2×CTAB法植物总DNA提取

1、2XCTAB法植物总DNA提取液氮研磨1g左右的植物组织，转移到离心管中。改用研磨枪在冰上研磨，不加B-巯基乙醇研磨时可加入适量的PVP、B-巯基乙醇。若CTAB准备2-3天内用完，则可将PVP、B-巯基乙醇直接加入其中。C：TABPVP|3-mere0.5ml0.02&2.515nil0.2?20mlo.sg100pl加入500卩1的2*CTAB(60C或65C预热)，颠倒混合均匀后在60C或65C水浴30m-lh小时,其间要上下颠倒混匀数次。3取出离心管，加入等体积的24：1(三氯甲烷：异戊醇)，上下颠倒充分混合。若量多，则可以直接侧立于摇床上晃动10分钟。4.12000转速离心5-10m

2、in。将离心管动作轻缓的取出转子，放置于离心管架上。离心后溶液分三层：上层为水相；中层为碎片和蛋白相；底层为氯仿迅速进入下一步，以免各相混合5用移液枪吸取管中上层水相，动作一定要轻缓，不可搅动其它两层。此步骤要宁舍不贪多，尽量避免吸取到下层液体。若上步骤中中间层较厚，则继续加入等体积24：1，再次抽提一次，直至中间层较薄。在抽提出的水相中加入1/3体积的5M的KAc及等体积的异丙醇(4C预冷)，轻轻晃动混合均匀后在-20C沉淀。沉淀至少15分钟至过夜。6-1在抽提出的水相中加入1/10体积醋酸钠(pH5.2,3M)，混匀后，加入2倍体积预冷的无水乙醇，-20C沉淀15min至过夜。6-3.在抽

3、提出的水相中加入加入2倍体积预冷的无水乙醇，-20C沉淀15分钟至过夜。a.时间越长，DNA的产量越多，污染也越多12000转速离心5-10min,去上清，倒置于吸水纸上数分钟，加入700卩170%的酒精，上下颠倒数次，洗涤沉淀。12000转离心5-10m，去上清，倒置于吸水纸上数分钟。重复一遍。12000转速离心5-10min，去上清，倒置于吸水纸上数分钟，最后置于超净工作台中吹干。在离心管中加入30-50卩1的灭菌去离子水或者TE溶液，4C放置数小时，使其充分溶解。用琼脂糖凝胶检测结果。-20C70C低温保存。去除总DNA中的RNA污染先做预扩增实验，若RNE污染无严重影响则舍去该步骤A在

4、总DNA溶液中加入灭菌去离子水或者TE溶液调整总体积至200卩1,加入10卩RNase-A(10mg/ml)4C过夜，或者37C1h.用等体积的24：1抽提。沉淀DNA洗涤DNA干燥DNA溶解DNA20C70C低温保存。B直接加入10卩RNase-A(10mg/ml)后冷冻保存。试剂配方IMTris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)pH浓HClTris去离子水7.4约70ml121.1g定容至1升7.6约60ml121.1g定容至1升8.0约42ml121.1g定容至1升高温高压灭菌后，室温保存注意：应该在溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升

5、高1C,溶液的pH大约降低0.03个单位5XTBE缓冲液Tris硼酸0.5MEDTA(pH8.0)去离子水54g27.5g20ml定容至1L室温保存50XTAE缓冲液Tris冰乙酸0.5MEDTA(pH8.0)去离子水242g57.1ml100ml定容至1L室温保存2XCTAB成分终浓度已有溶液浓度配100ml所加量CTAB2%2gTris-HCl(pH8.0)100mM1M10mlEDTA20mM0.5M4mlNaCl1.4M5M28ml0.5MEDTA(pH8.0)二水乙二胺四乙酸二钠Na2EDTA2H2ONaOH去离子水186.1g约20克定容至1L高温高压灭菌，室温保存。注：只有pH值

6、接近8.0时，EDTA才能完全溶解。溶解过程可在磁力搅拌器上剧烈搅拌。耗材准备：需要灭菌者：1.5ml离心管、研磨枪头、蓝色枪头、黄色枪头、其他：卫生纸（吸水用）、镊子、封口膜、挑菌针、酒精灯、70%酒精、离心管架子、离心管盒子、移液枪。CTAB法提取植物基因组药品：2*CTAB终浓度组分药品用量0.1M/L20nM/L1MTris-HCl(pH8.0)0.5MEDTA(pH8.0)NaClCTABPVP40100ml40ml82g20g20g加去离子水800ml充分溶解定容到IL。120C1.5个大气压，灭菌20分钟用之前加0.2-1%的0.5MEDTA(pH8.0)配制量：1L配制方法：称

7、取186.1gNa2EDTA2H2O，置于1L烧杯中。加入约800mL的去离子水，充分搅拌。用NaOH调节pH值值8.0(约20gNaOH)。注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。加去离子水将溶液定容至1L。适量分成小份后，高温高压灭菌。室温保存1MTris-HCl(pH8.0)氯仿：异戊醇24:1异丙醇流程1、研钵预冷，叶片放入研钵，加液氮，研磨成粉末，用小勺放入2.0mlEP管。2、加入65C预热的2*CTAB600ul,摇匀；3、65C水浴1小时，lOmin摇动一次4、12000rpm离心10min,取上清到一新的EP管中。(次步骤视情况可省略)5、加入200ul氯仿：异戊醇(2

8、4:1)。6、12000rpm离心10min,取上层水相到一新的EP管中。7、加入等体积的异丙醇，轻轻上下摇动10次，静置10min。8、12000rpm离心10min,弃上清9、加入75%乙醇1.0ml,摇动10、12000rpm离心2min,弃上清11、吸取多余乙醇，室温吹干12、加入50ul的ddH2O,或TE溶解。-20C保存CTAB法提取植物基因组DNACTAB法原理CTAB(Cetyltrimethylammoniumbromide)，十六烷基三甲基溴化铵，是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，能与核酸形成复合物，具有从低离子强度溶液中沉淀核酸的特性。当降低溶液盐浓度到一定程度(0.3

9、mol/LNaCl)时，CTAB-核酸的复合物从溶液中沉淀，通过离心就可将其与蛋白，多糖类物质分开，在经过有机溶剂抽提,去除蛋白，多糖，酚类等杂质。最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA，而CTAB溶于乙醇或异丙醇而除去在高离子强度的溶液中(0.7mol/LNaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，不能沉淀核酸。CTAB溶液在低于15C时会形成沉淀析出，因此，在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15C。另外，它还能保护DNA不受内源核酸酶的降解。主要试剂与溶液的配制：PVP(聚乙烯吡咯烷酮K30)巯基乙醇氯仿：异戊醇(24:1)异丙醇70%乙醇Tris-苯酚RNaseA无水

10、乙醇CTAB溶液：CTAB20g/LNaCl(58.44)1.4mol/L(81.816g)EDTA(292.25)10mmol/L(2.9225g)Tris(121.14)100mmol/L(12.114g)pH8.01XTE缓冲液：EDTA(292.25)1mmol/L(0.29225g)Tris(121.14)10mmol/L(1.2114g)pH8.0NaAC溶液：NaAC(82.03)3mol/L(246.09g)pH4.0植物总DNA的提取1、取适量甘薯新鲜叶片，用液氮迅速研磨，中间加PVP(聚乙烯吡咯烷酮K30)少许，成粉末后转入10mL的离心管中，放入液氮或-80C冰箱储存(在

11、研磨样品时，研的细和研的粗，提出的DNA量可以相差几倍，所以，在液氮保护的很好的情况下尽量多研磨几次)。2、将(200ml)CTAB溶液放于65C水浴锅中预热。3、力Mml巯基乙醇到预热的200mlCTAB中。4、速口3ml预热的CTAB到装有粉末的10mL离心管中，之后放入65C水浴锅中，保温3060min,期间轻摇数次（一般20min左右一次，刚投入水浴时可以稍快速的晃动，之后的晃动一定要轻柔）。5、加入34ml氯仿：异戊醇（24:1）（在通风橱中操作），轻摇混匀至乳白色（100200次，剧烈晃动会使DNA机械切割）。6、1520C,11000rpm离心15min（CTAB配平，相对应的离

12、心管，质量相差0.7mol/LNaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。CTAB提取缓冲液的经典配方Tris-HCl(pH8.0)提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性；NaCl提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，在于液相中；CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；卩-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；

13、同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。使用酚的优点：1有效变性蛋白质；2抑制了DNase的降解作用。缺点：1.能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly(A)RNA。2.不能完全抑制RNase的活性。氯仿的作用？氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。(酚易溶于氯仿中)用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？异

14、戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子?用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl或NaAc,Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。简言之，无论哪种抽提方法，药品的作用基本都是一样的。CTAB法原理(植物DNA提取经典方法)发布：2010-06-0208:20|来源:生物吧|编辑:刘浩|查看：634次原理：CTAB(hexadecyltrimeth

15、ylammoniumbromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(0.7mol/LNaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。注：CTAB溶液在低于15C时会形成沉淀析出，因此，在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15C。一、CTAB提取缓冲液的经典配方：Tris-HCl(pH8.0)提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性；NaCl提供一个高

16、盐环境，使DNP充分溶解，存在于液相中；CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；B-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除。二、CTAB提取缓冲液的改进配方：PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖；蛋白质的去除：酚/氯仿抽提使用变性剂变性(SDS、异硫氰酸胍等)高盐洗涤蛋白酶处理核酸分离，纯(2)DNA降解，DNA提取常见问题。实验材料不佳或量少，破壁或裂解不充分，吸附或沉淀不完全，洗化；多糖的去除：高盐法：用乙醇沉淀时，在待沉淀溶液中加入1/2体积的5MNa

17、CI，高盐可溶解多糖。用多糖水解酶将多糖降解。在提取缓冲液中加一定量的氯苯(1/2体积)，氯苯可以与多糖的羟基作用，从而去除多糖。用PEG8000代替乙醇沉淀DNA：在500pLDNA液中加入200川20%PEG8000(含1.2MNaCI)，冰浴20min.核酸分离，纯化；多酚的去除:在抽提液中加入防止酚类氧化的试剂：B-巯基乙醇、抗坏血酸、半胱氨酸、二硫苏糖醇等加入易与酚类结合的试剂：如PVP(聚乙烯吡咯酮),PEG(聚乙二醇)，它们与酚类有较强的亲和力，可防止酚类与DNA的结合；盐离子的去除：70%的乙醇洗涤核酸吸附,沉淀和溶解使用合适的吸附材料吸附核酸，其它的杂质均被洗掉，达到纯化DN

18、A的目的另一种方式加入1/10体积的NaAc(pH5.2,3M)，用预冷的乙醇或异丙醇沉淀RNA吸附或沉淀后应用70%的乙醇洗涤，以除去盐离子等若长期储存建议使用TE缓冲液溶解TE中的EDTA能螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNasepH值为8.0，可防止DNA发生酸解。三、基因组DNA提取常见问题DNA中含有蛋白、多糖、多酚类杂质。DNA在溶解前，有酒精残留，酒精抑制后续酶解反应，DNA中残留有金属离子，有RNA的存留。对策：重新纯化DNA，去除蛋白、多糖、多酚等杂质，重新沉淀DNA，让酒精充分挥发，增加70%乙醇洗涤的次数(2-3次)，加入RNase降解RNA。(1)DNA样品不纯，抑制

19、后续酶解和PCR反应。DNA提取常见问题：材料不新鲜或反复冻融、未很好抑制内源核酸酶的活性、提取过程操作过于剧烈，DNA被机械打断，外源核酸酶污染反复冻融。尽量取新鲜材料，低温保存材料避免反复冻融，液氮研磨或匀浆组织后，应在解冻前加入裂解缓冲液。在提取内源核酸酶含量丰富的材料的DNA时，可增加裂解液中螯合剂的含量，细胞裂解后的后续操作应尽量轻柔。所有试剂用无菌水配制，耗材经高温灭菌。将DNA分装保存于缓冲液中，避免反复冻融。涤时DNA丢失。尽量选用新鲜（幼嫩）的材料，动植物要匀浆研磨充分；G+菌，酵母裂解前先用生物酶或机械方式破壁。高温裂解时，时间适当延长（对于动物细胞，细菌可增加PK的用量）

20、。增加吸附的时间、或低温沉淀小心操作。要用冰冻材料提出高质量的基因组DNA,应确保以下几点：确保采样后立即投入液氮中保存.在磨样时一定要一直使材料处于低温状态。研磨前先将液氮倒入研钵，研钵彻底冷却后，再放入材料，研磨过程中，一定不要让液氮挥发净使材料回温！否则会DNA降解得很厉害。装管的时候，材料一定要有液氮的保护才行!否则研磨时的液氮保护DNA不都前功尽弃了？可以这样做：将几个离心管放入一个容器，向容器中加液氮，将其冷冻一下，使之处于低温状态，将液氮还为挥发干净的材料放入管内，不要急着盖盖子，因为液氮不挥发干净就盖上会再次弹开。将离心管放入盛有液氮的容器，等管内的液氮挥发干净盖上盖子即可。另

21、外，如果是在离心管上编号，最好在冷冻前写好，否则离心管冷冻后材料会受影响不说，也很难写上。提取DNA时加液氮的目的主要是防止DNA的降解，所以必须一直提醒自己，减少材料回温的机会，液氮保护必须自始至终。3在用CTAB法提取时，刚投入水浴时可以稍快速的晃动，之后的晃动一定要轻柔！加酚/氯仿/异戊醇静置30min后，离心温度不可过低。尽量保持在15度以上。将DNA加入异丙醇析出时用的枪头一定要剪过的。这点很重要。过尖的枪头会把DNA链弄断。加入异丙醇后出现的DNA絮状物尽量要挑出，尽量不要离心，因为离心后虽然产量会增大，但是不完整的DNA也增多了。另外，看楼主的电泳图条带比较弱，看来不只是降解，提

22、取量也比较少。这里对于增加提取量想说明一点，在研磨样品时，研得细和研得很细，提出的DNA量可以相差几倍！所以，在液氮保护的很好的情况下多研磨几次，要比在后面的过程中离心以增加产量要划得来！主要试剂的配制参考（美）萨姆布鲁克（Sambrook,J.）等.分子克隆实验指南（下册）配置如下94：（1）0.5mol/LEDTA（pH8.0）：称取EDTA-Na218.61g，力口80mL双蒸水，磁力搅拌器上剧烈搅拌。加入7mL10mo1/LNaOH调至pH8.0再用双蒸水定容到100mL，在1.03X105Pa下高压灭菌20min。（2）5mol/LNaC1溶液：称取NaCl29.22g，溶解于90m

23、L的双蒸水，加热到80C溶解，冷却，再用双蒸水定容100mL,在高压灭菌20min。（3）10mol/LNaOH溶液：称取40.00gNaOH溶于80mL的双蒸水，搅拌，定容到100mL。1mol/LTris-HCl溶液(pH8.0)：称取12.114gTris碱，溶于80mL的双蒸水,加入浓HC14.2mL,调整PH值到8.0,加水定容到100mL,高压灭菌20min。10%CTAB(m/v)：称取CTAB10.00g，溶解于80mL的双蒸水，加热促进溶解，加双蒸水定容到100mL,室温保存。5mo1/LKAc溶液(pH4.8和6.5):分别称取KAc晶体49.07g,溶于80mL的双蒸水，

24、再用冰乙酸调至pH4.8和6.5,加双蒸水定容到100mL,在1.03X105Pa下灭菌20min。4C保存。3mo1/LNaAc*3H2O溶液(pH5.2)：称取NaAc晶体20.412g溶解于约30mL的双蒸水，用冰乙酸调至pH5.2,加双蒸水定容到50mL,高压灭菌20min。4C保存。提取缓冲液(0.4mol/L葡萄糖，3%PVP,2%B-巯基乙醇)250mL：称取葡萄糖19.817g、PVP7.50g,加水溶解并定容到250mL,在1.03X105Pa下灭菌20min,B-巯基乙醇现用现加。4C保存。裂解缓冲液(3%CTAB；100mmo1/LTris-HC1,pH8.0；20mmo

25、1/LEDTA,pH8.0；1.4mol/LNaCl；2%B-巯基乙醇)100mL：取10%CTAB30mL,加1mol/LTrisHC1(pH8.0)10mL,加0.5mo1/LEDTA(pH8.0)4mL,加5mol/LNaCl28mL并定容到100mL,高压灭菌20min,B-巯基乙醇现用现加。(11)TE缓冲液(10mmo1/LTris-HC1,pH8.0；1mmo1/LEDTA,pH8.0):取Tris-HCl溶液(pH8.0)1mL,EDTA(pH8.0)0.2mL,用双蒸水定容到100mL,高压灭菌20min。4C保存。(12)电泳缓冲液TAE(Tris-乙酸)的配制50XTAE

26、母液的配制：242.0gTris-Bace、57.1mL冰乙酸、100ml0.5mo1/LEDTA(pH8.0)，用双蒸水空容至1000mL。1XTAE电泳缓冲液的配制：取50XTAE10mL,再加入490mL双蒸水，定容至500mL主要溶液如下：1MTris-HC1(pH8.0)：在800mL水中溶解121gTris碱，用浓HC1调节pH至所需值pH8.0(约42mLHC1),加水定容1000mL，分装后高压灭菌。0.5MEDTA(pH8.0)：在400mL水中加入90.05g二水乙二胺四乙酸二钠(EDTANa22H2O),搅拌溶解，用NaOH调pH至8.0(约10gNaOH颗粒)，定容至5

27、00mL，高压灭菌。5MNaCl：称取292.2gNaCl，用双蒸水定容到1000mL，高压灭菌备用。TE缓冲液(pH8.0)：10mMTris-HC1(pH8.0),1.0mMEDTA(pH8.0)。2XCTAB提取液(pH8.0)：2%(w/v)CTAB,1.4MNaCl,20mMEDTA,100mMTris-HC1,0.2%巯基乙醇(v/v)。即称取CTAB2g,加蒸馏水40mL,力口1MTris-HCl(pH8.0)10mL、0.5MEDTA(pH8.0)4mL和5MNaCl28mL,待CTAB溶解后用蒸馏水定容到100mL。CTAB提取DNA缓冲液配方CTAB4gNaCl16.364

28、g1MTris-HCl20ml(PH8.0)0.5MEDTA8ml,先用70mlddH2O溶解，再定容至200ml灭菌。TE缓冲液配方TE的组成浓度为：10mMTris-HCl；1mMEDTAPH=8.0，配制过程如下：量取下列溶液于500ml烧杯中1MTris-HClBufferPH=8.05ml0.5MEDTAPH=8.01ml向烧杯中加入约400mlddH2O均匀混合；将溶液定容到500ml后，高温高压灭菌；室温保存.CTAB法提取植物基因组DNA1实验原理1、在生物体中核酸常与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在,在制备核酸时，通过研磨破坏细胞壁和细胞膜，使核蛋白被释放出来。2、在浓氯

29、化钠溶液(12mol/L)中，DNA核蛋白的溶解度很大，RNA核蛋白的溶解度很小而在稀氯化钠溶液(0.14mol/L)中QNA核蛋白的溶解度很小，RNA核蛋白的溶解度很大。因此，可利用不同浓度的氯化钠溶液将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品中分别抽提出来。3、进一步将蛋白等杂质除去，常采用的去除蛋白：用含异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液，使其乳化，然后离心除去变性蛋白质，此时蛋白质凝胶停留在水相和氯仿相中间,而DNA溶于上层水相。用两倍体积95乙醇溶液将DNA钠盐沉淀出来。反复使用上述方法多次处理DNA核蛋白溶液,就能将蛋白等杂质较彻底地除去,得到较纯的DNA制品。为了彻底除去DNA制品中混杂的RNA

30、，可用RNA酶处理。生物材料中含有的脂肪物质和大部分的多糖，在用盐溶液分离核蛋白和用乙醇或异丙醇分级沉淀时即被除去。在DNA提取、制备的过程中，核酸极不稳定，许多因素可破坏其完整结构：化学因素，核酸的结构在pH值4.011.0间较稳定，pH值在此范围外就会使核酸变性降解，故制备过程应避免过酸过碱。物理因素，DNA分子链很长，是双螺旋结构，既有一定的柔性。又有一定的刚性，故强机械作用如剧烈搅拌会令DNA分子断裂，不利于收集，应加以避免。酶的作用，细胞中普遍存在的核酸酶在细胞壁或膜遭到破坏时被释放出来，它会降解DNA分子。故须用酶的变性剂、抑制剂使之失活。常用的酶抑制剂有柠檬酸盐、氟化物、砷酸盐、

31、乙二胺四乙酸盐、(ETDA-Na)等。操作过程最好在低温(0C左右)下进行。SDS和苯酚作为蛋白变性剂，同时可使核酸酶被破坏而失活。CTAB法原理CTAB(hexadecyltrimethylammoniumbromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂，具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(0.7mol/LNaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。CTAB分离缓冲液2%CTAB，1.4mol/LNaCL,20mmol/LEDTA(PH8.0),1

32、00mmol/LTris-HCL(pH8.0),0.2%巯基乙醇100mL:2gCTAB，8.18gNaCL，0.74gEDTA.Na2.2H2O，加入10mL1mol/L的Tris-HCL(pH8.0),0.2mL巯基乙醇，加水定容到100mL。1、Tris-HCl(pH8.0)提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；2、EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性；3、NaCl提供一个高盐环境，使DNP充分溶解于液相；4、CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；5、卜巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成酿，避免褐变，使酚容易去除;PVP（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的络合物，能与多酚

33、形成一种不溶的络合物质,有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。1用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。使用酚的优点：1.有效变性蛋白质；2抑制了DNase的降解作用。缺点：1.能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly（A）RNA。不能完全抑制RNase的活性。所以提取RNA时只用氯仿抽提。2、氯仿的作用？氯仿：加速有机相与液相分层；去除核酸溶液中的迹量酚。（酚易溶于氯仿中）3、用酚-氯

34、仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡（异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定）4、用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子？用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl或NaAc,Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。1.十六烷基三乙基溴化铵（CTAB）法在目前众多的DNA提取方法中，CTAB法是其中最为广泛应用的一种。它既可以裂解细胞，又可以有效地去除多酚类和多糖类物质的沉淀，因而经常被应用于植物的DNA提取工作中。1.1原理及方法CTAB是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜。同时它能与核酸形成复合物，这些复合物在高盐溶液中(0.7mol/LNaCl)是可解离的，从而可使DNA和多糖物质分开。当溶液盐浓度降低到一定程度(0.3m