2022年FDA关于破坏实验的一些最新看法和要求

1、FDA关于 ANDA强制降解试验的观点：强制降解试验为方法学验证中的重要内容,为明白国外对强制降解试验的要求,依据 Pharmaceutical Technology 第 36 卷 5 期中“FDAPerspectives: Scientific Considerations of Forced DegradationStudies in ANDA Submissions ” 一文 （发布时间为 2022 年 5 月 2 日,作者为 Ragine Maheswaran）,对 FDA关于强制降解试验的相关要求进行了翻译整理,详细内容如下：一、强制降解试验简介强制降解试验也称破坏性试验,其试验目的

2、明确；强制降解试验可猜测原料药的稳固性或影 响制剂的纯度、有效性和安全性的因素；明白不同破坏条件下药物的降解产物和降解途径是特别必要的；强制降解试验可以为分析方 法的建立、说明书的制定和处方设计的确定等供应有益的参考；样品破坏的程度取决于药物 本身的性质和产品的剂型；ICHQ1B为光稳固性试验提出了一些建议,在ICH 稳固性指导原就和验证指南中,没有可以参考的关于其他降解条件的建议,对于氧化和水解降解讨论也仅有有限的信息；原料药与辅料分析方面的药物专著可以为不同原料药的各降解条件供应参考；二、仿制药强制降解试验讨论存在的问题仿制药申请时供应的强制降解试验讨论数据不完整是申报的一大缺陷；美国仿制

3、药申报常见缺陷解读（ CMC部分）已经出版,常见的一些例子说明,面：强制降解试验的缺陷包括以下几个方原料药在各破坏条件下均不产生降解；请重复破坏试验以获得足够的降解产物 , 如没有产生降解, 请供应依据；破坏条件过于猛烈,导致大部分药物均被降解；请用温顺的破坏条件或削减样品暴露时间以产生相关的降解产物；请留意即使你已经用含量测定的方法对破坏的样品进行了检测,为了验证有关物质的检测方法具有稳固性指示功能,破坏的样品也应用有关物质的方法进行测定；请供应所做的验证试验数据,以证明用以检测未破坏样品和破坏样品的方法能够检测出全部的降解杂质；请对破坏样品中已知和未知的降解产物进行列表总结；请确定检测软件

4、对峰纯度检测的峰高要求；请说明破坏样品质量不守衡的理由；请鉴别原料药与辅料相互作用产生的降解产物；光稳固性讨论说明药品对光敏锐,请说明这一点是如何在分析方法,生产工艺以及药品运输过程反映出来的；在仿制药申请中 , 尽量削减以上缺陷 , 通常会建议在申请过程中报告强制降解试验的相关信息；强制降解试验猎取的信息能够为开发稳固性指示分析方法、生产工艺 , 产品运输和储存条件的确定供应依据；三、如何进行强制降解试验1、降解条件典型的强制降解主要包括四种机制：高温、水解、氧化和光降解；挑选适当的破坏条件,如酸碱和氧化剂的浓度、破坏温度、相宜的破坏时间,以实现样品最佳降解程度；样品破坏过度会产生在药品稳固

5、性讨论过程中和正常破坏条件下均不会产生的二次降解产 物,这并不是降解试验的目的；因此,掌握样品降解达到预期水平是特别必要的；为了实现有目的的降解,应制定相宜的降 解讨论方案；同时为加速试验和长期试验的放置条件供应依据；通常认为样品降解量应在 520%之间；对于含量限度为标示量的 90%110%的小分子药物,即 使在文献中有更广泛的举荐范畴作为参考（例如,1030%）,通常答应 10%的降解量；降解试 验破坏条件越猛烈,就越简单产生二级降解产物；1.1 光稳固性光稳固性试验是强制降解试验的重要组成部分,对光敏锐药物尤为重要；ICH Q1B指导原就提 出了新原料药和制剂的光稳固性试验条件；原料药、

6、固体 / 液体制剂 , 应暴露在总照度不低于1.2 106 Lux .hr,近紫外能量不低于200w.hr/ m2 的条件下 , 相同样品应同时暴露在日光灯和近紫外灯下；可掌握合适的温度以减 少局部温度变化效应；光破坏样品要检查样品是否有物理性质 如外观、溶液的颜色或澄清度 、含量和降解产物的变化；Q1B中列出的决策树可以用来确定药物的光稳固性试验条件；件, 要留意仿制药标签应和参考上市药物标签以及美国药典 致；1.2 热稳固性产品标签应列出产品相宜储存条 USP相关建议 如适用 保持一热破坏试验条件（例如：干热破坏和湿热破）应比ICH Q1A 中举荐的加速试验条件猛烈；固体原料药和制剂应同时

7、暴露于干热和湿热条件下,而液体制剂可以暴露于干热条件下；建议破坏温度应高于加速试验温度的10,相对湿度为75%或者更高；破坏试验也可以在更高温度条件下进行短时间破坏；对破坏样品进行多个时间点检测,能够充分供应降解速率、一级与二级降解产物的信息；即使药物较稳固,产生较少降解产物或无降解产物产生（40）放置 6 个月的破坏强度；1.3 酸碱水解, 也应确保破坏强度高于在加速条件下原料药与制剂应在常温或更高温度条件下,以溶液状态进行酸碱水解破坏试验,酸碱种类和 浓度的挑选取决于药物本身的特点；其中一种酸碱破坏试验方案为样品于室温条件下放置,在不同 程度建议应不高于 15%；pH条件下破坏两周,并且破

8、坏酸降解一般采纳0.1mol/L-1.0mol/ L的盐酸或硫酸,碱降解采纳0.1mol/L-1.0mol/ L的氢氧化钠或氢氧化钾溶液；对于脂溶性药物,可挑选惰性溶剂溶解药物,在挑选助溶剂时,应考虑药物分子中存在的官能团不与助溶剂发生反应；明白化合物的相关性质对于挑选破坏条件是有用的,例如,一个化合物含有酯基,就它对碱是不稳固的,就可挑选较低浓度的碱进行破坏,在不同时间点对样品进行测定,能够明白降解速率和区分一级、二级降解产物；1.4 氧化破坏氧化破坏试验相对较复杂,过氧化氢应用较广泛,由于能够用它来模拟辅料中可能含有的过氧化物,其他氧化剂,如金属离子,氧气,以及自由基引发剂（例如,偶氮二异

9、丁腈,AIBN）也可以应用；氧化剂种类和浓度的挑选取决于药物本身的性质；原料药在溶液状态下,制剂在溶液或固体状态下进行氧化破坏；据报道 , 样品放置于室温, 在中性条件下经浓度为0.1%到 3%的过氧化氢破坏7 天, 最多能产生20%的降解产物；在不同时间点对样品进行测定, 以挑选所需的降解水平, 不同的降解条件会产生相同或不同的降解产物 , 降解的类型和程度取决于样品的官能团和降解条件；2、分析方法2.1 试验方法首选检测方法是反相高效液相色谱法,缘由如下：与水和有机溶剂详细良好的相容性,精确度好,灵敏度高,能够检测极性化合物；通过挑选合适的色谱柱、柱温,调剂流淌相的 pH 值,从而达到各峰

10、的分别；低保留,极性较大的杂质会在溶剂峰前出峰；梯度洗脱作为分析方法的一部分,流淌相中有机相比例由低到高过度,能够检测出低保留极性化合物和高度保留的非极性化合物；也可以用梯度方法对破坏样品进行检测, 来评估目前的洗脱方法是否能够对样品进行有效的检测 , 挑选的样品溶液和流淌相应能充分反映和检测出药物本身、潜在杂质和降解产物；破坏样品的制备方法应尽可能地模拟分析过程中所用的样品制备方法；对酸碱破坏样品溶液 进行酸碱中和稀释是必要的；破坏样品的图谱应与空白溶液和未破坏样品的图谱进行对比,从而确定各降解产物的降解途径；运算杂质含量时 , 应扣除空白峰 , 空白 , 未破坏样品和破坏样品的图谱均应显示

11、全部的已知和未知杂质的含量；另外 , 手性化合物应当用手性分析手段来确定手性化合物的纯度和稳固性；分析方法应有足够的灵敏度以检测出较低水平的杂质,（例如,应检测出 0.05%浓度的杂质或者更低浓度的杂质）,并且峰响应值应在线性范畴内的峰响应值以下；分析方法应能检测到稳固性讨论过程中产生的全部杂质 浓度为报告限度浓度或更低, 依据ICH 的要求和稳固性讨论结果,来打算降解产物是否应当被鉴定和界定；常规检测方法 例如柱色谱法 或联用技术 例如 ,LC MS,LC NMR均可应用于降解产物的鉴别和界定；通过使用这些技术可以更深化的明白杂质结构 警示结构 , 并对这些杂质进行严格的掌握；, 以及明白各

12、杂质是否存在基因毒性仍应留意的是,对在稳固性讨论过程中产生的超过界定阈值限度的杂质应进行界定；可以用不同的检测方法对各破坏样品进行检测 例如 , 紫外和质谱 , 所用的检测器应具有三维数据分析的才能 , 例如 , 二极管阵列检测器或质谱分析能够检测到光谱的非匀称性；当主峰和杂质峰紫外吸取图谱相像或者系统噪音水平过高从而掩盖了杂质或降解产物时 , 二极管阵列检测器可进行多波长检测；具有相同分子量和官能团的化合物 例如非对映异构体 会出现出相像的紫外吸取图谱；这种情形下 , 需要转变色谱参数以实现色谱峰的分别；应选定正确波长来检测和定量潜在杂质和降解杂质；假如被分析物、杂质和降解产物紫外吸取没有重

13、叠,就应对样品进行多波长检测；在方法开发时,应对汇总不同检测波长下杂质的信息以发觉峰值分布的异同；2.2 峰纯度检测峰纯度是一种方法开发的帮助工具,当不同化合物共同洗脱时,依据化合物的光谱特性来反 映峰纯度指标；未破坏样品和破坏样品的峰纯度或峰匀称性是依据二极管阵列检测器的光谱信息确立的；用于确定峰光谱纯度的仪器软件,相关参数应依据生产厂商的说明书进行设置,并确定峰纯 度检测时对色谱峰峰高的要求；由于吸光度值过大,紫外检测呈非线性,应同时设置仪器阈值,以确保共洗脱峰均能被检出,并挑选参比光谱的正确位置；在梯度洗脱过程中,应验证软件自动校正不断变化的溶剂峰的才能；峰纯度检测不是确定检 测峰是否为

14、纯峰的肯定证明,当共洗脱峰光谱相像、样品浓度低于检测限浓度、检测峰没有 发色团,或者样品没有溶解的情形下,峰纯度检测具有肯定的局限性；2.3 质量守衡尽管不是在全部的情形下,破坏样品均能达到质量平稳 充分；, 但这种方法能使稳固性指示方法更加此法可以通过样品测量值、全部杂质和降解产物的测量值之和与未破坏样品初始值接近 100% 的程度来确定,在运算时适当考虑产生的分析误差；尽量使全部的破坏样品均达到质量守衡；如样品质量不守衡,就应进行深化讨论,并对这种 情形给出说明；由于被分析物和杂质紫外吸取情形有显著差异,应用外标法对样品进行检测；挥发性杂质的潜在缺失、非紫外吸取化合物的形成,不保留杂质,强

15、保留杂质等情形都应被 考虑在内；交替检测技术,例如示差折光检测器与液质联用可以用来检测非紫外吸取的降解产物；3、讨论终点确保样品在各降解条件下进行充分的暴露后即可终止强制降解试验,药物分子典型活化能从12 kcal/mol变换到 24kcal/mol；一种化合物不肯定在每种降解条件下均产生降解,暴露极值的一般准就可参考相关文献；一些稳固药物在任意降解条件下均不会产生降解,可以通过在药物中加入已知杂质来建立分析方法,同时应保证各峰能够达到基线分别；另,在使用药典和 USP 中概述的限制使用的方法 , 降解试验是没有必要讨论的；由于同一药物的不同晶型可能具有不同的稳固性特点,当一个仿制药产品晶型不

16、同于 RLD产品晶型时,原料药应进行降解试验来评判多晶性药物的理化变化；四、相关说明在 QbD理念中 , 讨论关键质量属性满意预定目标的产品 信息；, 必需运用强制降解试验中获得的数据在 QbD理念中,一个细心设计的强制降解试验讨论对于分析方法的开发是不行或缺的,它有助于建立一个稳固的特异性指示方法和猜测在稳固性讨论中可能形成的潜在降解产物；将全部潜在杂质混合进行分析方法的建立,并且通过建立各峰峰纯度的理念来帮忙防止不必要的方法再开发和再验证；药物在各降解条件下的化学变化,为制剂处方挑选供应有用的信息；辅料相容性试验的目的是明白药物研发过程中,处方中各成分的相互作用,它是药物研发过程中不行或缺

17、的一部分；分别对原料药、制剂与参比制剂进行强制降解试验和杂质分布对比,药物与辅料相互作用或者复方中药物和药物的相互作用而产生的降解杂质是可以考察的；从中获得的药物相关峰与药物非相关峰的信息就可应用于更稳固的制剂处方的挑选和讨论；例如,假如一种药物对氧敏锐, 需考虑在处方中加入抗氧剂; 假如药物本身对酸不稳固, 或者在酸性介质中会转换成其他物质,那么将这种药物做成缓释制剂可能是必要的；酸碱水解破坏试验可以为药品制成液体制剂或混悬溶液制剂供应参考依据；在强制降解试验讨论中获得的信息可以促进生产工艺过程的改进,假如光稳固性试验讨论显示药物对光敏锐,那么在药品生产过程中就应留意这点；原料药和制剂热破坏性试验可以为工艺开发供应有用的信息（例如,湿法制粒仍是干法制粒,以及温度的挑选）；此外,提高降解产物和降解机制的科学认知可能有助于确定导致稳固性试