感染性疾病的免疫学检验要求

1、第十三章感染性疾病的免疫学检验要求 返回总目录目录 概述 1有关检测抗体的感染诊断试验2有关检测抗原的感染诊断试验33第一节 概述一、固有免疫 固有免疫（innate immunity）亦称天然免疫或非特异性免疫（no-specific immunity），是人类在长期的种系发育和进化过程中，逐渐建立起来的一系列防御病原体等抗原的功能。 构成机体抗感染的第一道防线。 4应答特点 固有免疫适应性免疫发挥作用时效即刻96小时内 96小时后特异性无，遗传决定，生来具备有，后天获得，抗原刺激形成识别方式模式识别 表位识别作用特点无须增殖分化,应答迅速，作用抗原范围广抗原特异性淋巴细胞克隆扩增,抗原识别

2、专一，有免疫耐受固有免疫与适应性免疫应答特点比较应答特点 固有免疫适应性免疫作用持续时间短，无免疫记忆长，有免疫记忆,两者关系启动和调节特异性免疫，参与适应免疫的效应阶段特异性淋巴细胞释放的效应分子可进一步激活固有免疫固有免疫与适应性免疫应答特点比较6固有免疫适应性免疫宿主免疫力体液免疫细胞免疫第一道防线第二道防线第三道防线皮肤黏膜屏障血-胎屏障血-脑屏障细胞(M细胞,NK细胞,肥大细胞等)分子(CK,补体,溶菌酶,防御素等)调理作用ADCC作用I型超敏反应调节适应免疫促进细胞活化参与固有免疫细胞因子、抗体导致固有免疫与适应性免疫的关系（一）固有免疫的屏障结构 1）物理屏障作用 2）分泌杀菌物

3、质 3）正常菌群的拮抗作用皮肤与粘膜婴幼儿血脑屏障未发育完善 腔血管周细胞内皮细胞紧密连接神经元 基膜星状胶质细胞淋巴细胞肥大细胞中性粒细胞内皮细胞紧密连接 基膜 小胶质细胞 脑血血脑屏障妊娠前三个月，胎盘屏障未健全。 胎盘屏障中性粒细胞和单核/巨噬细胞的特点特点中性粒细胞单核/巨噬细胞形体小吞噬细胞大吞噬细胞分布外周血血液、组织中寿命短、更新快长、组织中存活数月血中数量多，占白细胞70%少，占白细胞8%细胞器及其内含物碱性磷酸酶、溶酶体、溶菌酶、防御素酸性磷酸酶、溶酶体、溶菌酶、丰富的线粒体（二）固有免疫的效应细胞吞噬过程吞噬细胞的杀伤机制 氧依赖性途径，亦称呼吸爆发或氧爆发：吞噬细胞的杀伤

4、机制 反应性氮中介物（reactive nitrogen intermediate,RNI）产生超氧离子 O2 NADPH NADPH氧化酶 O2 NADPH产生过氧化氢 2O2 2H2 过氧化物歧化酶 H2 O2 O2产生盐酸 H2 O2 ClH HOCl H2 O产生有机氯胺 HOCl R-NH RNClH2 O产生单个氧原子 H2 O2 OCl 1 O2 H2 O Cl 产生羟基游离基 H2 O2 O2 O2 OHOH 产生 精氨酸/O2 瓜氨酸 NO产生过氧化氮游离基 NO O2 ONOO反应性氧中介物（reactive oxygen intermediate,ROI）吞噬细胞的杀伤机

5、制 非氧依赖性途径：吞噬细胞防御素和蛋白水解酶溶菌酶、 细胞分布和作用特点生物学作用DC组织和血液,提呈抗原，释放多种细胞因子抗感染、抗肿瘤、免疫调节和T细胞分化NK细胞直接/ADCC作用杀伤靶细胞,释放多种细胞因子抗肿瘤、抗感染、免疫调节、移植排斥反应和自身免疫病T细胞外界相通腔道粘膜表面和皮下组织,TCR无多样性抗肿瘤,并被视为抵御胞内菌和病毒感染的第一道防线几种固有免疫细胞的特点及生物学作用细胞分布和作用特点生物学作用NK T细胞表达NK1.1和TCR、CD3，主要位于肝脏和骨髓非特异性杀伤效应,且无MHC限制性;具有免疫调节作用B1细胞胸腔、腹腔和肠壁固有层中,分泌IgM类抗体,BCR

6、无多样性早期抗感染、维持自稳和免疫调节的功能肥大细胞浆膜层、血管壁周围；脱颗粒和分泌细胞因子抗感染、抗肿瘤和免疫调节作用;I型超敏反应几种固有免疫细胞的特点及生物学作用（三）固有免疫的效应分子 1. 补体2. 溶菌酶(lysozyme)：存在于吞噬细胞溶酶 体及血清、唾液、泪液、鼻涕等体液中， 主要作用于革兰阳性菌胞壁肽聚糖。3. 防御素（HNP14）：主要存在于中性粒细 胞的嗜天青颗粒及人肠细胞中，通过破坏 细胞膜而杀死细菌。补体溶菌酶（四）固有免疫的应答机制1.固有免疫的识别对象病原相关分子模式 病原微生物及其产物共有的保守结构，统称为病 原相关分子模式（pathogenassociate

7、d molecular pattern，PAMP）。 2.固有免疫识别方式模式识别 用以识别PAMP的受体被统称为模式识别受体 (pattern-recognition receptor，PRR)， 由于PRR特有的识别与激活方式，使得数量有限 的模式识别受体可应对、识别种类众多的PAMP。 G 菌细胞壁G 菌细胞壁（PGN）（LPS） (LTA) 某些病毒和真菌成份；细菌DNA/双链RNA;机体死亡和突变、受损及老化的细胞。（PGN）病原相关分子模式（PAMP）的组成分泌型膜型胞内型 模式识别受体(PRR)的组成模式识别受体（PRR）配体（PAMP）生物学活性分泌型甘露聚糖结合凝聚素(MBL

8、)微生物表面的甘露糖和岩藻糖调理作用;MBL途径激活补体C-反应蛋白（CRP）细菌细胞壁磷酰胆碱调理作用;补体活化;炎症指标LPS结合蛋白（LBP）G菌LPS将LPS传递给CD14PRR与其配体PAMP及生物学活性模式识别受体（PRR） 配体（PAMP）生物学活性细胞膜型甘露糖受体（MR）甘露糖和岩藻糖残基吞噬作用CD14G菌LPS促进LPS与TLR结合清道夫受体（SR）G菌LTA，G菌LPS吞噬作用;清除LPS等Toll样受体（TLR）11种(TLR111)；仅TLR9存在于细胞内细菌的PGN、LTA、脂蛋白;分枝杆菌细胞壁组分;钩体LPS;真菌酵母多糖;白色念珠菌的磷脂酰甘露糖;麻疹病毒的

9、血凝素;病毒RNA;单独或组合识别，激活胞内信号NF-B、诱生黏附分子和炎性细胞因子;参与过敏反应、自身免疫病及肿瘤免疫。PRR与其配体PAMP及生物学活性识别特点固有免疫适应性免疫识别对象识别PAMP识别微生物/非微生物抗原识别特异性泛特异性，仅能识别各类微生物的某些结构或代谢产物特异性,识别抗原表位,可区分不同微生物或同一微生物不同抗原组分受体基因胚系基因编码,多样性有限TCR和BCR基因在个体发育过程中重排，具多样性 固有免疫与适应性免疫应答的识别特点识别特点固有免疫适应性免疫受体存在方式 非克隆化，同一类型细胞（如M）表达的PRR特异性相同克隆化,高度特异性的不同细胞克隆表达不同识别受

10、体 受体发挥作用快速生物学反应，效应细胞PRR识别PAMP后立刻被激活较慢，TCR或BCR识别抗原表位，启动双信号，继而产生效应物质固有免疫与适应性免疫应答的识别特点（五）固有免疫的生物学意义1. 抗感染的第一道防线 2. 对非感染性疾病的影响 抗肿瘤作用 移植排斥 非IgE依赖性的过敏样反应3.参与特异性免疫应答 启动特异性免疫应答 参与效应阶段 调节特异性免疫应答固有免疫对特异性免疫的调控天然免疫或称自然免疫： 人体对各种微生物的感染有着天然的抵抗力。获得方式：机体感染病原体 胎儿经胎盘 新生儿经母乳人工抗感染免疫： 是为了达到防治疾病的目的，利用自然免疫的规律，人为地建立机体的抗感染免疫

11、。二、人工抗感染免疫 获得方式 实例自动免疫 自然主动免疫 显性或隐性感染 人工主动免疫 接种Ag:疫苗、类毒素被动免疫 自然被动免疫 通过胎盘、母乳 人工被动免疫 注射抗毒素、Ig人工过继免疫：输入致敏LC、淋巴因子、iRNA特异性免疫的获得方式与分类（一）人工主动免疫人工主动免疫(artificial active immunization) ： 用人工的方法将抗原物质接种入机体，诱导免疫系统产生特异性免疫。免疫预防(immunoprophylaxis)：主要措施是接种疫苗，其接种的理论基础是诱导适应性免疫以及淋巴细胞能对病原体抗原产生记忆的能力。 生物制品：是用于人工免疫的疫苗、类毒素、

12、免 疫血清、免疫细胞、细胞因子以及免疫诊断用品 的统称。1.疫苗(vaccine) 用于人工主动免疫 的抗原统称。2.类毒素（Toxid）细菌外毒素经 0.3%0.4%甲醛处理，使其毒性 减弱而保留其免疫原性。3.联合疫苗 类毒素与死疫苗混合。 4.新型疫苗 组分疫苗或第二代 疫苗，以能诱导有效保护性反 应的抗原成分制备的疫苗。 区别要点灭活疫苗 减毒活疫苗制剂特点死，容易获得活、弱毒、无毒,很难获得剂量及次数量大，23次量小，多为1次副作用较小较大，有类似自然感染的过程免疫效果较低，6月2年，体液免疫较高，35年，体液/细胞免疫灭活疫苗与减毒活疫苗的区别及抗原制剂区别要点灭活疫苗 减毒活疫苗

13、稳定性稳定，易保存，有效期约1年不稳定，难保存，4冰箱保存数周常用疫苗百日咳、伤寒、流感、钩体病、斑疹伤寒、流脑、狂犬病、甲肝、霍乱、鼠疫及乙型脑炎等疫苗BCG、腮腺炎、麻疹、脊髓灰质炎、风疹及水痘等疫苗灭活疫苗与减毒活疫苗的区别及抗原制剂（1）亚单位疫苗（subunit vaccine） 是去除病原体中与激发保护性免疫无关的甚至有害的成分。（2）合成肽疫苗 (synthetic peptide vaccine) 将具有保护性免疫力的人工合成肽与适当载体结合后，再加入佐剂制成的疫苗。 新型疫苗（3）基因工程疫苗（DNA 疫苗，DNA vaccine） 用编码病原体有效免疫原的基因与细菌质粒构建

14、的重组体直接免疫机体，转染宿主细胞，使其表达保护性抗原，诱导机体产生特异性免疫的疫苗。（1）重组抗原疫苗(recombinant antigen vaccine) 是利用DNA重组技术制备的只含保护性抗原的纯 化疫苗。核酸疫苗 （第三代疫苗）（2）重组载体疫苗(recombinant vector vaccine) 是将编码病原体有效免疫原的基因插入载体基因 组中，接种后，随疫苗株在体内的增殖，大量所需 的抗原得以表达。 人工被动免疫(artificial passive immunization) 经人工方法给机体输入含特异性抗体的免疫血清 或细胞因子等制剂，达到紧急预防和治疗的目的。 （二

15、）人工被动免疫1.抗毒素（antitoxin）2.细胞因子制剂3.胎盘球蛋白和 血浆丙种球蛋白比较项目人工主动免疫人工被动免疫免疫物质抗原抗体或细胞因子等免疫产生时间较慢,24w快,立即免疫维持时间长,数月数年短,23w主要用途预防,治疗治疗或紧急预防常用制剂疫苗,类毒素抗毒素,胎盘/丙种球蛋白,CK,McAb人工主动免疫与人工被动免疫的比较 计划免疫(planed immunization)： 是根据某些特定传染病的疫情监测和人群免疫 状况的分析，有计划地用疫苗进行免疫接种，预 防相应的传染病，以最终达到控制以至最后消灭 传染病的目的而采取的重要措施。 免疫程序：对儿童、成人、特殊职业和特殊

16、地区人 群的免疫程序有所不同。（三）计划免疫免疫年龄 疫 苗基础接种出生 卡介苗 乙型肝炎疫苗11个月 乙型肝炎疫苗22个月脊髓灰质炎疫苗13个月脊髓灰质炎疫苗2 百白破14个月脊髓灰质炎疫苗3 百白破25个月百白破36个月 乙型肝炎疫苗38个月 麻疹疫苗我国实施儿童计划免疫程序免疫年龄疫 苗加强免疫1岁半脊髓灰质炎疫苗 百白破4岁脊髓灰质炎疫苗 麻疹疫苗/麻腮风疫苗 7岁卡介苗* 麻疹疫苗/麻腮风疫苗 白破类毒素 12岁卡介苗* 乙型肝炎疫苗我国实施儿童计划免疫程序 扩大免疫规划：1. 甲肝肝炎、流脑、乙脑、腮腺炎、风疹疫苗纳 入国家免疫规划2. 根据传染病流行趋势，对特定人群进行出血热、

17、炭疽和钩体疫苗的接种 禁忌证 预防接种的1. 免疫功能缺陷2. 高热，严重心脏病，肝肾病，甲亢等3. 妊娠期及月经期4. 湿疹及其他严重皮肤病（四）疫苗接种效果监测效果的评价一般采用的程序：选取人群接种疫苗抽取血样检测特异性抗体统计学处理监测出疫苗接种成功率返回章目录44第二节 有关检测抗体的感染诊断试验 一、不同病原生物感染抗体产生的特点 IgM类抗体出现早，消失快，是早期诊断的指标； IgG类抗体出现晚，体内持续时间长，是慢性感染、 回顾性诊断和流行病学调查的指标； 取患者急性期和恢复期（双份）血清标本，结果后 者比前者有4倍或4倍以上增长，具有诊断意义。45（一）细菌感染抗体产生的特点

18、细菌：是一群体积微小结构简单的原核细胞型微生物。 按感染状态细菌可分为两类：共生菌：多数共生菌在正常情况下对人体无害， 但在某些情况下可成为致病菌，称为条件致病菌；异生菌：由体外入侵的各类病原菌，引起各种感染性疾病，是人体免疫防御的主要对象。它们感染机体后，与宿主细胞可形成胞外感染和胞内感染两种形式。46特异性抗体发挥抗菌作用的机制 中和致病物质的活性： 调理吞噬： 激活补体： 阻断某些受体与配基结合：47细菌感染抗体产生的特点 抗体的量常随感染过程而增高：效价或滴度升高； 各类型Ig分布不同： IgG类分布广，是特异性抗菌作用的主要效应分子； IgM仅存在于血管内，出现早，消失快； sIgA

19、存在局部，参与黏膜免疫的重要抗体； 特异性抗体对胞内感染细菌难以发挥作用：胞内菌的 清除主要借助T细胞介导的抗菌作用。48隐性感染：感染后无明显临床症状者；显性感染：感染后有明显临床症状者； 急性感染：起病急，病程短（数天至数周），病 愈后病毒于体内失； 持续性感染:病程长，病毒长期存在体内甚至终生。 潜伏感染 慢性感染 慢病毒感染（二）病毒感染抗体产生的特点 病毒：是一类专性细胞内寄生的非细胞型微生物。 病毒感染类型： 潜伏感染 慢性感染 V 诱因 V V 诱因 死亡 慢病毒感染病毒的复制过程生物合成 病毒繁殖特点：不能在体内独立生存和复制。 51病毒感染抗体产生的特点 针对病毒结构蛋白的特

20、异性抗体： 衣壳蛋白 病毒结构蛋白 基质蛋白 包膜蛋白 中和抗体：对机体具有保护作用，其与病毒特异性 结合，可使病毒失去感染能力。 非中和抗体：无抗病毒作用，对病毒感染的诊断及 鉴别诊断意义重大52病毒中和抗体的三类Ig主要特点特点IgMIgGsIgA产生时间35天5天；1020天达高峰稍后维持时间短长短作用机制强;中和血中病毒;固定补体发挥CDC效应而破坏受染细胞和胞膜病毒最强;中和体液中病毒，ADCC和DCD效应,破坏受染细胞;病毒与Ab形成IC易于M吞噬黏膜固有层分泌液中;在局部黏膜免疫中发挥重要作用病毒中和抗体的三类Ig主要特点特点IgMIgGsIgA临床意义宫内感染指标；近期感染诊断

21、持续感染指标,疫苗接种后效果的监测防御呼吸道、消化道等被病毒侵入54机体抗病毒免疫 胞内的病毒清除： CD8+ CTL： NK细胞、IFN和中和抗体共同 CD4+ Th：发挥抗病毒免疫作用 病毒性状稳定、引起全身感染且有明显病毒血症 者，病愈后可获得持久甚至终身免疫 抗原性易发生变异的病毒，局部或黏膜表面的感 染，只能获得短暂的免疫力55 真菌：是一类真核细胞型微生物。 （三）真菌感染抗体产生的特点 深部真菌感染可刺激机体产生相应抗体。 保护性抗体在抗深部真菌感染中发挥 一定作用 特异性抗真菌作用主要依赖于特异性T细胞。 Thl还可诱发迟发型超敏反应，控制真菌感染的扩散。56（四）寄生虫感染抗

22、体产生的特点 寄生虫：是失去自生生活能力，长期或短暂的依附于另外一种生物的体内或体表，获得营养并给宿主造成损害的低等无脊椎动物和单细胞原声生物。 诱导体液免疫可出现IgM、IgG类抗体： 肠道寄生虫可诱生sIgA； 蠕虫可诱生IgE，IgE参与机体抵御蠕虫感染。57抗寄生虫抗体的作用阻止寄生虫迁移或进入细胞内激活补体裂解寄生虫或其幼虫调理吞噬杀伤某些寄生虫NK细胞杀伤某些寄生虫 T细胞的抗寄生虫作用比抗体更重要58（一）细菌感染的相关抗体检测-1抗链球菌溶血素“0”(anti-streptolysin，ASO)ASO 乙型溶血性链球菌代谢产物 溶血素“0” 抗原性强 感染 12周抑制 二、检测

23、抗体诊断感染的应用评价ASO检测常用的免疫学技术：乳胶凝集试验、免疫比浊法、溶血抑制试验及ELISA法等，特异性强，且均可定量检测。601 2 3 4 5 6(周) 月 年ASO链球菌感染后 A族溶血性链球菌引起感染CRP血沉可考虑风湿热活动期不一定是近期感染应作动态观察三项均高ASO增高的临床意义61（一）细菌感染的相关抗体检测-2抗伤寒和副伤寒沙门菌(Salmonella) 抗体检测 沙门菌属：是一群寄生于人类和动物肠道中，生化 反应和抗原构造均相似的革兰阴性杆菌。肥达（Widal）反应：用已知伤寒沙门菌鞭毛（H） 抗原和菌体（0）抗原及甲、乙、丙三种副伤寒沙 门菌(分别以A、B、C表示)

24、鞭毛抗原，检测待检 血清中有无相对应的抗体，称为肥达反应。62TOTHPA/PB/PC伤寒可能性大 伤寒早期或其他菌感染致交叉反应曾患伤寒病或伤寒疫苗接种后或非特异性回忆反应 TOTHTHTOTH副伤寒甲或乙或丙 双份血清效价4倍有诊断价值TO1:401:801:160TOTH1:320伤寒可能性小 TOTH感染1周肥达反应的临床意义63Vi抗体测定：Vi抗原位于伤寒、丙型副伤寒沙门菌 等少数菌株的最表层，与细菌的毒力有关而得名。 Vi抗原的免疫原性弱，Vi抗体效价低。 间接血凝试验检测Vi抗体。Vi抗体检测的临床意义： 菌体被清除，有助于伤寒、副伤寒带菌者的诊断 体内有活菌存在 应结合粪便或

25、尿进行细菌分离培养，以确定是否带菌者。抗体含量检测时间64（一）细菌感染的相关抗体检测-3抗结核杆菌抗体检测 结核杆菌是毒力强、能引起机体 各组织器官感染而致结核病的病原菌。 ELISA间接法、免疫浊度法等测定各种体液中IgG抗 体水平，或采用测定特异性IgG类IC。结核病的免疫属于传染性免疫或有菌免疫，只有当结核杆菌在体内存在时才有免疫力，当体内结核杆菌消失，抗结核免疫也随之消失。 产生IgM、IgG、IgA类抗体，但无保护作用。66 抗结核杆菌抗体检测的意义在于： 活动型结核患者IgG抗体水平明显增高（此时细 胞免疫反而降低），病变重、受损范围大则抗 体产生多； 检测各种体液中IgG抗体水

26、平，协助诊断活动性 结核病； 活动性结核病患者体液中特异性IgG类Ig会明显 增加，优于特异性IgG的检测。67细菌所致疾病检测方法及评价临床意义脑膜炎奈瑟菌流脑(普通/暴发/慢性败血症型);ELISA法, IIF法,间接血凝试验,协同凝集试验等1周抗体产生,2个月后下降, 双份血清抗体效价4倍可实验确诊布鲁菌布鲁菌病,人畜共患病玻片、试管、胶乳凝集试验;2种方法同时实验可靠1周有IgM;3周有IgG,维持时间长,诊断慢性布氏菌病细菌感染抗体的检测、方法评价和临床意义细菌所致疾病检测方法及评价临床意义幽门螺杆菌慢性胃炎、胃溃疡、胃癌等ELISA法,IIF法,免疫印迹法等敏感性高,特异性强IgG

27、升高为慢性感染,治疗6个月后降低为有效;IgA阳性有胃炎活动嗜肺军团菌军团菌病(流感样/肺炎/肺外感染型);医院感染微量凝集试验;IIF;ELISA。偶见与衣原体/支原体/绿脓杆菌发生交叉反应抗嗜肺军团菌抗体阳性是诊断依据;双份血清抗体效价4倍可实验确诊细菌感染抗体的检测、方法评价和临床意义69肝炎病毒（hepatitis virus）是一大类能引起肝炎的 嗜肝病毒。病毒性肝炎(viral hepatitis)：是由多种肝炎病毒所致 一组以肝脏损伤为主的全身性急性或持续性传染病。病毒性肝炎血清标志物：病毒本身、病毒抗原成分及 病毒的抗体等。检测方法：ELISA、RIA、CLIA及DIBS法，敏

28、感性 高，特异性强，能定性和自动化分析，可准确地进 行肝炎病毒的分型。 （二）肝炎病毒的抗原抗体检测70类型 传播途径 病毒核酸类型HAV 粪口 RNAHBV 血行、垂直 DNAHCV 血行、性接触 RNAHDV 血行、垂直 RNA（重叠HBV感染）HEV 粪口 RNAHFV 血行 RNAHGV 血行、垂直 RNA（重叠HCV、HBV）TTV 输血 DNA肝炎病毒的类型及其传染途径：71甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)是引起甲型肝炎的病原体。只有一个血清型。HAV经粪-口途径传播：HAV口咽部、肠黏膜和局部淋巴结大量增殖肝细胞复制胆囊胆汁肠道粪便。总抗体：HAV进人人

29、体后，可刺激机体产生抗-HAV （IgM、IgG、IgA和IgE类）。抗-HAV为HAV感染的特异性诊断指标：1.抗甲型肝炎病毒抗体72血中病毒粪便中病毒转氨酶黄疸早期诊断，新近与既往感染的有效证据疫苗接种后抗体阳转率是考核疫苗效果的指标甲型肝炎的临床表现与血清学检测73 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV) 是乙型肝炎的 病原体。为嗜肝DNA病毒。 有感染性的病毒颗粒即Dane颗粒: 传播方式：经输血、注射血液制品、性接触及母婴垂 直等，HBV通过破溃的皮肤和黏膜侵入机体，传染 源是乙型肝炎患者和HBV携带者。 传染性：潜伏期、急性期、慢性活动期患者血清。2.乙型肝炎病

30、毒血清标志物74有感染性的病毒颗粒即Danes颗粒HBsAgHBcAg双链DNADNA聚合酶二十面体核衣壳D小表面蛋白(S) D中表面蛋白(S+PreS2)大表面蛋白(S+PreS2+PreS1)D75 两对半检测： HBsAg及抗-HBs、HBeAg及抗-HBe、抗-HBc 检测方法： 抗原：双抗体夹心法 ELISA法检测 抗-HBs：间接法 抗-HBe和总抗-HBc：竞争法 抗-HBc-IgM：捕获法 金标记免疫层析或渗滤试验：HBsAg单项检测 快速、简便2.乙型肝炎病毒血清标志物HBsAg / HBeAg （+）3.加酶标抗-HBs/e 4.加底物显色2.加待检血清1.抗-HBs或抗-

31、HBe包被载体YYYEYEYEYYYYYYYEYEYEYYYY洗涤洗涤洗涤结果ELISA双抗体夹心法测HBsAg / HBeAg4.底物显色2.加待检血清1.已知HBsAg 包被载体抗-HBs （+）YYY3.酶标动物 抗人IgGYYYYEYEYEYYYYEYEYE洗涤洗涤洗涤结果ELISA间接法测抗-HBs抗-HBc（+）4.加底物无色2.加待检血清 和HBeAg洗涤1.抗-HBe包 被载体YYYYYYYYYYYYY3.加酶标抗-HBe洗涤YEYEYYYYYYE洗涤3.加底物无色2.加待检血清 和酶标抗-HBc洗涤1.已知HBcAg包 被载体YYYEYYYEYE洗涤抗-HBe（+）结果结果竞

32、争法：抗-HBc 抗-HBe79血清标志物临床意义传染性HBsAg抗-HBsHBeAg抗-HBe抗-HBcIgMIgG潜伏期、早期、HBsAg携带者、普查高急性/慢性乙肝、HBsAg携带者高急性乙肝“大三阳”高慢性乙肝“大三阳”高后期、慢性HBsAg携带者“小三阳”弱HBV感染血清标志物检测结果及临床意义血清标志物临床意义传染性HBsAg抗-HBsHBeAg抗-HBe抗-HBcIgMIgG急性重症乙肝、慢性活动乙肝高痊愈、既往感染恢复期、有免疫力无既往感染恢复期、有免疫力无急性重症乙肝早期、恢复早期无HBV感染血清标志物检测结果及临床意义血清标志物临床意义传染性HBsAg抗-HBsHBeAg抗

33、-HBe抗-HBcIgMIgG急性感染窗口期、低水平慢性感染，既往感染未检出抗-HBs未知很早以前曾感染过或疫苗接种无末感染过HBV、无免疫力无HBV感染血清标志物检测结果及临床意义82PreSl及抗-PreSl、PreS2及抗-PreS2检测1）PreSl 和(或) PreS2阳性提示HBV复制活跃，有 较强的传染性2）抗-PreSl是中和抗体，能阻止HBV侵入肝细胞 3）抗-PreSl在急性期和恢复期早期出现，预后良好 2.乙型肝炎病毒血清标志物83 丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是丙型肝炎的 病原体，为正股单链RNA病毒 主要经血液传播，也可能存在母婴垂直传播

34、、性传 播和家庭内接触传播等途径 HCV同时重叠其他肝炎病毒感染常致重症肝炎 HCV刺激机体产生抗-HCV抗体（IgM和IgG类） 均为非保护性抗体3.抗丙型肝炎病毒抗体84HCV通常同时重叠其他肝炎病毒感染85抗-HCV阳性结果是诊断HCV感染的重要标志：抗-HCV-IgM阳性: 急性HCV感染，HCV复制，是丙 肝早期诊断和传染性的敏感指标，但在慢性HCV感 染时，抗-HCV-IgM阳性也高达71%以上。抗-HCV-IgG阳性: 病后13个月出现，HCV感染恢 复期的抗体，愈后抗-HCV-IgG仍可持续达数年之久。丙肝患者有无传染性及病毒复制: 不能依赖抗-HCV 的检测结果，因为抗-HC

35、V产生有一段“窗口期”，血 清抗体呈阳性时，HCV仍可复制。86 丁型肝炎病毒(hepatitis D virus,HDV)是一种缺陷型 单股负链环状RNA病毒，是引起与HBV相关联的 急性和慢性肝病的病原体。 缺陷病毒：病毒复制必须在HBV或其他嗜肝病毒 的辅助下才能完成。 重叠感染：HDV复制水平高，可使乙肝慢性化或 乙肝病情加重与恶化，与肝硬化和肝癌有关。 传播途径：生活接触，也可与HBV感染相似的传播。4. 抗丁型肝炎病毒抗体87HBsAgHDAgRNAP27P24HBVHDV丁型肝炎病毒的抗原88抗-HDV抗体分析： 抗-HDV抗体（IgG和IgM类）无保护作用; 作为HDV感染的重

36、要指标; 高滴度时提示感染持续存在，当HDV感染终止， 抗体滴度下降或转阴; 用ELISA捕获法检测抗-HDV-IgM，呈一过性， 对诊断急性HDV感染有价值; 在慢性HDV感染中，抗-HDV-IgG呈高滴度，并 可存在数年; 抗-HDV阳性而HDV-Ag阴性的血清仍具传染性。89己型肝炎病毒(hepatitis F virus，HFV)：多为亚临床感染，病情及慢性化程度低于HCV感染。庚型肝炎病毒(hepatitis G virus，HGV)：多与HBV或HCV合并感染。抗-HGV抗体是诊断HGV感染的初筛试验，阳性表示受到过HGV感染。 戊型肝炎病毒(hepatitis E virus，H

37、EV) 经胃肠道传 播，症状似于甲型肝炎。抗HEV-IgM抗体阳性：急 性HEV感染或近期感染；抗-HEV-IgG持续时间长； 双份血清抗-HEV-IgG滴度4倍，急性HEV感染。其他肝炎病毒的抗原抗体检测90 呼吸道病毒：是指一大类经呼吸道传染而致病的病毒。 急性呼吸道感染约90%以上系由病毒引起。 （三）呼吸道病毒的抗体检测名称 形态 核酸型 所致疾病流行性腮 球形 RNA 腮腺炎，并发脑膜炎、睾丸炎腺炎病毒 有包膜 卵巢炎，可致不育腺病毒 球形 DNA 上呼吸道炎、肺炎、脑膜炎风疹病毒 球形 RNA 风疹，孕妇可垂直感染胎儿 有包膜 引起畸胎、流产、死胎鼻病毒 球形 RNA 成人感冒、小

38、儿支气管炎、 无胞膜 支气管肺炎92流行性感冒病毒(influenza virus)简称流感病毒属正黏病毒科RNA病毒，是流感的病原体。 甲型流感病毒流行最频繁、最易变异，可引起大流行； 乙型流感病毒也存在变异，常导致局部暴发流行； 丙型流感病毒抗原性稳定，多侵犯婴幼儿及青年， 常引起局部流行。流感病毒致病性和免疫性： 传播方式：飞沫。1. 抗流行性感冒病毒抗体NA衣壳核蛋白RNA多聚酶核心内部抗原包膜 HAHemagglutinin表面抗原：依抗原性不同分为16个H亚型和9个N亚型。流行性感冒病毒的结构剖面图94体液免疫：机体产生特异性抗体。 仅抗-HA为中和抗体，血清抗-HA可持续几十年。

39、 特异性T细胞免疫：可产生广泛的流感病毒亚型间 交叉免疫，决定了病毒的清除和疾病的恢复。抗流感病毒抗体免疫检验： 时间分辨免疫荧光技术：阳性率可达60%以上； 优点：敏感性高、特异性强、临床符合率高等。 血凝抑制试验：总流感病毒抗体的效价，急性期和恢 复期效价升高4倍，有助于回顾性诊断、流行病学 调查和疫苗接种效果监测。952.抗禽流感病毒抗体禽流感病毒(avian influenza virus,AIV) 属甲型流感病毒属，具备抗原性变异的特性。高致病性禽流感潜伏期短，发病急，发病率和死亡率高。抗AIV抗体检测：微粒中和法：抗H5抗体滴度1:80为阳性；ELISA法检测抗H5-IgG/IgM

40、滴度1:600为阳性；阳性标本应再经IBT法确证。963.抗SARS冠状病毒抗体SARS冠状病毒：是严重急性呼吸综合征(serve acute respirator syndrome，SARS)的病原体,有包膜单股正链RNA病毒。传播途径：主要是近距离呼吸道飞沫传播。 传染源：病人，带病毒的野生动物。 传染特征：潜伏期2周内，其传染性随病程而增强。 人群对SARS普遍易感，儿童感染率较低。RNA97 SARS致病特征：SARS病毒嗜肺性；损伤机体的细胞免疫功能， 特别对T细胞及NK细胞的 数量及功能有不同程度的影响。 免疫性：SARS感染机体会产生IgG和IgM抗体， IgG是一种保护性抗体，

41、获得病后免疫力。ELISA法: SARS病毒N蛋白抗原包被，双抗原夹心法测IgG; SARS病毒裂解物包被，间接法测总抗体。中和试验：双份血清平行试验，抗体转阳性或滴度 4倍升高，可作为SARS血清学诊断的金标准。99滴加不同稀释度的待检血清洗涤也用于检测抗-SARS病毒-IgM。洗涤制备抗原片IIF检测抗SARS-IgG100 应用评价： 在患者发病21天后检测到抗体比较可靠。 SARS病毒感染后1周，体内产生IgM，4周后逐 渐消失，最多可持续3个月； IgG在发病2周后检出率61%95%，在第4周时 达高峰，患者恢复后6个月仍持续高水平阳性； 双份血清IgG抗体效价升高4倍，有诊断意义。

42、 未受病毒感染的人群中检测不到抗SARS病毒抗体。101（四）抗人类免疫缺陷病毒抗体的检测人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV) 是获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)的病原体。属反转录病毒科HIV主要有两型：两者的核苷酸序列差异超过40%；HIV-1型：常称的HIV，全世界AIDS多由HIV-1所致；HIV-2型：只在西非呈地区性流行。 传播途径： CD4+T细胞CD4R103（四）抗人类免疫缺陷病毒抗体的检测潜伏感染RNA负链DNA转录合成正链DNA双股DNA（Pre-HIV）互

43、补病毒整合酶宿主细胞染色体形成 HIV进入机体后病毒开始复制，约在812w时出现病毒血症，此期病毒在体内广泛播散，并开始在淋巴样器官种植，36w在许多病人（50%70%）体内发展成急性单核细胞增多症样表现，其后大多数病毒以前病毒的形式整合于宿主细胞染色体内，进入长期的、无症状的潜伏感染期。 1)原发感染可长达6个月至10年。临床无症状，有些病人可出现无痛性淋巴结肿大。当机体受到各种因素的激发使潜伏感染的病毒再次大量增殖而引致免疫损害时，才出现临床症状，进入AIDS相关综合征期。 2) 潜伏感染(AIDS-rilated complex,ARC) 早期有发热、盗汗、全身倦怠、体重下降、皮疹及慢性

44、腹泻等胃肠道症状，并有进行性淋巴结病及舌上白斑等口腔损害。 3)AIDS相关综合征 出现中枢神经系统疾患 合并各种条件致病菌(如分枝杆菌、念珠菌、卡氏肺孢菌等)或其他病毒(如EBV，CMV、HHV-8型等)感染 并发卡波济肉瘤(Kaposi sarcoma) 感染10年内有50%的人发展为AIDS AIDS的5年间死亡率约为90% 多于临床症状出现后2年内死亡。 4)典型AIDS 抗gp120等中和抗体 HIV损伤CD4+T细胞，使免疫系统的功能失效病毒基因整合于宿主细胞染色体中，细胞不表达或 少表达病毒结构蛋白，使宿主长期呈“无抗原状态；病毒包膜糖蛋白的一些区段的高变异性，致使不断 出现新抗

45、原而逃逸免疫系统的识别；HIV对各种免疫细胞均有损害。故表明机体的免疫 力不足以清除病毒，HIV一经感染便终生携带病毒。机体对HIV感染的免疫应答ELISA、IFA、RIA: 敏感性好，应用方便。ELISA法目前最为常用。但由于HIV的全病毒抗原与其他逆转录病毒（HTLV）有交叉反应，而且病毒系芽生释放，病毒包膜中常带有细胞成分，故有一定的假阳性。因此，这类试验仅适用于筛查HIV抗体。Western Blot（WB）: HIV抗体阳性用WB法确认。检测抗体110HIV感染各项免疫指标的特征模拟图 111（五）TORCH感染的抗体检测TORCH：是优生优育筛选实验检测部分致畸病原体的综合称谓。主

46、要由病原体英文名称的第一个字母组成：T：弓形虫(Toxoplasma，TOX)R：风疹病毒(Rublla virus，RUV)C：巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)H：单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus,HSV)、型O：其他感染(Others infections)，主要有沙眼衣原体、 柯萨奇病毒、HBV、梅毒螺旋体、淋球菌等。 112TORCH感染所引起的疾病统称为“TORCH综合征”：以中枢神经系统受损为主，多器官受累的症候群：孕妇: 免疫功能下降，容易发生原发性TORCH感染;感染过TORCH的孕妇: 潜伏病毒易被激活而复发感染胚胎: 流产、死胎、胎

47、儿畸形等；婴儿感染: 有的出生时症状并不明显，以后才逐渐出现中枢神经系统症状、眼病、耳聋、心血管损伤等；新生儿感染: 较先天性轻，表现多样，以淋巴结和内脏症状为多见。临床症状可于出生后发生，也可延长至几年后出现。 1131.弓形虫（TOX）TOX可引起人畜共患性弓形虫病；孕期感染后，1/2可垂直感染胎儿；人感染TOX多为隐性 感染，少数人因免疫 低下发病。TOX生活史114 机体感染TOX可产生体液免疫和细胞免疫。 常用ELISA法检测抗-TOX抗体：将TOX虫体抗原 (或 虫体裂解后的提取物抗原）包被固相载体，最终形成 虫体-抗TOX-抗人IgGHRP复合物，加入底物显色， 判断IgG的水平

48、。 将抗人IgG换成抗人IgM，则测得的为IgM。 IgM抗体用于急性感染的诊断； IgG抗体，作为既往感染的诊断； 婴儿检出IgM抗体则提示有先天性TOX感染的可能。 1152.风疹病毒（RUV） 引起先天性风疹综合征的病原体。 RUV在局部淋巴结增殖后，经病 毒血症扩散致全身； 潜伏期23周，显性感染为25%0%；听力障碍可以是先天性风疹惟一表现 症状轻: 初似感冒，淋巴结肿大、发热、 红斑丘疹; 孕期患风疹：病程可延长数天至2周。听116 RUV仅有一种抗原型，刺激机体产生抗-RUV抗体。 常用ELISA法检测IgM，快速、敏感、特异性高。 婴儿出生测出高效价抗-RUV-IgM，为先天性

49、风疹。 IgM类抗体：再感染者滴度低，持续时间短。 IgG检测：RUV隐性感染水平和疫苗接种效果。 自然感染后可获得持久免疫力，可维持数十年。 育龄妇女检测抗-RUV-IgG，了解RUV的感染状况。抗-RUV抗体及其检测1173.巨细胞病毒（CMV）有严格种属特异性。可形成潜伏感染、复发感染。孕妇感染：可长期呈带毒者； 垂直传播引起“TORCH综合征”， 有症状的新生儿病死率高。 先天感染的婴儿：一出生存在病毒 尿症，可维持数年，表明肾实质有持续性病毒复制。 检测抗-CMV-IgM/IgG：高效价抗-CMV-IgM，提示 有CMV感染。 1184.单纯疱疹病毒（HSV） HSV-1：潜伏于三叉

50、神经节内， 主要侵犯腰以上的部位； HSV-2：潜伏于脊髓神经节内， 主要通过性接触引起生殖器感染。 孕期感染：HSV可传染新生儿， 多为HSV-2所引起。 新生儿感染：临床表现可是局部的， 也可是播散性的，病死率高达80%。119受感染新生儿抗-HSV-IgM在出生后13周内检出， 在23个月达峰值。 IgM抗体能早期上升，中和病毒的效能不如抗-HSV- IgG/IgA。 双份血清抗-HSV-IgG滴度增高4倍，为HSV感染。 IgG、IgA抗体在感染后出现迟缓，原发感染的孕妇 在分娩时新生儿被感染，导致播散型感染。 复发性感染孕妇所生婴儿损害程度。 抗-HSV-IgM/IgG类抗体的检测1

51、20复发感染或激发感染先天性感染原发感染新生儿感染继往感染以下阴性阳性血IgM近期感染或激发感染 脐血IgMIgMIgGIgGIgMIgG滴度 4倍IgG新生儿抗体IgG检测抗体的评价及临床意义121（六）抗梅毒螺旋体抗体的检测 梅毒螺旋体（treponema pallidum,TP）为密螺旋体 属，是引起人类梅毒的病原体。人是其唯一宿主。 TP的抗原： TP特异性抗原：刺激机体产生特异性的凝集抗体、 制动抗体或溶解抗体； 非密螺旋体抗原：磷脂类抗原，TP感染人体在破坏 组织的过程中会释放一种心磷脂机体产生反应素 再与牛心肌的心脂质抗原发生交叉反应。 检查类型：非特异性反应素和特异性抗体检查。

52、122麻风、结核、水痘、病毒性肝炎、回归热及某些发热疾病、近期接种疫苗、自身免疫病、妊娠和70岁以上老人胎儿经母体获抗体，出生3个月自动转阴期梅毒先天梅毒艾滋病50%100%+期和期梅毒+假阳性假阴性血清反应素阳性率艾滋病合并感染时，梅毒血清学试验常呈阴性，故怀疑梅毒感染者，建议同时做抗-HIV抗体检测。出生3个月内抗体先天性梅毒1.非特异性反应素试验常作梅毒诊断的筛选实验.牛心肌的心脂质作抗原，测定病人血清中的反应素。123 (venereal disease research laboratory,VDRL)VDRL抗原牛心肌提取的心磷脂、卵磷脂及胆固醇主要用于脑脊液的检测，对神经梅毒有诊

53、断价值。加热处理的待检血清 (1)性病研究实验室试验 124 (rapid plasma regain test,RPR) 在VDRL抗原液中加乙二胺四乙酸、 氯化胆碱、防腐剂和活性炭细粒。 待测血清不必加热灭活，抗原不 必每天配制。 （toluidine red unheated serum test,TRUST) 用甲苯胺红代替活 性炭颗粒作指示剂。 (3)甲苯胺红不加热血清试验 (2)快速血浆反应素试验1252.抗TP特异性抗体试验 将TP经超声粉碎后作为抗原， 测血清中IgM、IgG抗体， 是特异性抗原抗体反应， 敏感性和特异性较高，主要用于梅毒诊断的确证。检测特异性抗体的试验仍有1%

54、的假阳性反应： 传染性单核细胞增多症、麻风等； 用FTA-ABS法时SLE可呈假阳性； 早期梅毒治疗后抗TP抗体可持续阳性不能反映继往有梅毒病史者目前的感染状态。 127 (fluorescent reponemal antibody absorption test,FTA-ABS) 被认为是梅毒检测的“金标法”。非致病性密螺旋体（溃蚀螺旋体Reiter株）超声抗原吸收待检血清除去固相梅毒抗原荧光标记羊抗人IgG 荧光密螺旋体抗体吸收试验 交叉反应性抗体128 IgM抗体出现在梅毒的不同时期，是梅毒感染最早 产生的抗体，并随疾病的治疗而逐步消失，但也见 于潜伏期和晚期。 新生儿体内出现IgM抗

55、体是先天性梅毒的依据； 脑脊液中出现IgM抗体提示活动性神经性梅毒。 常用方法：IgM固相红细胞吸附试验、免疫印迹法及 ELISA法等。血清IgM抗体的检测129抗真菌抗体 深部感染真菌的抗体检测的辅助诊断。真菌间抗原性有交叉反应，有的抗体维护时间较长，正常人群有一定的阳性率。ELISA法、DIEFA法、乳胶凝集试验和免疫电泳等检测循环抗体，操作简便、快速、敏感性高。对组织胞浆菌病和球孢子菌病诊断意义较大；孢子丝菌病高度怀疑但培养阴性时有一定价值；双份血清抗体效价4倍或间隔23周进行连续动态观察有助于确诊。（七）其他各类病原体感染的抗体检测130微生物所致疾病及主要特征临床意义呼吸道合胞病毒婴幼儿病毒性支气管炎和肺炎;飞沫或接触传染;院内感染中和抗体;双份血清IgG效价4倍,实验确诊;急性期血清IgM、IgA以及鼻咽部sIgA检测,协助早期诊断柯萨奇病毒手足口病,疱疹性咽炎,脑膜炎,心肌炎,新生儿中枢神经及心脏等病变检测特异性IgM,早期诊断;IgG既往感染,机体有免疫力;双份血清IgG抗体效价4倍,可实验确诊各类病原体感染致病特点和抗体的检测