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1、TOTALhCG33500用途Acs Total hCG 测定是一种应用 Acs 免疫测定系统定量测定人和血浆中总hCG 水平的顺磁性微粒化学发光免疫测定。概述和说明绒毛膜促激素 (hCG) 是一种由胎盘产生的、结构与垂体激素 FSH、 TSH 和 LH 类似的糖蛋白激素。这些激素都含有相同的 亚(MW 1500020000)，但因 亚不同而造成各自免疫学和生物学上的特异性。 hCG (MW 2500030000序列，但是有各自的羧基末端。1,2,3) 和 LH 共享几个肽卵植入壁后滋养层就开始产生出 hCG。此激素一直维持的类固醇激素的直到胎盘能够自泌。4 在正常怀孕期，受孕后一周的 hCG

2、 水平一般大约为 50 mIU/mL (IU/L)且六周中间每 1.53 天翻倍。5 在第一个三个月结束之前水平持续升高，在之后的怀孕期里逐渐下降。分娩后， hCG 回到 5 mIU/mL (IU/L) 水平，且通常在产后的数天无法检测到。此激素是怀孕的一种很好的标志物。健康和非孕的 hCG 水平很低 ( 5 mIU/mL IU/L)，甚至无法检测。如前所述，怀孕期的 hCG 浓度上升，头三个月过后逐渐下降。水平异常低或异。6常地急剧下降表示可能存在异常情况，比如最初的生物测定系统通过测量不同动物的或即将自然组织反应来测量 hCG。这些方法灵敏度，操作难度大且需要大量样本。测量尿液 hCG 的

3、试验一直以来都采用胶乳凝集分析或乳胶凝集抑制方法。随着由 Vaitukaitis 等人 1972 年为 hCG 测量发明的放射免疫测定技术的发展，有了更灵敏更快速的 hCG 测定法。7 后来发展的双位点免疫放射分析法 (IRMA) 具有更高的灵敏度、特异性和精密度。8测试原理Acs Total hCG 测定是一种双位点酶免法 ( “夹心法” ) 测定。将样本添加到含兔抗hCG- 碱性磷酸酶结合物和着抗小鼠 IgG 小鼠单克隆抗hCG 复合物的顺磁性微粒的反应管中。hCG 和固相上固定的单克隆抗hCG 结合，同时，兔抗 hCG- 碱性磷酸酶结合物与 hCG 上另外的抗原位点结合。在反应管内温育完

4、成后，结合在固相上的物质将置于一个磁场内被吸住，而未结合的物质则被冲洗除去。然后，将化学发光底物 Lumi-Phos* 530 添加到反应管内，再由照度计对反应中所产生的光进量。所产生光的量与样本内 hCG 的浓度成正比。样本内分析物的量由所的多点校准曲线来确定。 2006 Beckman Coulter, Inc.WB A33375AAc s Total hCG页码 1产品信息Acs Total hCG 试剂盒产品目录号 33500：100 测试， 2 个试剂盒， 50 个测试/ 盒即用型。2 到 10C 冷藏保存且竖直存放。至少在 2 到 10C 环境下冷藏保存 2 小时后，才可上机使用。

5、在 2 到 10C 环境下保存时，稳定期可持续至上所指明的有效期。首次使用后，在 2 到 10C 环境下保存的稳定期可维持 28 天。可能存在变质情况的表现为盒子上的弹性层破损或质控值超出了范围。若试剂盒受损 ( 比如，弹性层断裂 )，那么丢弃试剂盒。除特别说明外，所有的抗均是多克隆的。警告和供体外使用。按所描述的步骤进行操作，可使日常处理样本和血制品中所带来的风险降到最低。然而，无论这些产品的来源、处理方式或先前获得的证明，使用这些具有潜在传染性的物品均须按的注意事项和完善的临床操作规范来进行。应使用合适的剂来消除污染。遵循当地的操作规章和导则来保存并处理这些物品以及盛放这些物品的容器。叠氮

6、钠可能会与铅以及铜制的管件发生反应，形成具有高危种液体时，应以大量的水进行冲洗，防止叠氮物的集结。9 Xi. 刺激物：0.25% ProClin 300。性的金属叠氮物。在倾弃这R 43：如接触皮肤可引起致敏作用。S 28-37：接触到皮肤后应立即用大量肥皂和水冲洗。应戴适用套。材料安全数据资料 (MSDS) 可按需索取。1.2.和血浆 ( 肝素 ) 是所样本和准备使用的样本。在使用、处理和保存全血样本时，请遵循下列所的方法：10遵循静脉穿刺所需的常规在进行离心操作前需让来所有的全血样本。样本完全凝结。总是保持试管塞塞紧试管口。在离心操作完成后的 2 小时内，将至少 500 L 的无细胞样本移

7、入保存用试管内。完成后，立即将试管口牢牢塞紧。在室温 (15 至 30C) 下，将样本保存在塞紧的试管内不得超出 8 小时。若在 8 小时内无法完成测定，可将样本冷藏保存在 2 至 8C 环境下。若在 48 小时内无法完成测定，或需样本，可将样本在 -20C 或低于-20C 的环境下冷冻保存。样本仅可解冻一次。Ac s Total hCG页码 2WB A33375A 2006 Beckman Coulter, Inc.R1a:着 抗小鼠 IgG 小鼠单克隆抗hCG 复合物的顺磁性微粒，悬浮于 TRIS 缓冲盐水 含有表面活性剂、牛 白蛋白 (BSA)、 0.1% 叠氮钠和 0.1% ProCl

8、in* 300。R1b:兔抗hCG 碱性磷酸酶 ( 牛 ) 结合物，稀释于 TRIS 缓冲盐水 含有表面活性剂、 BSA、蛋白质(、兔、小鼠 )、 0.1% 叠氮钠和0.25% ProClin 300。3.使用下列准则准备样本：在分析前，确保已去除了残余的蛋白和细胞类物质。按采血试管生产商建议的方式进行离心。4.每个需自行判断其使用的采血试管和分离产品的适用性。会由于生产商的不同以及有时不同的批次而使这些产品存在差异。冷冻样本在测试前最多保存 6 个月。115.所提供的材料R1Acs Total hCG 试剂盒所需但未提供的材料1.Acs Total hCG Calibrators提供时为零以

9、及大约 5、 25、 150、 500 和 1000 mIU/mL (IU/L)。产品目录号 33505质控 (QC) 品：质控品2.3.Acs 底物液产品目录号 81906s、 Acs 2、 SYNCHRON LXi:4.AcAcs缓冲液 II，产品目录号 A16792UniCel DxI:UniCel DxI缓冲液 II，产品目录号 A16793方法说明1.参考相应的系统操作手册和 / 或帮助系统，以获取安装、启动、操作规章、系统性能特性、操作说明、校准流程、操作限制及注意事项、保养和故障排除的特定描述。2.将试剂盒放置上机前，轻轻地倒转试剂盒多次以混合新 ( 未刺破 ) 试剂盒内的成分。

10、不要倒转已打开 ( 已刺破 ) 的试剂盒。3.除去样本容器和系统的死体积，对于每次测定需使用二十五 (25) L 的样本量。参考相应的系统操作手册和 / 或帮助系统，以获取所需最少样本量的信息。4.样本结果计算的默认系统是 mIU/mL。如需将样改为国际系统(SI)，IU/L，可参考相应的系统操作手册和 / 或帮助系统。如需将浓度值人工转换成国际系统可将 mIU/mL 乘以倍增系数 1。方法参考相应的系统操作手册和 / 或帮助系统，获取有关管理样本、设置测试项目、申请测试项目和评论的信息。对含 1000 mIU/mL 总hCG 的样本进盒。定，选择 Dil-hCG2 作为测试名。两种测定可用相

11、同试剂校准细节所有的测试均需要一条实际的校准曲线。对于 Acs Total hCG 测定而言，每隔 28 天需要执行校准操作。参考相应的系统操作手册和 / 或帮助系统，获取有关校准原理、设置校准品系列、校准品测试申请输入以及评论校准数据的信息。质控质控模拟样本的诸多特性，且在免疫化学分析系统的特性时，显得十分重要。由于样本的处理可在任意时刻以 “随机处理”的模式，而非 “批量”模式进行，因此需以 24 小时为一个时间段来加入质控品。12 加入包含至少两个分析物水平的商业质控品。在复溶及保存时，需遵循供应商的规定。每个需确立自身适用的均值和可接受的范围，以确保合适的测试性能。若质控结果未落在可接

12、受的范围内，表明存在无效的。对此分析物，检查自最近一次获得可接受质控测试点以来的所有获取有关评论质控结果的信息。参考相应的系统操作手册和 / 或帮助系统， 2006 Beckman Coulter, Inc.WB A33375AAc s Total hCG页码 3结果系统通过使用一条平滑曲线数学方式，来自动地确定的。通过所保存的校准数据，所测得的发光量可确定样本内分析物的量。通过相应的界面可看到考相应的系统操作手册和 / 或帮助系统，获取评论样本结果的完整指南。的。参方法的局限性1. 此测定用于检测早期怀孕。2.在介于检测的下限和最高校准品值 ( 大约 0.51000 mIU/mL IU/L)

13、 之间的分析范围内，可进行样本的定量测定。定量测定含1000200000 mIU/mL 的样本，选择Dil-hCG2测试。此测试使用ThCG2试剂盒。当3.需要 Dil-hCG2，系统自动稀释样本并从 ThCG2 校准曲线上相应的剂量。这一系统通过乘以定义的稀释系数 (200) 来计算最终。4.另外，含量 1000 mIU/mL 的样本也可用机外预稀释来处理，步骤如下：将1 体积样本与199 体积缓冲液 II (1/200) 进行稀释或根据稀释规程进行稀释。注意：使用其它缓冲液进行稀释可导致错误结果。输入测试申请时输入预稀释系数。运行 ThCG 或 Dil-hCG2 测试。系统自动将结果乘以预

14、稀释系数并结果。注意：若系统将 Dil-hCG2 预稀释结果成 1000 mIU/mL (IU/L)，重新稀释至 1000 和 200000 mIU/mL (IU/L) 之间。若原样本在 Dil-hCG2 测定中读数 1000 mIU/mL (IU/L)，则需用 T hCG2 测定复检。若没有选择预稀释选项，在使用 Acs Total hCG 测定对稀释样本进定以后，将计算结果乘以稀释系数 200 ( 或其它所选系数 )。若使用Acs Total hCG 测定对稀释样本进定，计算出的值 5 mIU/mL (IU/L)，将1 体积原样本与 99 体积释系数 100。缓冲液 II (1/100)

15、重新稀释后再次测定。谨记将计算结果值乘以稀参考相应的系统操作手册和 / 或帮助系统，获取有关操作预释液样本的指南。5.6.7.忌重新使用在分析仪上停留时间超过 1 小时的少量样本。当达到 1000000 mIU/mL 时， Acs Total hCG 测定不会明显的 “钩状效应”。对于使用抗体的测定而言，存在着被样本内嗜异性抗体所干扰的可能性。经常与动物有接触或者接受过使用免疫球蛋白或免疫球蛋白碎片进行免疫治疗或步骤的，可能会产生抗体，比如：HAMA ( 人抗小鼠抗体 )，该抗体会干扰免疫测定。此外，其它的嗜异性抗的样本内。13,14体，比如人抗抗体，可能会存在于此类干扰性的抗体可能会导致结果

16、的错误。需对被怀疑带有此类抗体的的核查。的结果进行仔细8.在解释 Acs Total hCG 结果时，需参照该的整体临床情况，包括：症状、病史以及由其它测试所得的数据和其它相应的信息。Ac s Total hCG页码 4WB A33375A 2006 Beckman Coulter, Inc.9. 若总 hCG 水平与临床情况不相符合，必须通过另外的 hCG 方法或尿液测定来确认结果。1510.结果前要排除滋养层或非滋养层癌等状况。期望值1.2.每个通过 Ac需确立其本的参考范围，以确保能正确地反映某一特定人群的情况。s Total hCG 测定对人样本中的总hCG 浓度进定，这些样本来源于外

17、表健康的成年和无孕女性。观察到的总hCG 浓度范围如下所示：95% 范围(mIU/mL) 0.5 2.67中位数(mIU/mL) 0.5n参考人群250250 0.5 0.5 2.90无孕女性正常怀孕期中的代表性 hCG 范围总结如下。1 由于其它临床引注可能会显示出不同的值，每个应确立各自的参考范围。3.特定的性能特征方法学比较在 Acs 免疫测定系统和商品化免疫测定试剂盒上对使用 Acs Total hCG 测定得出的总hCG 值进行对比，使用 Deming 计算方式出如下统计数据： 2006 Beckman Coulter, Inc.WB A33375AAc s Total hCG页码

18、5n观察范围截距斜率相关系数(mIU/mL)(mIU/mL)(r)1191.82 939.50-6.560.9140.981561.82 68.91.420.8040.970大约孕龄hCG 大约范围( 周)(mIU/mL, IU/L)大约孕龄大约 hCG 范围( 周)(mIU/mL, IU/L)0.2 15 501 250 5002 3100 50003 4500 100004 51000 500005 610000 1000006 88 1210000 100000预期范围：外表健康的和未孕女性在 Acs 免疫测定系统上使用 Acs Total hCG 测定对成对和血浆样本进定得出的总hCG

19、 值进行对比，使用 Deming 计算方式出如下统计数据：稀释回收率( 线性)将含升高 hCG 水平的 2 个样本用 Ac数据：s Total hCG Calibrator S0 ( 零 ) 进行多点稀释，得到如下仪器 vs. 机外稀释相关性通过对机外 ( 手工 ) 稀释规程vs. Acs 系统稀释规程进行评估研究得出如下 Deming 回归分析。Ac s Total hCG页码 6WB A33375A 2006 Beckman Coulter, Inc.n观察范围调整后截距斜率相关系数(mIU/mL)(mIU/mL)(r)1051037 1963614970.9490.998921037 4

20、9948-167.791.0020.997641037 10267-10.450.9750.993样本 2预期浓度测定浓度回收率(mIU/mL)(mIU/mL)(%)原样本N/A739.83N/A1/1.2616.53618.321001/2369.92362.90981/4184.96171.73931/892.4883.38901/1646.2447.151021/3223.1224.74107平均% 回收率98样本 1预期浓度测定浓度回收率(mIU/mL)(mIU/mL)(%)原样本N/A524.87N/A1/1.2437.39438.181001/2262.44253.79971/41

21、31.22127.16971/865.6158.83901/1632.8031.70971/3216.4016.57101平均% 回收率97n观察范围截距斜率相关系数(mIU/mL)(mIU/mL)(r)1480.59 961.08-1.750.9570.995手工稀释， mIU/mL不精密度本测定在整个测定范围内所得出的总不精密度小于 10%。通过使用商品化的人质控品所进行的全部共 20 个测定，每个测定 3 次复检，持续 14 天的测定，提供下列数据，这些数据通过对变量分析 (ANOVA) 进行分析得来。16,17分析特异性 / 干扰含高达 10 mg/dL (171 mol/L) 胆红素

22、的样本，含相当于 1800 mg/dL (20.32 mmol/L) 甘油三酯的脂血样本和含高达 500 mg/dL (5 g/L) 血红蛋白的溶血样本，均不会影响总 hCG 浓度的测定。另 外，将 3 g/dL (30 g/L) 人白蛋白样本添加至内源白蛋白的样本中不会影响总 hCG 浓度的测定。当浓度分别为 1000 mIU/mL (IU/L)、 1000 mIU/mL (IU/L)、 1 mIU/mL (IU/L) 的 hLH、 hFSH 或hTSH添加进Acs Total hCG Calibrator S0 (零)时，没发现显著交叉反应( 0.5 mIU/mL IU/L)。基于等克分子

23、量 hCG 和游离 hCG 亚，摩尔百分比的测定是在多个试剂批号中进行的，这些试剂批号使用在 Acs Total hCG Calibrator S0 ( 零 ) 中的 10 mIU/mL (IU/L) WHO 75/551游离 hCG 亚分析灵敏度。其均值为 165% ( 观察范围为 142%184%， n=115)。按 95%度能与零 (Acs Total hCG Calibrator S0) 区别的， hCG 最低可检测水平是0.5 mIU/mL (IU/L)。可通过在多种测试分析中，对一条完整的 6 点校准曲线、质控以及零校准品的 10 次复检来确定该值。分析灵敏度的值是对校准曲线上偏离

24、零点校准品信号的平均值，两个标准差的点内插得来的。 2006 Beckman Coulter, Inc.WB A33375AAc s Total hCG页码 7总均值 (n=60)批内批内总不精密度样本(mIU/mL)SD(%CV)总SD(%CV)低6.950.152.150.172.42中22.350.371.670.632.81高321.174.291.3410.853.38总方法比较图TOTALhCG CALIBRATORS33505用途Acs Total hCG Calibrators 用于校准 Acs Total hCG 测定，以通过使用 Acs 免疫测定系统定量测定人和血浆的总 h

25、CG 水平。概述和说明定量测定的校准是一个如同测试样本那样，对已知分析物浓度的样本 ( 如，测定的校准品 )进试以计算其反应值的过程。测得的反应值与已知分析物浓度之间的数学关系，可用于确立校准曲线。此数学关系，或校准曲线，用于将的定量分析物浓度。样本的 RLU ( 光量子值 ) 测定值转换为特定Acs Total hCG Calibrators 内的分析物，可溯源至 WHO 三级国际标准 75/537。18 溯源性的建立过程是按 EN ISO 17511 进行的。溯源性使用这一批次校准品中具有代表性的样本，建立指定的值，该值对于 Acs 试剂的测定方法是特定的。使用其它方法确定的值可能会存在差

26、异。若此差异存在，可能是不同方法之间的偏倚造成的。产品信息Acs Total hCG Calibrators产品目录号 33505：S0S5， 4.0 mL/ 瓶即用型。-20C 环境下保存。使用前先在室温下解冻并轻轻倒转以混匀成份。防止形成气泡。每次使用完后将校准品返回到 -20C 环境下。在 -20C 环境下保存时，稳定期可持续至上所指明的有效期。可能存在变质情况的表现为质控值超出了范围。参见校准卡和 / 或小瓶上的以获取准确的浓度信息。警告和供体外使用。经过测试发现用于试剂的人源性材料，对于乙型肝炎、丙型肝炎 (HCV) 和免疫缺陷(HIV-1 和 HIV-2) 抗体，均显示为无反应。由

27、于任何已知的测试方法均无法完全确保不染性物质，因此处理试剂与样本时均视其具有传染疾病的可能。19Ac s Total hCG页码 8WB A33375A 2006 Beckman Coulter, Inc.S0:牛白蛋白 (BSA) 缓冲基质 ( 含表面活性剂、 0.1% 叠氮钠和0.5% ProClin* 300)。含 0.0 mIU/mL (IU/L) hCG。S1, S2, S3, S4, S5:水平分别大约为 5、 25、 150、 500 和 1000 mIU/mL (IU/L) 的 hCG，溶于 BSA 缓冲基质 ( 含表面活性剂、 0.1% 叠氮钠和 0.5% ProClin 3

28、00)。校准卡：1从有孕女性尿液中提取的人源性材料当作具有潜在污染性的物品来处理。19叠氮钠可能会与铅以及铜制的管件发生反应，形成具有高危种液体时，应以大量的水进行冲洗，防止叠氮物的集结。9 Xi. 刺激物：0.5% ProClin 300。性的金属叠氮物。在倾弃这R 43：如接触皮肤可引起致敏作用。S 28-37：接触到皮肤后应立即用大量肥皂和水冲洗。应戴适用套。材料安全数据资料 (MSDS) 可按需索取。参考相应的系统操作手册和 / 或帮助系统，获取有关校准原理、设置校准品系列、校准品测试申请的输入和评论校准数据的信息。方法Acs Total hCG Calibrators 提供的是 6

29、种浓度 ：零和大约 5、25、150、500 和 1000 mIU/mL，校准细节是从纯 hCG 和 BSA 缓冲基质中通过重量校准品的测定应做双份。备的。测定校准数据的有效期长达 28 天。方法的局限性试剂内微生物污染的迹象或显著浑浊，应弃去。 2006 Beckman Coulter, Inc.WB A33375AAc s Total hCG页码 9参考文献1Hohnadel DC, Kaplan LA. Beta-hCG. Methods in clinical chemistry. Edited by Pesc, AJ and Kaplan LA. St. Louis, MO: The

30、 C.V. Mosby Company, 1987.Birken S. Chemistry of human choriogonadotropin. Annales dendocrinologie 1984; 45: 297-305.Human reproduction unit, WHO report of meeting. Assay of protein hormones related to human reproduction:23problems of specificity of assay methods and referentandards. Acta Endocrinol

31、ogy 1972; 71: 625-637.456Kardana A, et al. The heterogeneity of hCG. Endocrinology 1991; 129: 1541-1567. Vaitukaitis JL. Recent progress in hormone research 1976; 32: 289.Sokolove PJ, Faix JD. Agreement ofact and beta chain-specific HCG assays in abnormal pregnancy. Journal of Clinical Immunoassay,

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