植物RNA大提试剂盒-柱式

1、 技术咨询电话：400-607-9999注意：本制品仅供研究使用，请勿用于临床治疗等其他用途植物RNA大提试剂盒-柱式Large Scale Column Plant RNAout货号: M090105产品及特点 本产品是本公司柱式植物RNAOUT（CAT#:M090108）的大提升级产品，它结合了植物RNAOUT的高效性(其效果在近五十多种各类植物中得到验证，植物名单见植物RNAOUT产品介绍的附录)和本公司柱式纯化系列产品的快捷性。该产品特点如下：样品处理量大，一次可以处理5g的植物材料。操作简单快速，处理一个样品只需要约二十分钟。RNA纯度更高，平均 OD260/280一般都在2.0左右

2、，能够有效去除大多数植物中的多糖污染。产量高（具体根据材料不同而不同）。得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。规格及成分 成 份5次包装溶液A100 mL溶液B30 mL溶液C100 mL大提离心吸附柱5套通用洗柱液100 mLRNA洗脱液5 mL使用手册1份运输及保存常温运输，4保存，有效期一年。使用方法估算组织细胞的用量。每次大量提取一般需要3-5g植物叶片、或1-3g植物种子、或5-10g植物果实。先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在RNALOCKER中的植物组织需用纸吸去RNALOCKER液体后再剪切成小块)，放入50mL塑料离心管中，加入20mL

3、溶液A，然后用匀浆器匀浆。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。也可以使用液氮砚磨法破碎植物组织，但为避免氧化，砚磨时必须将组织浸泡在溶液A中进行，不能只在液氮中砚磨，然后再将砚磨物转移至干净的50 mL塑料离心管中。注意：溶解溶液A沉淀。溶液A在4放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。在离心管中加入5 mL的溶液B和5 mL自备氯仿，在振荡器上充分振荡1-3分钟，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。室温5000-7000 rpm离心3-5分钟，水相和有机相之间将有较厚的细胞破碎物。注意：可根据实际情况适当延长离心时间。将上清液转移

4、到另一干净的50mL塑料离心管中。下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下少量上清液不取。加入等体积的溶液C，充分颠倒混匀。将一半的溶液转移到大提离心吸附柱中，5000-7000 rpm室温离心3-5分钟，弃穿透液。将剩下的一半溶液转移到同一大提离心吸附柱中， 5000-7000 rpm室温离心3-5分钟，弃穿透液。加10 mL通用洗柱液，室温离心3-5分钟，弃穿透液。重复上步一次，加10 mL通用洗柱液，室温离心3-5分钟，弃穿透液。室温离心1-3分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。将大提离心吸附柱转移到一个自备的RNase-free收集管中

5、，加入0.5 mL RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。5000-7000 rpm室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品。再加入0.5 mL RNA洗脱液，重复上面两步一次。将两次洗脱得到的RNA立即使用或存放于-80待用RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子（BioTechniques，28：414，2000）。RNA产量产率测定：将5-10 L RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40 g/mL），进而计算出RNA的产量（浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD26