2020年银杏叶提取物检测精品版

1、精选文档第一单弓|百术语和定义：总黄酮醇甘：包括楣皮素(Querceti n)、山奈素(Kaempferel)、异鼠李素(Isorhamnetin)的糖昔类。银杏叶提取物(EGB)因其具有抗氧化，拮抗血小板活化因子，改善血液流变学特性等药理活动，因而引起了广大研究者的兴趣，不论是衡量提取工艺的优劣 和控 制EGB的质量，还是为后续药理药效的实验研究提供可靠数据，一种能稳定，可靠的定量分析其主要药效物质黄酮类化合物的方法是十分必要的。国内主要以铝盐显色然后比色的方法或直接进行比色的方法测定黄酮含量，但因此法受酚类物质干扰比较大，准确性和专属性比较差，只能做定性或半定量分析。样品经酸水解后，通过高

2、效液相色谱法测定棚皮素，山奈素，异鼠李素3种昔元的含量，在乘以一定的因子换算成总黄酮醇昔的方法，因其准确，快速等优点一逐渐被广泛接受，也是国际上公认的分析银杏叶总黄酮含量的方法。应用范围：本方法采用高效液相色谱法测定银杏叶提取物中总黄酮醇昔的含量，本方法适用于 银杏叶经加工制成的提取物银杏叶提取物简介2本品来源本品为银杏科植物银杏Ginkgo biloba L.的干燥叶提取物。植物性状落叶乔木，可高达 40m。树干直立，树皮灰白。枝有长短两种，叶 在 短枝上簇生，在长枝上互生。叶片扇形，长 4-8cm)宽5-10cm)先端中间2 浅裂，基部楔形，叶脉平行，叉形分歧；叶柄长 2.5-7cm。花期

3、4-5月， 果期7-10月。9-10月间采收，晒干。植物分布全国大部分地区有产，主产广西、四川、河南、山东、湖北、辽宁、 江苏等地。产品性状银杏叶提取物 Ginkgo biloba P.E为浅黄棕色可流动性粉末，有本品 固 有的香气，味苦。产品含量按干燥品计，银杏总黄酮含量24.0%。银杏叶提取物的功效药理作用银杏叶目前仍被中国医药用于治疗记忆丢失，霓部疼痛，痢疾，高 压、精神紧张和呼吸道问题如哮喘，支气管炎和循环不良及其引起的焦虑。银精选文档 TOC o 1-5 h z 杏的活性成分是菇烯部分，其中包括银杏内酯和白果内酯。这些银杏黄酮一糖黄成分具有强大的抗氧化与自由基能力。促进循环银杏叶提取

4、物Ginkgo biloba P.E能同时促进大脑和身体肢体的循环。银杏叶 提 取物Ginkgo biloba P.E.的一个主要保健功能就是抑制一种称为血小板活化因子（PAF）的物质，PAF是一种从细胞中释放的介质，其会导致血小板聚集（堆 积在 一起）。高含量的PAF会导致神经细胞损伤，中枢神经系统血流量降低，发 炎，和 支气管收缩。与自由基非常相似，高PAF水平也会导致衰老。银杏内酯和白果内酯可在缺血（体内组织缺少氧气）时期内保护中枢神经系统的神经细胞不受损伤。该功能可能能对苦于中风的患者有辅助治疗的作用。除了抑制血小板粘着外，银杏提取物调节血管张力和弹力。换句话说，其可令血管循环更加有效

5、 率。该提升循环效率作用对循环系统中的大血管（动脉）和较小血管（毛细血管）都有同样作用。抗氧化作用银杏叶提取物Ginkgo biloba P.E可能在大脑，眼球视网膜和心血管系统中可发挥抗氧化特性。其在大脑和中枢神经系统中的抗氧化作用可能有助于防止因年龄导致的大脑功能衰落。银杏叶提取物在大脑中的抗氧化功能特别使人感兴趣。大脑和中枢神经系统特别易受自由基攻击。自由基导致大脑损伤被广泛认为是导致伴随衰老而来的多种疾病的影响因素，其中甚至包括阿兹海默症。抗衰老功能银杏叶提取物 Ginkgo biloba P.E提升大脑血流量并对神经系统有极好的滋补作用。包含上万患者的数百次科学研究证实了银杏叶提取物

6、的功效对包括大脑血流不足和老年患者的智力衰退在内的诸多问题的效力。银杏对许多衰老的可能症状都有很好的效果，例如：焦虑和忧郁、记忆损伤、难以集中注意力，机敏度下降、智力下降、眩晕，头痛，耳鸣（耳中鸣响）、视网膜黄斑部退化（成人失明的最普遍原因）、内耳骚动（其会导致部分失聪）、末端循环不良、阴茎血流不良导致的阳痿。痴呆，阿兹海默症和记忆力提升科学家回顾了所有已出版的对银杏和轻微记忆损伤的高质量研究，并得出结论：银杏在提升记忆力和感知功能方面较安慰剂明显更加有效。银杏在欧洲被精选文档广泛用于治疗痴呆。银杏被认为可有助于防止或治疗这些脑部紊乱的原因是其可 增 加脑部血流量及其抗氧化功能。尽管许多临床试

7、验有科学上的缺陷， 银杏可能增 加阿兹海默症患者思考能力，学习能力和记忆力的证据仍被抱以很大期望。125月经前不快症状一次评价银杏叶提取物 Ginkgo biloba P.E对有月经前不快症状妇女益处的 双 盲受控安慰剂研究，该试验包括 143名年龄在18-45岁的妇女，并跟踪她们两 个月 经周期。在第一个周期的第16天每个妇女都收到银杏叶提取物 Ginkgo biloba P.E.（每天两次，每次80mg）或安慰剂，治疗持续至下一周期的第 5天，并在该周期的 第16天重新开始。结果令人印象深刻。和安慰剂比较，银 杏明显地减轻月经前不快 症状的主要征候，特别是乳房疼痛和情绪不稳。性功能不良尽管

8、目前没有关于此功能的双盲试验根据，但病例报告和开放研究提出银杏能使因扑洛扎克类药物及其它抗抑郁药物而来的性功能不良好转。眼部问题 TOC o 1-5 h z 银杏中的类黄酮也许能停止或缓解某些视网膜病变。视网膜受损有许多可能原因，包括糖尿病和视黄斑病变。视黄斑病变（一般称为老年黄斑病变或ARMD）是渐进的退化性眼部疾病，并易发生于老年人身上。其是美国导致失明的主要原因。研究提出银杏也许有助于保持 ARMD患者的视力。剂量：主流意见认为用于治疗包括眩晕、耳鸣和间歇性跛行在内的末端微循环问题时，每天120-160ml的剂量十分适合。治疗痴呆症，轻微忧郁和提升认知能力，可使用更高的剂量（大约 240

9、mg/天）。为取得最佳效果，每日服用量一 般 被分为2-3次服用。确认使用提取物的标准为含有至少24%勺银杏黄酮糖甘和6%勺菇烯内酯一因为这是提取物在每次临床试验中提取物显示实质功效的等。第二章实验材料实验仪器和试剂及试药：仪器：安捷伦化学工作站；超声波清洗仪（功率 250W,频率20KHZ ）;电子天 平 （感量为十万分之一）；十八烷基硅烷键合硅胶柱试剂：甲醇（色谱纯）；水（二次蒸储水）；0.4%I酸水溶液：取4.00ml磷酸（分析纯）加水稀释成 1000ml,摇匀即 刁日 ?得；25%盐酸：取69.4ml盐酸加水稀释成100mL摇匀即得试药：楣皮素对照品（含量测定用，批号： 100081-

10、200406, 97.3%中国药品生物制品检定所提供）；山奈素对照品（批号： 110861-200808 95.9% 中国 药品 生物制品检定所提供）；异鼠李对照品（批号： 110860-200608,置五氧 化二磷 减压干燥12小时后使用，中国药品生物制品检定所提供）色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇 -0.4%磷酸溶液（50: 50）为流 动 相；检测波长为360nm。理论板数按楣皮素峰计算应不低于 2500。第三章实验操作方法原理：方法原理： 本品加甲醇-25%盐酸溶液（4: 1 ）加热回流，冷却，用甲醇稀 释，摇匀，滤过，续滤液进入高效液相色谱仪进行色谱分离

11、，用紫外吸收检测器于波长360nm处检测棚皮素的吸收值，计算出其含量。对照品制备：分别精密称取楣皮素对照品、山奈素对照品、异鼠李素对照品，加甲醇制成每1mL分别含30ug、30ug、20ug的混合溶液；或精密称取已标示楣皮素、山奈 素、 异鼠李素含量的银杏叶对照提取物 35mg，照供试品溶液的制备方法，同法制成对 照提取物溶液5。供试品制备：取本品约35mg,精密称定，力口甲醇-25%盐酸溶液（4: 1）的混合溶液 25mL,置水浴中加热回流30分钟，迅速冷却至室温，转移至 50 mL量瓶中，用甲 醇稀释至刻度，摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶液 o测定法：分别精密吸取对照品溶液（或对照提取物溶

12、液）和供试品溶液各10uL,注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长360nm处测定棚皮素、山奈素和异鼠李素的峰面积，计算出其含量5 o总黄酮醇昔=（楣皮素+山奈素+异鼠李素）X2.51（本品按干燥品计算含黄酮醇昔不得少于24.0% ）仪器精密度试验精密吸取提取物对照品溶液10 P I,按上述色谱条件重复进样4次，测定棚 皮 素、山奈素、异鼠李素的峰面积，结果见下表。精选文档表3-1精密度试验（榔皮素峰面积）序号1234平均值RSD(%)峰面积2672.92652.82672.82682.22670.10.47表3-1精密度试验（山奈素峰面积）序号1234平均值RSD(%)峰面积2646.7

13、2655.52693.62690.62671.60.89表3-3精密度试验（异鼠李素峰面积）序号1234平均值RSD(%)峰面积1391.51390.51414.91425.41405.51.24结果对照品的棚皮素峰面积的RSD=0.56%,小于2.0%,山奈素峰面积的RSD=0.89%小于2.0%,异鼠李素峰面积RSD= 1.24%小于2.0%,说明仪器精密度良好供试品溶液的稳定性试验取银杏叶提取物（批号：N111212,厂家：徐州恒凯银杏制品有限公司），按 供试品溶液 制备方法制备供试品溶液，分别在 0h、2h、4h、6h、依法测定棚皮 素、山奈素、异鼠 李素峰面积，结果见下表。表3-4稳

14、定性试验（榔皮素峰面积）序号1 234平均值RSD(%)峰面积3318.63319.13316.83326.73320.30.14表3-5稳定性试验（山奈素峰面积）序号1234平均值RSD(%)峰面积3065.33069.13045.93109.63072.40.88表3-6稳定性试验（异鼠李素峰面积）序号1234平均值RSD(%)峰面积689.8688.7685.9691.2688.90.33结果棚皮素峰面积的 RSD=0.14%,小于2.0%,山奈素峰面积的RSD=0.88% ,小于2.0% , 异鼠李素峰面积的 RSD=0.33%，小于2.0%,说明供试品溶液在6小时内稳定。重复性试验取

15、同一批次样品（批号：N111212） 4份，按供试品溶液的制备方法制得试品溶液，按上述色谱条件测定，结果见下表。表3-7重复性测定结果序号平均值 RSD（%）取样量mg35.9135.1431.8632.49棚峰面积3318.83326.62839.02852.1浓度（棚）1.8121.8161.5481.577山峰面积3067.22968.82603.22638.81.22浓度（山）1.6161.5641.3711.390异峰面积689.2622.0711.2723.0浓度（异）含量（%0.3800.3430.3920.39926.6126.5926.0926.0126.3精选文档结果含总黄

16、酮醇甘的平均含量为 26.3% , RSD=1.22% ,试验表明本方法重复 性良 好。样品的含量测定取对照品、银杏叶提取物（批号：N111212）、两份，按“对照品溶液制备、 供 试品溶液制备，”方法制备对照品、供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，按上述色谱条件测定，（采用体积外标法， F=M对XN对XW / A对）结果见 下表，图谱见附录。平均（X10-5） RSD （%）表3-8 对照品测定结果称样量校正因子峰面积平均面积Ymg（X105），皮素15.422745.4卜岐素15.322736.82730.4山奈素15.192760.92760.3山奈素15.112752.42

17、753.72743.72744.552733.602760.62753.051.0931.09061.05331.05261.091850.131.05400.13异鼠李素 9.22异鼠李素 9.161667.91666.41667.151663.21661.351.106 01.1021.104350.161659.5表3-9样品含量测定结果样品号称样量mg峰面积平均面积浓度含量 平均 RSD(%)(% (%)棚皮素3318.63318.851.1823319.135.91山奈素异鼠李素3065.33069.1689.8688.73067.21.61626.62689.250.38026.6

18、0.043326.9棚皮素3326.43326.651.81635.142970.9 山奈素2966.8异鼠李623.1素620.92968.851.56426.60622.000.343由以上测定结果可知总黄酮醇甘的含量为26.6%,水分为1.2%,所以本品按干燥品计算为26.9%,符合2010版中国药典检查之规定第四章黄酮醇普质量控制方法评述银杏（Ginkgo biloba L.）为银杏科银杏属多年生落叶乔木植物，是最古老的中 生代侏罗 纪孑遗植物之一，素有裸子植物“活化石”之称，属我国特产植物。自20世纪60年代联邦德 国开发出银杏叶制剂 Tebonin以来，从70年代开始银杏叶制剂 的

19、产品在欧洲至今一直盛销不 衰。80年代起由于发现银杏内酯是血小板活化因子（PAF）的特效拮抗剂，而PAF是引起哮喘等许多疾病的重要因素，进而推动了对银杏的更进一步深入研究，同时也兴起了全球范围内的 “银杏热”。银杏叶的主要活 性成分是黄酮昔类及菇内酯类。其中黄酮类主要来源于银杏叶，含量较高，约为2.5%? 5.9%,包括黄酮、黄酮醇及其昔、双黄酮、儿茶素等几大类化合物。目前 从银杏中鉴定 出的黄酮类化合物达44种:6,其中双黄酮6种，其极性低，在银杏提 取物中含量 01 %至今未 发现其生物活性；黄酮昔元7种，极性低，在银杏提取物 中含量0.1%;黄酮糖昔20种，该成 分极性较大，在EGb中含

20、量 20%,能消除氧自 由基，具有扩张血管、增加血流量、改善脑动脉 和末梢血流作，但这类化合物广泛存在于其他植物中，似乎不是银杏叶独特疗效的关键成分； 桂皮酰衍生物有5种，据报道其中有2种成分对心血管系统有调节作用:7:,另外有儿茶素4种及 原花青素和原翠雀素。本文将对银杏提取物及其制剂中黄酮昔类的含量测定方法作一介绍评述。滴定法8以粕电极作指示电极，鸨电极作参比电极，在含KBr的盐酸介质中，以KBrO3标准液为 滴定剂，根据示波器荧光屏上荧光点的最大位移来指示滴定终点，由所消耗的KBrO3的量计算出EGB中总黄酮的含量（以芦丁计）。结果表明本法与 紫外分光光度法比较结果无显著性 差别（99%

21、置信度）。且与紫外分发光度法相 比,具有仪器简单，操作方便，测定快速淮确等特 点，且可避免色素和其它杂质的 干扰。但需要注意的是底液盐酸的酸度，支持电解质KBr的用 量以及滴定速度。紫外分光光度法（UV法）用紫外分光光度法测定银杏叶提取物及其制剂中黄酮昔类，其中又可分为：络合一分光光度法9本法采用硝酸铝-亚硝酸钠为显色剂，生成铝螯合物在510 nm处测定，以芦丁为对照 品。双波长紫外分光光度法10：精选文档方法是取芦丁标准品，配制含芦丁的甲醇标准液，在268 nm和285 nm测定 吸收度差4A (AA A268-A285 ),绘制浓度C (mg/L)与的关系曲线，用最小二乘 法求回归方程，同

22、时使 芦丁标准溶液在一定范围内与 AA呈线性相关。分光光度法被一些药典所采用，但不专属，只能大约估计总的类黄酮不可能细致地定性、定量测定昔元，特别是银杏叶中因含有大量花色青素、叶绿素、糅酸和其他酚性成分对测定干扰很大，因而测定结果偏高，重复性差，准确度低但本法要 求简单，操作方便，对基层乡镇企业等不具 备HPLC测定条件的单位，比色法仍是一种简易可行的测定方法，亦可用于企业生产环节中初 步质量控制。薄层扫描法：1：( TLC扫描法)利用双波长扫描仪对银杏黄酮醇昔的 3种水解昔元柳皮素、异鼠李素、山奈酚进行扫描测 定，以黄酮醇昔的平均分子量与各昔元分子量的比值作转化因子，计算总黄酮醇昔的含量。该

23、法由于需要薄层扫描仪，仪器价格较贵，与HPLC方法比较无明显 优势，因而研究及报道均较少。高效液相色谱法(HPLC法)70年代后期，HPLC法取代了分光光度法，广泛用于银杏提取物及其制剂中黄酮昔类的分析，目前关于HPLC法测定银杏黄酮昔类国内外研究报道很多，主要 差别有：按进样方式可分 为样品直接进样法测定、直接进样后多元梯度淋洗进行指纹分析法：12-13：和样品经酸水解后，梯度洗脱分析测定主要水解昔元的含量。前一种方法主要用于控制制剂的质量和鉴别制剂的优劣，后一种方法主要适用于植物药的稳定性和质量控制分析。按对样品的前处理所采用的水 解方式有盐酸 水解法：14：和硫酸水解法：15：,盐酸和硫

24、酸的浓度通常分别为 25%、4%水解的时间 为30 min1巴60 min门组、2 h 17 3 h 得不等。按使用对照品的不同有单用芦丁: 18楣皮素:恒，也有用榔皮素+山奈素+异鼠李素:20;由于各样品中柳皮素、山奈素和异鼠李素之间的比例随着工艺的不同，甚至不同银杏叶原料也有变化，多个对照品加在一起较单用榭皮素一个对照 品准确可靠。按测定波长有300、340、350、354、360、365、370、375 nm等按根据文献加总黄酮的换 算系数即以3O 2O 6O (p羟基反式桂皮酰基)BD葡萄糖基aL鼠李糖基榔皮 素的分子量756.7分别除以 榔皮素昔元、山奈素昔元和异鼠李素昔元，得到换算

25、系数分别为2.51、2.64、2.39，或取平均值 2.51为换算系数，测得昔元的总面积之后乘 以2.51即得总黄酮昔的含量。计算公式有： (Q+K+I) 2.51： 22 ;221 ;(D 2.504Q+2588K+2.437I231 2.23Q+2.63K+2.38I; 2.51Q+2.64K+2.39I：24-251 ; 2.34Q+2.60K+2.301 ：261 等。采用HPLC法测定银杏提取物及其制剂中银杏黄酮昔类的含量，从方法学本身来说，技术已经成熟，灵敏度、重现性均很好。对于像 EGb761那样的标准制剂，由于经过严格 的药效学和毒理学试验，且在临床上应用多年，在银杏叶中有效成

26、分不完全清楚的情况下，作 为经验性的定量方法是不同的。但黄酮昔是中草药中的一般成分，能在多大程度代表银杏的治疗作用，一直是国内外学者探索的课题。由于不能直接测定昔的含量，而是通过以对羟基桂皮酰衍生物除以榔皮素、山蔡素、异鼠李素三种昔元得出换算系数，来计算总黄酮昔的量，而本 身对羟基桂皮酰衍生物它们的总含量在银杏总黄酮昔中并不高，因而利用换算系数来计算总黄 酮的含量显然是不合理的。EGb761等标准制剂本身是不含双黄酮或黄酮昔元的（低于01%）,但如果在银杏提取物中有人人为地添加如榔皮素等黄酮昔元，则测得的银杏总黄酮含量结果明显增高，表面上看来似乎符合质量要求，但实际上影响银杏提取物的内 在质量

27、。银杏总黄酮的HPLC测定方法有许多，但由于进样方式、水解方法、测定波 长、对照品的 选择、计算方式不同测定的结果也就有差异，从目前收集到的四十余份关于银杏黄酮含量测定方法报道来看似乎以采用盐酸水解，对照品采用柳皮素、山蔡素、 异鼠李素三种的混合液，在370 nm处测定，总黄酮含量的计算，以3种背元含量之和乘以平 均换算系数2.51报道最多。但总而言之国内外尚无完全统一的标准测定方法，随着近年来对银杏的进一步深入研究发现，银杏内酯似乎才是银杏叶中起关键作用的成分，因而今后黄酮作为 主要质量指标的地位将会下降。超临界CO2萃取色谱法 （SFC色谱法）该法主要是利用超临界CO2萃取技术的高效分离特

28、点，先将样品中各种黄酮类化合物分 离，然后用各种色谱分析仪器检测出来。采用超临界流体色谱法分离 测定银杏叶提取物水解后 的三个昔元一榔皮素、山蔡酚、异鼠李素的含量，以苯基柱为固定相，二氧化碳乙醇磷酸（90 : 9.98 : 0.02 ）为流动相，三个昔元获得良好 分离，并计算了总黄酮含量，证明本法定量 结果准确，重现性好。该法是目前比较先进的测定方法，但需要超临界萃取设备，所需费用较高，仪器设备目 前无法普及，且超临界萃取技术用于中草药中成分的提取、分离尚处于探索过程。胶束电动毛细管色谱法（MECC法）281精选文档它是利用流动相中加入离子型洗涤剂，形成胶束体系的快速新方法。这种方法较HPLC

29、 法灵敏度高，进样量小，分离速度更快，且能得到清晰的基线分离。高速逆流色谱法 （HSCCC法）：29：高速逆流色谱法是一种高效快速的无载体液-液分配层析新技术，它消除了载体的不可逆 吸附，其分离不是淋洗层析载体过程，超载制备能力大，且分离纯化同步完成，溶剂耗量 小，既可用于含量测定，又可用于中草药化学对照品的制备。蔡定国采用GS10A型HSCCC色谱系统及其分离试验程序，用HSCCC法从银杏 叶浸膏酸水解物30 mg/mL的样品中分离得到 异鼠李素、山蔡酚、榔皮素，经HPLC分析，纯度达到98%以上，符合化学对照品的要求。热喷雾 HPLCMS 法 30-31Gobbato S等将热喷雾接口与H

30、PLC与MS联用,进行双黄酮分离鉴定，既可 克服紫外吸收 检测没有选择性的缺陷，又可避免二极管阵列检测器对结构类似的 双黄酮分辨不清的困难。采 用外标法对提纯后的银杏双黄酮定量，色谱峰形对称、无拖尾、重现性好；该法简单可靠，可适用于双黄酮的定性定量分析。热喷雾 HPLCMS法可广泛用于植物成分的在线鉴定及定量。但目前国内报道却很少，主 要是仪器价格昂贵，不便于推广。讨论取对照品溶液和阴性对照溶液分别进行紫外扫描，在 200? 300 nm两者均 有较强吸收， 在300? 400 nm阴性对照溶液吸收较小，故选择在 360 nm作为 楣皮素、山奈素、异鼠李素的 测定波长。实验过程中选择了甲醇和水

31、，甲醇、0.4%磷酸水溶液作为流动相，并对流动 相组成比例 进行了选择，结果表明以“ 2.2 ”项下系统较佳，各色谱峰分离度良 好，峰型尖锐，保留时间 适中。供试品的制备采用盐酸水解30mi n,对照品溶液采用榔皮素、山奈素 、异 鼠李素混合溶 液，总黄酮醇昔含量的计算采用 3种昔元含量之和乘以平均换算系 数2.51。实验结果表明，采用上述 HPLC法对复方银杏叶片中主要活性成分榔皮素、山奈素、异鼠李素等黄酮化合物的含量进行测定，方法简便、结果准确，精密度、重复性良好，处方中其它组分对银杏叶总黄酮测定无干扰，方法专属性较强，可用于复方银杏叶片的质量控制。参考文献1俞曼雷，谢德隆，胡馨等 砧效液

32、相色谱法测定银杏叶制剂中黄酮甘含量J.中药新药与临床药理)1998,9(1):46.2陈仲良.银杏提取物的化学成分和质量J.中国药学杂志,1996,31 (6):3283潘洪平？银杏叶制剂药理作用和临床应用研究进展J.中国中药杂志，2005 ,30 (2): 93.4庄向平，虞杏英，杨更生等.银杏叶中黄酮含量的测定和提取方法J.中药，1992, 23(3):122.国家药典委员会.中国药典，2010版I部S.北京：化学工业出版社，2010:3926钱天秀，杨世林，徐丽珍等.银杏研究现况J.国外医药植物药册1997,12:157.7 Kloss P , Jaggy H, Verfahren zu

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