分类专题仪器使用VCS原理对WBC进行是用测量的

1、分类专题仪器使用 VCS 原理对 WBC 进行分类。V 是用原理测量 WBC 的体积，C 是用23MHz 的高频测量的WBC 核的体积 RF，S 是用激光散色光测量的 WBC 膜的复杂程度。要达到良好的分类效果，四个非常重要：一、样本回路，特别是样本，即 WBC 膨胀缩小的化学平衡。二、鞘液回路。三、光路。四、电路放大与分析。下面从这四个方面来论述，最后再总结一下与分类有关的重要参数：一、在样本回路中，试剂、温度等会影响样本。试剂的中，要保证 540/350ul 的 e-lyse 和 31ul 的样本迅速的进入混匀行膨胀的过程。再是 200/125ul 的 s-lyse 进入混匀池，使被胀大的

2、白细胞缩回原态。经过这样处理的样本进入 flowcell。在这里需要注意以下几点：1）、试剂的量要准确，需要用量筒测试。要特别注意的是，在用量筒测量试剂的量是一回事，实际做样本时试剂进入混匀池又是一回事。也就是说 F21，F22，F23，F24 不能完全模拟做样本时的状态。有时用量筒测量试剂量时是准确的，但在样本进到混匀有一部分 e-lyse 被吸到混匀池中，从而造成了实际e-lyse 试剂到达混匀池中偏少，这是由于混匀池通大气，在接下来会。2）、e-lyse 和 s-lyse 试剂达到混匀池的速度要快，如果 sol60 或 sol63 损坏或被改装成单向阀，则有可能会造成速度偏慢，e-lys

3、e 与样本接触时间偏长。3）、e-lyse 和 s-lyse 试剂量的匹配。正常情况下，e-lyse 和 s-lyse 试剂泵是同时打大的量或同时打小的量。当 e-lyse 或 s-lyse 试剂泵的中间管子（SOL82 控制的管子）被折住 时，就会在高温模式下，两个试剂泵打出的量就不匹配。4）、sol63 和 sol60 的动作要快（F05 测试时听声音），电磁阀与泵的动作没有配合好，会造成 e-lyse 或 s-lyse 没有完全打进混匀池或者进入混匀池的速度偏慢。5）、试剂有没有变质，包括剩余的试剂相互混匀，试剂存放的温度不对，国产试剂等等。6）、混匀池的排空与冲洗。7）、仪器根据环境温

4、度的变化来选择最佳的分类条件。1.1、E-Lyse 和S-Lyse 试剂泵的工作原理。见。1.2、分类试剂进入混匀池的流路。见。1.3、混匀池的工作原理与故障分析。见。1.4、温度对分类的影响。见。二、对鞘液回路进行分析。鞘液中的“鞘”是剑鞘的“鞘”，其含义是样本被在鞘液中（剑被在剑鞘中）。鞘液的作用是使 WBC 一个一个通过池。池的工作原理与故障分析。见。鞘液回路容易出现的故障：、与鞘液相关的八个阀动作不好：VL49（排废），VL55（上鞘液出），VL46A(上鞘液进)，VL41（下鞘液出），VL46B（下鞘液进），VL52（混匀VL54（鞘液与反冲液的切换）。、与VL46A 和VL46B

5、并联的管子堵。），VL44（网织腔进），、池接头断；池底部的接头堵或者脱落。、鞘液罐中有细菌滋生，会影响DIFF 的本底。鞘液罐的浮子开关问题。、池脏，下鞘液处有赃物。三、光路。从激光光源到棱镜，到衰减。池，再到 LS Sensor，要确保光路的位置正确，激光没有要保证光路位置正确，就需要mode 值也在控。调好光路，使S 的 CV 值调在 4 以下，gain 和 mean-调整光路分两步：先进行粗调，调出细红线，见。再进行细调，固定好螺丝，见。光路的 S 的 CV 值如果偏大，则图形偏胖，细胞群在S 轴方向不集中，分类的重复性就会差。S 的 gain 值太大会使分类散点图往右移，会造成 EO

6、 假性增高。四、电路放大与分析。分类信号的流程，见。工作站中通过 COULTER AccuGateysis 的程序(算法)，对原始数据进行分析。AccuGateysis 是一种统计分析工具。它采用 adaptive contouring methods 与 细胞亚群的多方案分析(multiresolution比。ysis) 来找到各亚群之间的最佳分界线，最终求出 WBC 的分类百分如果存在异常细胞分布与异常细胞群，AccuGate 分析时会产生相应的怀疑性信息。在 Worksion 中将WBC 总数与百分比相乘，就可以求出各细胞亚群的绝对数。在 Worksion 中显示 2 种类型的散点图：二

7、维与三维。散点图中每种颜色代表不同的细胞亚群，颜色的灰度代表颗粒的密度(浓度)。颜色越暗，颗粒数越少；颜色越亮，颗粒数越多。COULTER AccuGateysis 的程序(算法)的步骤，见。五、其他的重要参数有：CV，gain，Flowrate，NeDCMn，NeOPMn，NeRLSMn，LS offset，DC count，Noise 等等。5.1、CV 中最重要的S 的 CV，在池的调整中，X 轴方CV 的影响比较大。如果S的 CV 大，则会使分类的图形在左右方向上变宽，整个图形会变胖，分类的重复性就会变差。V 和C 的 CV 值取决于流路，包括池，鞘液流与样本流。池内要干净，鞘力与样本

8、压力稳定，流路中没有颗粒（如鞘液罐中的细菌会影响其 CV 值），这样就能保证V 和C 的 CV 值。对于 C 的 CV 值，还需要强调 TTM 模块中地线对其有影响，S 的前置放的固定螺丝也会对其有影响。与 RF BOX5.2、V 和 C 的gain 调整，需要用胶（P/N：6605419），S 的 gain 调整需要用Latron Control（P/N：7546914）。Latron Control 同时来确认V 和C 的 gain。仪器根据细胞亚群的位置来给出一些提示。如在正常中性粒细胞群的上方有较多的颗粒，就会提示 Imm NE1。Gain 的调整失当，会造成VCS 的 mean 值会

9、改变，也就是会影响分类散点图中的各个细胞群的位置。从而造成仪器提示的假阳性与假。5.3、正常情况下，仪器的 Flowrate 是一个定值，应该为WBC/time=63。如果与鞘液相关的八个阀动作不好，sheath/diff/retic 调节阀本身不好等原因都会影响 Flowrate。5.4、NeDCMn，NeOPMn，NeRLSMn 是样本的中性亚群的VCS 的平均峰值。E-Lyse 的量会影响该值。当然 Gain 也会影响该值。正常人群样本的 NeDCMn=1455，NeOPMn=1405，NeRLSMn=1455。如果不在控，则可能也会造成仪器提示的假阳性与假。5.4、LS offset

10、指激光在没有样本通过池时的本底光强度。Offset 要求限制在 1.2V 以下，其饱和电压为 13V。可想而知，如果 offset 电压太高，将会影响S 信号的线性，最终将影响分类的结果。5.5、DC count 指分类细胞的有效颗粒数，也就是通常指化学平衡好坏的标准，要求大多数正常样本大于 7795。如果 E-Lyse 与S-Lyse 改变相同的量，count 影响非常大。会发现S-Lyse 会对 DC5.6、Noise 是电路的噪音，有动态噪音与静态噪音。在 ready 状态下测量 VCSog 板上 VCS 测试点的电压，要求 V4.5 mV ，C4.5 mV ，S3.0mV 。在用稀释液做乳胶的状态下，测量 VCSog 板上 VCS 测试点的电压，要求 V12mV，C38mV