临床免疫学与检验：免疫细胞功能检测技术

1、免疫细胞功能检测技术(二)免疫细胞包括那些细胞？ 淋巴细胞、NK细胞、K细胞等 中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞第一节 淋巴细胞的功能检测体内试验：迟发型超敏反应，间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或者有丝分裂原的应答反应。体外试验：淋巴细胞对抗原或者有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒反应及淋巴细胞分泌产物的测定。一、T细胞功能检测通过了解和掌握T淋巴细胞的功能，建立检测T淋巴细胞功能的体内和体外实验。（一）T细胞增殖实验形态学检测法转化率：正常值：6080%3H-TdR掺入法： PHA刺激管cmp均值 SI= 对照管cmp均值MTT比色法： MTT为细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶的底物（二）T细胞分泌

2、功能的测定细胞因子的检测（三）T细胞介导的细胞毒试验形态学检测法 将CTL细胞与肿瘤细胞共培养，显微镜下计数残留肿瘤细胞数量51Cr释放法： 放射性核素标记靶细胞，若CTL杀伤靶细胞，则放射性核素释放，通过检测放射性核素的活性判断淋巴细胞的杀伤功能。体内试验（迟发型的超敏反应）特异性抗原皮肤试验 结核菌素 白色念珠菌素 皮肤毛癣菌素 腮腺炎病毒PHA皮肤试验：以单个核浸润为主的炎症反应。二、B细胞功能检测B细胞主要功能是产生Ig参与体液免疫，因此，B细胞功能实验方法主要是通过检测受试者血清Ig含量和体外B细胞增殖和产生抗体能力。（一）B细胞增殖实验刺激物：LPS SPA 抗IgM抗体（二）溶血

3、空斑实验（三）酶联免疫斑点试验（四）体内试验抗原刺激：白喉类毒素 破伤风类毒素 多价肺炎链球菌菌苗三、NK细胞活性测定NK细胞的生物学活性： 杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞（一）形态学法效应细胞：外周血单个核细胞或小鼠脾细胞靶细胞：肿瘤细胞方法：共孵育，台盼蓝染色结果：计数着染靶细胞数，即为NK细胞活性（二）酶释放法正常情况下，LDH不能透过细胞膜，当靶细胞受到效应细胞攻击，细胞膜通透性改变，LDH从细胞浆中使出，还原INT或者NBT，形成甲肷类化合物，通过分光光度计读取A值，计算NK细胞杀伤靶细胞的活性。 INT：碘硝基氯化氮唑蓝 NBT：硝基蓝四唑氮（三）放射性核素释放法同T淋巴细胞功能检测5

4、1Cr或者125I（四）化学发光法呼吸爆发-大量活性氧自由基-激发细胞内物质发光-鲁米诺增强效应-发光强度活性氧自由基 超氧阴离子 过氧化氢 羟自由基 单态氧等第二节 吞噬细胞功能检测大吞噬细胞： 单核巨噬细胞：吞噬功能 抗原提呈功能小吞噬细胞： 中性粒细胞：吞噬功能 验证损伤功能一、中性粒细胞功能检测趋化作用吞噬作用（一）趋化功能检测原理： 趋化因子：微生物的细胞成分和代谢成分 补体活性片段C3a，C5a 某些细胞因子等 趋化强度可以反映中性粒细胞的趋化功能。滤膜渗透法（二）吞噬和杀菌功能检测显微镜检测法 白细胞悬液+葡萄球菌或白色念珠菌-涂片，固定，美蓝染色-镜下计数靶细胞对细菌的吞噬情况

5、 溶菌法 将白细胞悬液与经新鲜人血清调理过的细菌（大肠杆菌或者金黄色葡萄球菌）按一定比例混合，温育，每隔一段时间定量取培养物，稀释后接种固体平板培养基，37度18小时候，计数生长菌落数，了解中性粒细胞杀菌能力NBT还原实验 由于中性粒细胞在杀菌过程中能量消耗剧增，耗氧量亦随之相应增加，磷酸己糖旁路代谢活力增强，葡萄糖6-磷酸氧化脱氢，此时加入NBT可接受所脱的氢，使原先呈淡黄色的NBT还原成点状或块状甲朊颗粒并沉积在胞浆内。 二、巨噬细胞功能检测来源： 斑蝥敷贴 外周血 肺泡灌洗液 腹膜透析液（一）碳粒廓清试验原理： 小鼠肝脏中的枯否细胞、脾巨噬细胞均可吞噬清除碳颗粒。（二）吞噬功能检测吞噬细胞+鸡红细胞 孵育、染色、油镜下观察 消化程度分级：（三）巨噬细胞溶酶体酶的测定酸性磷酸酶的测定 硝酸铅法 偶氮法非特异性酯酶的测定 分解a-奈醋酸分解成萘酚和醋酸，萘酚与偶氮染料结合，形成有色反应沉