徐徐下咽品味，并用蒸储水作对照试验。.询问受试者能否鉴别此两种溶液的味道，若不能鉴别或不能断定，则依次用13号、12号溶液重复试验（应注意与蒸储水交替测试），直到明确鉴别出 PTC的苦味为止。. tt基因型的阈值范围为 16号液，Tt基因

26、型的阈值范围为 710号液，TT基因型 的阈值范围为1114号液。为简化操作程序，也可只用 6、7、10、11和13号5种溶液进 行测试，尝不出6号苦味者为tt基因型，尝出7号和10号液的苦味者为 Tt基因型，尝出 11号者为TT基因型。.统计所测人员的测试结果，按Hardy-Weinberg定律计算出所测人群中的 PTC尝味基因的基因型频率和基因频率。（三）注意事项PTC尝味试验所用滴管在滴液体时，注意不要接触受试者的口腔。三遗传咨询相关实验遗传咨询是通过咨询医生与咨询者共同商讨咨询者提出的各种遗传学问题和在医生指 导帮助下合理解决这些问题的全过程。在这一过程中，需要解答遗传患者或其亲属提出

27、的有关遗传病病因、遗传方式、诊断、预防、治疗、预后等问题，估计亲属或再生育时该病的再 发风险（率）或患病风险，提出可以选择的各种处理方案，供咨询者作决策的参考。遗传咨 询是在一个家庭范围内预防严重遗传病患儿出生最有效的程序。通过广泛开展遗传咨询，配合有效的产前诊断和选择性流产的措施，能降低遗传发病率，从而减轻家庭和社会的精神负担和经济负担，从根本上改善社会人口素质，因而是我国目前一项十分重要而急需开展的工作。遗传咨询流程患者就诊初诊复诊详细询问病史，填写病历体格检查，选择适当的辅助检查结合临床初步诊断，确定咨询的内容，是否是遗传病确定我室检查项目（染色体、基因）根据检查结果，确定诊断，计算再发

28、风险， 需要者进行产前诊断，商谈对策分析结果，给患者提供信息、意见，供患者参考整理资料存档遗传咨询步骤医生首先询问先证者病史。详细询问先证者自觉症状、发病年龄、发病原因、有害因素接触史等。详细询问父母双方的血缘关系，父母的职业。母亲孕期，特别是怀 孕前3个月有无接触有害因素，如射线、农药、有害化学物质、有毒气体；有无慢性病 史，如肝炎、糖尿病、肾脏病、高血压等；有无病毒感染史；有无缺氧、高热及用药史， 如安眠药、四环素、氯霉素、烷化剂等。孕妇生育史，如是否生过畸形儿、遗传病儿、 有无自然流产史等。询问家族史并绘制系谱图。询问家族史时，应从患者的同胞开始问起，然后再分别沿父系和母系追问， 尤其不

29、要遗漏先证者的I(I级亲属是指父母、 子女、同胞兄妹卜 II级亲属。将上述情况绘制成系谱图，系谱图中不仅要包括患病个体，也要包括全部的 家族成员。临床检查。按一般临床要求进行检查，但要注意肤纹的检查。对患者作必要的体检有时这类检查还需扩展到其一级亲属，特别是其父母。确定是否为遗传病： 是遗传病，还是先天性疾病？是单基因病、多基因病， 还是染色体病？从家谱调查出发，结合患者的病史、体征及实验室检查，包括染色体分析、生化检查结果等， 做出明确诊断。诊断的正确性至关重要，但有时较难做到这一点，因为许多遗传病病种发病率极低，临床上很罕见，对其认识还很不足，因此必须争取临床科 室的支援，甚至外院专家的会

30、诊。在判定是否遗传病或是哪种遗传病时应注意：与后天因素引起的先天性疾病区 另L这时往往要细查生产史(有无产伤、婴儿窒息等)及妊娠期有无接触过射线及有毒 化学物质及药物？无家族史不能排除遗传病，一方面是因为隐性遗传病往往追溯不到家族史，另一方面也有可能患者为自然突变的受累者；有些遗传病是迟发的，甚至几 十岁才发病，对这些尚未充分有临床现者，不应仓促判定为非遗传病；对那些因某种 原因而有意隐瞒病史者，医生若有觉察后，应有耐心地做充分的教育说服工作，以期获 得正确的诊断。咨询范围及相关具体内容婚育咨询(近亲结婚、自然流产、不孕不育、妊娠期间用药)，染色体病咨询，单基因病咨询，智力低下咨询，产前诊断，

31、肿瘤的咨询等。实例例1:某妇女曾生育过一先天愚型患儿，现再次妊娠，惧怕再生同病患儿前来咨询。对此病人需先核实,患儿核型是否21三体型。如果证实核型为 47, XX (XY), +21,则其再发风险为1/6501/1000。如果此妇女已32岁则再发风险会增加至 1/100(即6倍到10 倍)。又如发现母亲为易位型携带者，则风险率大大增高，此时应嘱该妇女作绒毛、羊水细 胞的产前细胞遗传学诊断。例2:某男性，38岁，两次结婚，第一任妻子妊娠 8次均于妊娠2个月左右流产，故离婚； 与第二任妻子婚后，女方受孕3次亦均在3个月内流产，要求明确流产原因及是否能再妊娠。 本例显然是男方问题，特别是因为在询问病

32、史中得知其第一妻与其离异后再婚生育正常。在3个月内自然流者 50%的病因是由于染色体异常，特别是男方原因引起的更是如此，故首先检查了男女双方核型。女方核型正常，男主有13号染色体间的平衡易位 t(13q;13q)。这类完全的罗氏易位携带者有5 种：t(13q;13q) ; t(14q;14q) ; t(15q;15q) ; t(21q;21q) 及t(22q;22q)。由于这类易位不能形成正常的配子，故不可能有正常的后代，这时应劝男方作绝育术，如双方同意可进行人工授精领养。如果是非同源罗氏平衡易位，则仍有3/4的机会生产畸形儿、流产或生育同样的携带者，对后代的危害极大，也应劝阻再次妊娠。例3:

33、 一对新婚夫妇，由于女方的弟弟患有苯酮尿症( PKU,害怕今后会生育 PKU患儿前来 咨询。此例应首先证实女方弟弟是否确为PKU患者，因高苯丙氨酸血症伴尿中苯丙氨酸旁路代谢产物增多有高度异质性，至少有8种类型，故先要确诊其为经典的苯丙氨酸羟化酶缺乏的PKU如果证实，则其父母应为杂合子携带者。这对夫妇女方为携带者的概率为2/3,男方为携带者的概率可参考我国 PKU人群发病率。根据国内 11省、市新生儿筛查资料，PKU发病率为1: 16500,由此算出基因频率约为0.0078,携带者的频率为 1/65 (2pq),故生育患儿风险为1/65X2/3X 1/ 4=1/390,风险率不高。如果风险率高者

34、，比如一对夫妇已生育过1例PKU患儿要求再次妊娠时，风险率则高达1/4。此时，一方面应向求诊者说明再次生育患儿的危险性；同时也可告知，目前我国已能应用聚合酶链反应( PCR结合寡核甘酸 探针技术对我国已发现的 11种PKU点突变(约占70%病例)进行产前诊断，提供咨询者选择。例4: 一对夫妇生了一个严重先天性聋哑患儿，此患儿呈单纯聋哑而无其他异常表现，他们 前来咨询如果再生育出现聋哑儿的机会。聋哑是非常复杂的症候群，有遗传性的，也有环境因素引起的；有先天性的，也有迟发的； 有单纯性的，也有合并其他畸形的；有完全性的，也有不完全性的。所以对待这种情况，请 耳鼻喉科专家会诊、明确初步诊断是明智的。

35、据估计耳聋发病率约为0.1%,与遗传病因素有关的病因达127种以上，有高度的遗传异质性。先天性耳聋属常染色体隐性遗传者占75%左右，常染色体显性遗传者占3%,其他原因不明者中相当一部分为多基因遗传，占20%,X连锁遗传者罕见(2%以下)。在确定上述遗传因素前还要仔细排除环境因素，诸如风疹、核黄疸、脑膜炎等。对严重性耳聋再发风险的估计可以根据Stevenson等的经验风险率(empiric risk rate)来判断，同时应考虑咨询者的实际情况。例如父母正常又非近亲结婚，生育一例患儿，查表获得再发风险为 1/6,但如果生育了 3个正常小孩，则再发风险 可低于1/6。本例父母正常又非近亲结婚，故再

36、发风险应估计为1/6。当然，如果患儿伴有其他症状，就应力求作出疾病或某种综合征的较为准确的诊断，再作再发风险的估计。同胞或子女患先天性耳叠的风险表亲属情况风险父母近亲结婚同胞1/ 42人以上耳塞父母，散发病例同胞1/ 4非近亲结婚父母，散发病例同胞1/6父母一方耳聋，散知例耳春孑女1 / 39父母一方耳聋，伴鬲亲属耳聋子女1八。父母双方耳理，伴一子女耳不同胞1/2,5父母双方耳聋，散发病例耳聋子女1/7父母双方耳聋，伴有亲属耳登子女1/3聋哑患者由于难觅对象经常与聋哑人结婚，如果大部分为常染色体隐性遗传来估计，他们的子女应全部为聋哑患者，但实际调查结果约70%子女不发病，这是由于大多数父母携带

37、者的是非等位隐性基因，因而出现双重杂合子而不发病的现象，因此对于父母聋哑的咨询应是谨慎的。尽管如此，他们生育聋哑子女的风险仍高达30%,故应嘱绝育为好。例5: 一对夫妇因生育了一个智力低下( mental retardation,MR )的患儿前来就诊，咨询能否治疗？如再生育是否会出现同样情况？本例是医生经常见到并十分棘手的问题，临床诊断常为“大脑发育不全”而无病因诊断。由于导致智力低下的原因非常多，而且许多原因又难以鉴别，所以比较合理的方法是抓住那些主要原因，以期得出初步印象。这些原因有下列几方面：(1)染色体病：染色体病中，21三体性是引起智力低下最常见的原因，占MR勺10%左右。列第二位

38、的是脆性 X综合征。因此对智力低下的患儿作染色体检查是必要的。(2)单基因病：常染色本显性遗传(AK)的智力低下较少见， 而常染色体隐性遗传 (AR) 的则较多见，如苯酮尿症、半乳糖血症、同型胱氨酸尿症、溶酶体贮积症(尤其是粘多糖病)、 小头畸形等。这类疾病约占 MR的5%左右。X连锁隐性遗传病引起智力低下者首推 G6PCa 乏症，导致新生儿黄疸诱发核黄疸，但在长江以北地区少见。(3)多基因病：这类疾病占 MR的15%20%,但往往表现为轻至中度智力低下，双 亲智商偏低。(4)环境因素：包括产伤、新生儿窒息缺氧、风疹、巨细胞病毒、致畸药物或毒物、 宫内生长迟缓等。所以在对智力低下儿进行遗传咨询

39、时，应先了解病史、生产史、家族史及检测智商(或根据自理生活能力、 语言能力或学习成绩作智力初步判断)了解智力低下的程度， 尽可能排除环境因素，最后根据伴发症状或体征作出拟诊。伴有形态学异常者必须作染色体检查。疑患遗传性代谢病者应做相应的生化学或分子遗传诊断。如果仍然找不出原因，就可能为多基因智力低下或其它未知病因。咨询者最关心的是治疗问题，对于一些查明原因的代谢病如苯酮尿症、半乳糖血症、家族性甲状腺肿，可早期进行预防性治疗，“禁其所忌”效果很好。其次，咨询者关心的是再 生育问题，应告知防治 MMZ首先着眼于围产期保健，特别是避免产伤、新生儿窒息、缺氧 等情况；对父母中有G6P呦乏者应及早查脐血

40、，如发现婴儿G6PDfe乏应采取措施防止核黄 疸出现；对染色体异常者，如要再生育则必须作产前细胞学诊断。应该承认并向咨询讲清，目前大多数智力低下儿尚无有效的药物，故应对智商高低不同者分别加以处理：智商在 50-70者可训练做简单性技术工作或进弱智学校；智商在35-49者只能自理生活；智商在 35以下者，则只能由他人照顾和监护。至于再次生育的再发风险 依不同疾病而定。如考虑为多基因遗传的，再发风险V5%,如已生育2个智力低下患儿则再发风险增至10%,患儿二级亲属再发风险约为1%。例6 :女性，22岁，由于本人无月经，外生殖器发育异常，前来求诊，咨询是否可结 婚，婚后能否生育。体检中发现该女性阴蒂

41、肥大，呈龟头状，阴道末端与尿道同一开口，第二性征呈女性， 乳房发育，腋毛与阴毛均呈女性分布，子宫、输卵管及卵巢可扪及。由于外生殖器特点及无月经应考虑两性畸形的可能性，此时作染色体检查是必要的。因为两性畸形分布真性与假性两类：真性具有两种性别表型，既有睾丸又有卵巢，核型多为46, XYZ46, XX嵌合体；而男性假两性畸形，即睾丸女性化综合征，核型为46, XY,具有女性性征。本例核型检查结果为46, XX/ 46, XY,结合临床表现诊断为真两性畸形。这类问题的处理宜极慎重，要充 分考虑其性腺及外生殖器发育情况、年龄、社会性转化。在剖腹探查后发现左侧为卵睾，由于卵睾有可能恶性变， 故建议切除，

42、手术将阴道和尿道分开并做阴道成形术，这样婚后有正常性生活，并有可能妊娠。例7: 一位妇女，有一健康女孩已4岁，最近生育第二胎为男孩，于出生4天后出现严重新生儿溶血性黄疸，抽搐死亡，前来咨询原因及今后能否再生育健康男孩。 这种情况应考虑三种可能性：(1)Rh血型不符合：这种情况在我国不多见，因我国人群中Rh阴性血型仅占1%3%。 为排除Rh血型不符合可作母亲 Rh血型检查，如母亲为 Rh阳性，则可排除。) ABO血型不符合：例如母亲为 O型血，父亲为 A型、B型或AB型，导致胎儿为 A型或B型。母亲白抗A或抗B抗体通过胎盘进入胎血可发生免疫性溶血反应致核黄疸，可致命或导致智力低下，这种情况在我国比较常见，北方约半数新生儿黄疸是由此引起。 但仅查 出母子ABO血型不合还不能确诊，尚需检查新生儿血中否有抗A或抗B抗体，母血中抗 A或抗B和抗体滴度也应相当高。ABOB型不合导致溶血一般较轻， 引起核黄疸致死者较少见。） G6PW乏症：这是我国南方新生儿溶血性黄疸最常见的原因，据统计占这类黄疸 病例的1/2左右。本例除应查证父母 ABO Rh血型外，应查母亲血 G6P前性。尽管第二胎男孩已故，仍应多考虑为G6PW乏症致死。应嘱咨询者如再生育时应留脐血作G6P前性检查。如证实婴儿为G6P呦