Agilent6410串联质谱培训

1、 Agilent6410串联质谱的组成、原理简述质谱分析是先将物质离子化，按离子的质荷比分离，然后测量各种离子谱峰的强度而实现分析目的的一种分析方法。以检测器检测到的离子信号强度为纵坐标，离子质荷比为横坐标所作的条状图就是我们常见的质谱图。质谱的特点CharacteristicsofMS灵敏度高；样品用量少，ng(10_9)-pg(1012);鉴定速度快；唯一可以确定分子量，从而推出分子式的方法。測试后样品被破坏，不可以回收再利用口I进样系统T200液相系统的组成由上至下依次为溶剂瓶箱、在线脱气装置、泵(LC-1200Pump)；自动进样器(LC-1200Autosampler)；柱温箱(Ov

2、en)。泵状态指示灯黄色：说明未准备就绪。在等待达到或完成一个特殊条件，或正在运行自测程序。红色：为出错状态，说明已检测到一个影响正常操作的内部问题。通常，出错情况需要加以注意(例如，渗漏，不合格的内部元件等产生的出错情况)，出错情况常会干扰分析。闪烁黄色：表明组件处于驻留状态。闪烁红色：说明组件启动过程中出现严重错误。 II质谱部分1、毛细管一一增加去溶剂化，从而使化学噪声最小。2、skimmer与八极杆高效率的离子捕获，使宽质量带宽离子传输最大化。3、lens1和lens2大大提高高质量离子的传输。4、四极杆1（MS1）双曲线的四极杆优化离子传输和质谱分辨率。5、RF四极杆段一一增强离子进

3、出碰撞池时的传输。6、碰撞池高压具有线性加速度的碰撞池优化质谱/质谱分裂，从而在一个短的停留时间仍可消除交叉干扰。六极杆设计有助于捕获碎片离子。7、四极杆2（MS2）双曲线的四极杆优化离子传输和质谱分辨率。8、打拿极允许快速电极转换，高增益，寿命长，噪音低。离轴设计允许中性物质穿过而不会碰到检测器。9、电子倍增器一一寿命长，因为离子从不接触其表面，只有电子接触。、ESI源样品溶液中发生静电喷雾，在干燥气流中（大气压下），形成带电雾滴，随着溶剂的蒸发，通过离子蒸发等机制，生成气态离子。通常小分子得到M+H+,M+Na+或M-H-单电荷离子，生物大分子产生多电荷离子,由于质谱仪测定质/荷比，因此质

4、量范围只有几千质量数的质谱仪可测定质量数十几万的生物大分子。电喷雾电离是最软的电离技术，通常只产生分子离子峰，因此可直接测定混合物，并可测定热不稳定的极性化合物；其易形成多电荷离子的特性可分析蛋白质和DNA等生物大分子；通过调节离子源电压控制离子的碎裂（源内CID）测定化合物结构。直角喷雾大气压离子化接口直角喷雾离子源产生最大的离子化效率。高电压电极：毛细管帽、半圆形电极和对电极和喷雾挡盖组成。注意：1.喷雾针不带电，透镜部件带负压（正离子模式），透镜部件带正压（负离子模式）二、前端离子光学组件毛细管：内径0.6mm，毛细管电压值取决于毛细管电压设置、溶剂流速和溶剂导电性。毛细管电流真实反映离

5、子流的状态。毛细管电流小，离子化效率低，表明雾化效果不好。使用时间长或清洗不足，毛细管顶端残留物增加，形成绝缘层，减少了ESI操作时所必需的电场能量，降低灵敏度和信号稳定性。进一步，毛细管内壁污染，降低离子传输，特别是低质量离子，污染再严重，可能从高电压端（进口）到低电压端（出口）产生泄漏电流，这会导致毛细管电流增加并产生波动的毛细管电流。ESI离子形成的过程：溶液中的电离：样品的pKa和溶液的pH喷雾：表面张力和粘度；气动辅助形成带电小液滴：由于毛细管被加高压，造成氧化还原反应，形成带电液滴。去溶剂：溶剂蒸发和小液滴碎裂：溶剂蒸发，离子向液滴表面移动，液滴表面的离子密度越来越大，当达到Ray

6、leigh(瑞利)极限时，即液滴表面电荷产生的库仑排斥力于液滴表面的张力大致相等时，液滴会非均匀破裂，分裂成更小的液滴，在质量和电荷重新分配后,更小的液滴进入稳定态，然后再重复蒸发、电荷过剩和液滴分裂这一系列过程形成气相离子：被分析的样品在溶液中电离成离子，在大气压下，强电场和雾化气使样品雾化变成小的液滴并带电，强电场进一步使被分析物解离,加热的干燥气使液滴中溶剂蒸发,液滴缩小，表面电荷增加，对于半径10nm的液滴，液滴表面形成的电场足够强，离子间的排斥力超过凝聚力，发生库伦爆炸，最终导致部分离子从液滴表面蒸发出来，而不是液滴的分裂，最终样品以单电荷或多电荷离子的形式从溶液中转移至气相，形成了

7、气相离子，通过毛细管进入质谱。 # VaicuumwallTurtH741110lensl：电子静态透镜：聚焦离子。lens2：上施加一个RF电压，使四极杆和透镜2有相同频率，以便离子进入四极杆区域。八极杆射频离子向导：一个对于离子束的非常有效的聚焦单元。前端离子光学设计宽质量范围内获得更高的离子传输效率提髙灵敏度的主要单元f惰性拎毛细(Dielectriccapillary)/可以防止热不橈定化合物产生分袖尸高频八极杆设计/提高全范围的离子传输效率尸透镜2RF/增强高质吐数离子的传输效率尸双曲面后过滤器和四极杆三、第一组四级杆（MSI）四极杆分析器及其特点：因其由四根平行的棒状电极组成而得名

8、。离子束在与棒状电极平行的轴上聚焦，一个直流固定电压（DC）和一个射频电压（RF）作用在棒状电极上，两对电极之间的电位相反。对于给定的直流和射频电压，特定质荷比的离子在轴向稳定运动,其他质荷比的离子则与电极碰撞湮灭。将DC和RF以固定的斜率变化，可以实现质谱扫描功能。四极杆分析器对选择离子分析具有较高的灵敏度。OuadruDole：1M日An“lyz四、碰撞池利用电喷雾作为离子源，所得到的质谱主要是准分子离子峰，碎片离子很少，因而也就没有结构信息。为了得到更多的信息,最好的办法是把准分子离子“打碎”之后测定其碎片离子。在串联质谱中采用碰撞活化分解（Collisionactivateddisso

9、ciation,CAD）技术把离子“打碎”。碰撞活化分解也称为碰撞诱导分解（CollisionInduceddissociation,CID），碰撞活化分解在碰撞室内进行，带有一定能量的离子进入碰撞室后，与室内惰性气体（高纯氮）的分子或原子发生碰撞，离子发生碎裂。五、第二组四级杆（MS2）三重四极质谱仪有三组四极杆，第一组四级杆用于质量分离（MS1），第二组四极杆用于碰撞活化（CAD实际是六级杆）,第三组四极杆用于质量分离（MS2）。常用的工作方式有四种（见表）。数据米集MS1扫描模式MS2扫描模式得到的质谱图MS2scanTTIScan母离子质谱图MS2SIMTTISIMSIM离子图Prod

10、uctionSIMScan子离子质谱图MRMSIMSIMMRM子离子质谱图MS2scan：为母离子扫描方式，在这种工作方式，由MS2选定一个离子扫描，检测器得到的是选定的离子，即母离子谱。MS2SIM:为母离子检测方式，这种工作方式由MS2选选择一个特定的母离子.ProductIon:子离子扫描方式，MSI选择一个特定的母离子，子离子扫描，检测器得到的是选定母离子产生的子离子，即子离子谱。MRM：是多反应监测方式，由MSI选择一个（或几个）特定离子，经碰撞碎裂之后，由其子离子中选出一特定离子，只有同时满足MS1和MS2选定的一对离子时，才有信号产生。用这种扫描方式的好处是增加了选择性，即便是两

11、个质量相同的离子同时通过了MS1,但仍可以依靠其子离子的不同将其分开。这种方式非常适合于从很多复杂的体系中选择某特定质量，经常用于微小成分的定量分析。III检测器包括打拿级和电子倍增管。W真空系统用色谱将复杂的有机混合物分离，再用质谱仪精确鉴定其组成其真空系统是保证色质联用仪正常进行的基础，质谱中样品离子化后，这些离子（各种碎片离子和分子离子）在高真空的条件下通过质量分析器进入电子倍增器放大记录下来为避免产生不必要的离子一分子反应（空气中）和减少本底的干扰，质谱的整个过程必须在真空腔的高真空条件下工作。真空范围：粗真空：1.82.0torr高真空：2.73.3X10-5torr机械泵和涡轮分子

12、泵机械泵一般前级真空，也就是在机械泵把真空降到一定水平后才启动涡轮分子泵，以保护分子泵。所以仪器从大气压到真空合适的状态一般要经过一段时间的（3小时）。三种工作状态Mode仪器状态ON干燥气流速，雾化气压力和温度区按设置值阀toMSStandbyMS高压关闭（如毛细管、打拿极等）。质量分析器电压关闭。干燥气温度300C（默认）雾化气压力15psi干燥气（氮气）3.0L/min阀towasteOFFMS高压关闭（如毛细管、打拿极等）。质量分析器电压关闭。干燥气加热关闭雾化气压力15psi干燥气（氮气）3.0L/min阀towaste短期不用（如晚上或周末），standbyon或standby，打

13、开离子源时，干燥气的温度自动设为0，而干燥气的流速、雾化气的压力和质谱切换阀的位置不变。当合上离子源时，温度回到设定值。在standby时打开离子源。名词解释：质荷比:离子质量（以相对原子量单位计）与它所带电荷（以电子电量为单位计）的比值,写作m/Z.峰:质谱图中的离子信号通常称为离子峰或简称峰.离子丰度:检测器检测到的离子信号强度.基峰:在质谱图中，指定质荷比范围内强度最大的离子峰称作基峰.准分子离子：指与分子存在简单关系的离子，通过它可以确定分子量.液质中最常见的准分子离子峰是M+H+或M-H-.在ESI中，往往生成质量大于分子量的离子如M+1,M+23,M+39,M+18称准分子离子，表

14、示为：M+H+,M+Na+等碎片离子：准分子离子经过一级或多级裂解生成的产物离子.碎片峰的数目及其丰度则与分子结构有关,数目多表示该分子较容易断裂,丰度高的碎片峰表示该离子较稳定,也表示分子比较容易断裂生成该离子。多电荷离子：指带有2个或更多电荷的离子,常见于蛋白质或多肽等离子.有机质谱中,单电荷离子是绝大多数,只有那些不容易碎裂的基团或分子结构-如共轭体系结构-才会形成多电荷离子.它的存在说明样品是较稳定的.采用电喷雾的离子化技术,可产生带很多电荷的离子,最后经计算机自动换算成单质/荷比离子。Agilent6410串联质谱在线工作站的使用1、开机前的检查需仔细检查液质联用仪各模块的电源连接情

15、况以及液氮罐的液氮量和连接情况，打开液氮罐自增压阀门，调节液氮罐或N2发生器的输出压力为0.56-0.69MPa（80-100psi）,调节高纯氮气钢瓶减压表输出压力0.1-0.2MPa（一般为0.15MPa或10-30Psi）。2仪器的启动打开液质联用仪各模块电源:依次打开LC1200各电源开关，打开G6410AQQQ的电源开关，此时听到一声电磁阀的声音，前级泵启动，然后涡轮泵开始工作，等待大概3min左右待QQQ上的SmartCard4通讯板完成初始化，质谱检测器部分的启动完毕。3工作站的连接打开计算机，进入Windowsxp画面，启动桌面上的通讯连接，点击桌面上的DataAcquisit

16、ion图标（红色），此时MassHunter软件启动，并听到另外一声电磁阀的声音，表示仪器通讯正常，进入工作站。4、参数的设置由上至下在数据采集界面可以看到仪器状态界面（S）；实时绘图界面（R）；方法编辑界面（M）和编辑工作表界面（W）四个部分。仪器状态界面：表示仪器状态（包括前级真空、高真空、干燥气流量和压力及毛细管电流等重要参数的实时状态显示）。实时绘图界面：包括色谱图和质谱图的实时显示。方法编辑界面：包括液相和质谱方法的编辑。编辑工作表界面：自动进样器连续进样的参数设置。1）自动进样器参数设定（“方法编辑界面（M）”中的ALS）A、进样模式的选择：在Run设定界面中，Injection选

17、择Injectionwithneedlewash（可以输入进样体积和洗瓶位置，此方式针从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针）；Standardinjection（只能输入进样体积，此方式无洗针功）CHighThroughout中选择DisableoverlappedInjection（不提前吸样）。Startoverlapafter（提前吸样），在minutes中输入时间，如2min。B、吸样针的设定：在Options设定界面Auxiliary中，DrawSpeed选200ul/min；EjectSpeed选200ul/min；DrawPostion选2mm。（为离瓶底的高度）C、在Option

18、s设定界面中，StopTime选择Aspump/Injector。PostTime选择Off。2）泵参数设定（“方法编辑界面（M）”中的QuatPump）A、流速的设定：在QuatPump界面中的“Flow”处输入流量，如1ml/min。B、流动相组成的设定：在ABCD四个通道输入各自的比例，设定为流动相组成，A通道为默认值，如B通道设为50%,以四元流动相为例，A=100%-B-C-D,并在各自通道后面的空格内输入说明信息以表明各自通道的溶剂名称。一般A瓶放流动相，B瓶放甲醇，C瓶放乙腈，D瓶放水。C、停针时间的设定：在StopTime中设定停针时间，如5min。D、保护柱压的设定：在“Pr

19、essureLimits”处输入柱子的最小和最大压力，以保护柱子（一般最小值设为0bar，最大值设为400bar）。E、平衡时间的设定：在PostTime中设定平衡时间（梯度洗脱时用于平衡色谱柱）。3）柱温箱参数设定（“方法编辑界面（M）”中的Left）在Run设定界面中，Temperature（Left）设定柱温箱温度值，在Temperature（Right）,选中Sameasleft”，使柱温箱的温度左右一致。StopTime选择Aspump/Injector。PostTime选择Off。4）质谱参数设定（“方法编辑界面（M）”中的MSQQQ）A、离子源的选择：在Run设定界面中，Ions

20、ource选择ESI；B、停止时间的选择:StopTime选择Nolimit/Aspump；C、调谐文件的选择：Tunefile选择恰当的调谐文件（默认为atunes.tune.xml）；Timefiltering选择Peakwidth0.07min。D、时间段的选择：在TimeSegments设定界面中，#为Segments的序号；E、扫描类型的选择：ScanType有7种类型选择，分别是MS2Scan、MS2SIM、MRM、ProductIon、PrecursorIon、NeutralLoss和NeutralGain,可按需要选择；F、检测离子的选择：IonPolarity选择正离子（Po

21、sitive）或负离子模式（Negative）；G、灵敏度的选择：DeltaEMV默认选择200，若想提高灵敏度可选择400。Time为从0开始的保留时间；DataStored选择d。如有需要，可以设定多个TimeSegments时间段。在CompoundName一栏输入样品名字，在内标的“ISID?”一栏打dB、母离子和子离子质荷比的输入：在PrecursorIon下输入母离子的质荷比，在ProductIon下输入子离子的质荷比,C、四极杆的分辨率的设定：在MSI和MS2下输入每个四极杆的分辨率（MsResolution）。四极杆分辨率的参数分为unit,wide和widest,根据需要选择

22、，wide和widest选择的离子范围大一些。D、驻留时间的选择：在Dwell下输入驻留时间，SIM或MRM等模式一般选200ms，Scan模式选500ms,。E、毛细管出口电压的输入：在Fragmentor下输入电压值（默认135,范围0-400）,摸索时一般用默认值135，调整幅度一般在20。F、碰撞能量的选择：CollisionEnergy（默认0,范围0-250）般用20,调整幅度一般在5。6）电离源参数的设定在方法编辑界面中可设置QQQ仪器的电离源参数。方法编辑界面中的Source界面里，A、干燥气温度的选择：GasTemp般在300-350C,B、干燥气流速的选择:GasFlow一

23、般在8T3L/min,C、雾化器压力的选择：Nebulizer般在30-60Psi,D、毛细管电压：Capillary一般在3500-4000V。Diagnostics界面为离子源参数的监测值。5、数据采集方法编辑新建方法并保存方法：从MassHunter软件的“File”菜单中选择“New”,再选择“Method”。建立新的样品采集方法；再从“File”菜单中选择“SaveAs”,再选择“Method”，输入方法名称和存盘路径。（一）运行单个样品编辑方法信息（“方法编辑界面（M）”中的Properties）在“Properties”设定界面中的Methodpath中输入方法的路径名和文件名。

24、可以在“Description”中输入对方法的描述。样品信息设定（“方法编辑界面（M）”中的Sample）A、样品名称：在Sample设定界面中，SampleName输入样品名称，B、进样品位置：SamplePosition中输入样品瓶位置。C、文件名称和存盘路径：在DataFile设定界面中，Name输入样品的存盘文件名，Path输入样品的存盘路径，Auto-increment为文件名自动命名格式。D、进样体积和进样瓶的选择：在InjectionVolume中输入进样体积（如5ul）,在washvial中输入瓶号E、方法的描述：可以在“Description”中输入对方法的描述。F、样品信息

25、设定：（“方法编辑界面（M）”中的Sample）输入样品描述G、运行单个样品：使用工具栏的StartSampleRun图标开始运行。(二)运用Worklist排针进样自动进样序列设定(编辑工作表界面(W)中的worklist)使用工作列表(Worklist)运行多个样品。可以通过offline或online编辑或创建Worklist。依次点击FileNewWorklist创建一个新的Worklist表格。添加一个样品:从工作列表菜单中选择AddSample。工作列表表格就添加了一行新的样品。样品信息的输入：单个样品：直接在工作列表表格输入以下样品信息：样品名称(Samplename),样品位置

26、(Sampleposition),采集方法(Method),数据文件名称(DataFile),样品类型(SampleType),级别名称(Levelname)。添加多于一个的样品：在工作列表面板点击左键选择AddMultipleSamples或从工作列表菜单选择AddMultipleSamples。出现AddMultipleSamples对话框，填写样品信息(SampleInformation)表格：A、Samplename(如Blank-),Numberofdigits(数字位数如Blank-01,2位),B、DataFilename(如Blank-),Numberofdigits(数字位数

27、如Blank-01,2位),C、数据文件保存路径(如E:MassHunterDataMesalamineRunRun-01),D、采集方法路径(如E:MassHunterDataMesalamineMethod),填完上面的内容之后点击0K就出现SamplePosition对话框，E、选择样品的位置如下：点击并拖动鼠标来确定一个邻近的区域；按住Ctrl键向下并点击选择独立的位置；使用Shift+Ctrl在相同地方选择多个样品。点击OK按钮，关闭AddMultipleSamples对话框。F、在排针表中选择样品类型(SampleType)如:QC，级别名称(Levelname)，如6。G、保存和

28、运行：使用工具栏的保存工作列表工具或者File-Saveas-Worklist菜单保存工作列表。使用工具栏的StartWorklistRun图标开始工作列表(在工作列表中所选择的样品前打V)。 6、运行从“方法编辑界面（M）”中完成所有的方法编辑。包括六个部分，分别是Sample（设置文件名和样品信息等参数）、Properties（设置方法的路径等）、QuatPump（输入流动相、流速等泵参数）、ALS（设置自动进样器的参数）、Column（设置柱温箱参数）、MSQQQ（设置质谱参数）。1）把流动相放入溶剂瓶中，打开Purge阀。从“方法编辑界面（M）”中的QuatPump界面,选择通道后，设

29、定Flow：5ml/min,单击Apply。则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。设定Flow：0ml/min，单击Apply，再关闭Purgevalve。设流速，如Flow：0.6ml/min。液相平衡时将管路连接到废液瓶，不进质谱，为节省氮气质谱先不用打开，保持待机状态。2）等液相平衡一段时间后，将管路连接到质谱并将质谱打开，仪器均准备就绪后，开始进样。7、运行状态的观察可以通过浏览在每个界面上的条目来判定QQQ和HPLC模块的状态。颜色说明目前模块的状态。绿色说明模块或仪器“Ready”。黄色说明“NotRea

30、dy”。红色说明模块中有“Error”。蓝色表明系统正在运行。粉红色表明仪器等待注射。可以检查日志LogBook浏览错误信息。8、关机1）首先将质谱standby2）关机前，如果是有缓冲盐的系统，先用水：甲醇（90：10）0.5ml/min至少冲洗系统30分钟，然后用有机溶剂至少冲洗系统30分钟（如甲醇），然后点击Pump图标，将泵流量设置到0,然后再次点击选择Off,依次点击柱温箱和进样器选择Off。关机。9、质谱的放空1）质谱检测器部分的关闭：确认前级泵的气镇阀（GasBlastValve）处于关闭状态。在无流动相进入质谱检测器的状态下，在MassHunter软件中用鼠标右键点击MSQQQ

31、图标,选择Vent,执行放空步骤，出现下述提示MSQQQOn*StandbyOFFVentCalibrantOri*CollisionGesOnLCParameterV-alueQQQ:ReadvStatefalselJlJ.ErrorStatenocrror口口口：RtzbijghVac2.15E+DTorrQQQ:HighVac3.0EE-5TonQQQ:MSIHeater100CQUO:hdSZHearer100PQQQ:GmwFlow2.0l/minQQQ:GasTem口306PQQQ:Nebulizer14.9psiUUU：LapillaryLurrenl5nAlJlJ.Collis

32、ionGascn口口口：匚mlitirmntoffQQ:Vaporizer350PQQQ:匚apillar-9VQDfl-PijmnlPijrrFsnr14AAAwccuaisM3QQQSpectrumu.iu44LIjPumpDownOncetheQQQisvented,itwilltakes!1_cd005metimetOstabiliZeitagaintorunsamplesoptimally.Youmustalsoallowtheturbopumpstospindowncompletelyandthenturnoffthemaincircuitbreakertocompletethev

33、entoperation.Doyouwishtocontinueventing?如果确认要放空，选择Yes。观察涡轮泵转速，以及四极杆和干燥气的温度，等待大概20-30min左右，等待涡轮泵转速完全降下来，且干燥气温度和四极杆温度下降到一定程度（四极杆温度50r以下），关闭前级泵。2）退出MassHunter软件，然后点击桌面AcqSystemLauncher图标，然后选择Shutdown关闭运行程序及其它窗口，关闭计算机（用shutdown关）和显示器。关闭MSQQQ和LC1200各模块电源开关。如果很长时间不使用则还需关闭碰撞气（高纯氮气）和液氮罐开关阀。Agilent6410串联质谱常见

34、故障的处理与离线工作站的使用一、数据定性分析方法编辑启动桌面上的QualitativeAnalysis图标，运行“AgilentMassHunterQualitativeAnalysis”软件（绿色），进入数据分析画面。2选择菜单项File中的OpenDataFile，打开目标文件夹下的目标文件，在色谱图位置点击右键，选择ExtractChromatograms（提取色谱图），Type选择“MRM”在Advanced一栏中的Fragmentor选择“Any”.积分参数的设置和积分1）在积分栏中选择Integrator则自动积分，使用默认参数。如果要手动积分，则选择GeneralIntegrat

35、or，在Startthreshold输入开始斜率，在Stopthreshold输入结束斜率。在Peaklocation选择显示峰位置（峰顶或中心）2）峰过滤可以选择峰面积过滤和峰高过滤，选择Peakarea，点击Peakarea则为绝对峰面积过滤，输入想设置的数值；点击Relativearea则为最大峰面积的百分比，输入想设置的数值。选择Peakheigh，点击Peakheigh则为绝对峰高过滤，输入想设置的数值；点击Relativeheighe则为最大峰高的百分比，输入想设置的数值。参数设置完毕后点击积分，积分完成后，点击不同通道的色谱图，在右下角查看峰面积。要退出所选择的图谱文件，点击“C

36、loseDataFile”选中要退出的文件，点击“Close”则退出；如果要退出所有的文件，则点击“CloseAll”如果要恢复主窗口为默认设置，点击菜单项View中的RestoreDefaultLayout。二、数据定量分析方法编辑软件启动：启动桌面上的QuantitativeAnalysis图标（蓝色），运行AgilentMassHunterQuantitativeAnalysis软件，进入定量数据分析画面。1.Batch（批处理）的建立或编辑1）Batch（批处理）的新建：单击菜单项File中的NewBatch，在新的批处理对话框，找到存储数据的文件夹（注意：每个分析批的所有数据应存放在

37、同一个文件夹中）。输入批处理文件名，并单击Open按钮创建一个新的批处理文件。2）添加数据：单击菜单项File中的AddSample，在AddSample对话框，单击选择所有“SelectAll”按钮或选定需要添加的图谱名称然后单击OK按钮，添加样品图谱文件。应检查和核对批处理表Sample栏中的Name（样品名），Type（类型）、Level（浓度级别）、Acq.Date-Time（采集时间）和DataFile（文件名）等详细信息是否正确，并显示色谱图。3）Batch（批处理）的打开：如想需要打开已经存在的Batch，选择菜单项File中的OpenBatch，选择相应的文件夹，打开其中的已经

38、存在的Batch。定量分析方法（Method）的建立和编辑每一分析批检测结束或正在检测时，可以对得到的当批数据进行分析处理。此时分为两种情况，一种是基于已经采集到的MRM数据新建分析方法进行定量批处理；另一种是调用已经编辑保存过的分析方法进行定量批处理。1）基于已经采集到的MRM数据新建分析方法进行定量批处理单击菜单Method中的New，选择MethodfromAcguiredMRMData，用鼠标光标选定图谱文件（通常选用标准曲线的中间浓度点样品图谱文件），点击Open按钮，导入MRM方法采集信息，切换到方法编辑模式，对MethodSetupTasks中参数进行设定。A、样品采集参数的设置

39、单击MRM的化合物设置“MRMCompoundSetup”检查确认导入的用于MRM化合物设置的采集参数的设置，包括化合物和内标的Name（名称）、TS（TimeSegment时间段）、MRM的Transition（过程）、类型是Target（待测组分）还是ISTD（内标）、母离子（PrecursorIon）和子离子（ProductIon）是否正确等）。AgilentQuantitativeDataAnalysis-NewMethod:FileEditViewAnalyzeMethodUpdateReportToolsHelpNew:MethodEditTasksOpenNewMethodusi

40、ngManualSetupNew/OpenMethodEditF10Compound:MethodSetupTasks6Validate#orLevels10MRMCompoundSetupSaveRetentionTimeSetupISTDSetupSaveAs.TypeLevelExjtFllCalConcentrationSetupMethodSetupTasksQualifierSetupManualSetupTasksCalibrationCurveSetupOutlierSetupTasksrGlobalsSetupB、保留时间的设置AdvancedTasksCopjCalibra

41、tionLevelsTo.易单击保留时间设置RetentiSaliTime一检查确认帝软件会自动在保留时间:向前（LeftiRTibDelita）;和向后内寻找色谱峰，RTDeltaUffi单位分为eperCe0t（按百分比）和minutes（按时间）。选n择minutes（按时间）。软件自动将待测组分保留时间在RT5%以内的色谱峰认为是正常峰。导入的参数。(RightRTDelta)的时间范围如果一个分析批的保留时间变动较大，需要将LeftRTDelta和RightRTDelta设置大一些。C、内标参数的设置单击ISTDSetup进行参数设定，首先在ISTDFlag项选定内标物，然后从IST

42、DCompoundName的下拉菜单中为待测物指定内标化合物（ISTD）,并在ISTDConc列输入相应内标的体内浓度。TimeReferenceFlag（时间参考）不选，因为此选项是用于预期目标峰的保留时间建立在时间参考峰（内标峰）漂移基础上。D、线性浓度的设置单击方法设置任务MethodSetupTasks里的ConcentrationSetup,输入线性最高点的体内药物浓度值（Dil.HighConc）和稀释模式（Dil.Pattern）。稀释模式是以体内最高浓度为1,逐级按稀释倍数（与上一级的浓度）的比值依次排列,例如浓度分别为100、50和20,则稀释模式为1：2：2.5,如比例是循

43、环数,循环位数保留四位以上。点击CreateLevels计算浓度,看是否和计算器计算的结果一致,如果不一致则增加循环小数的位数至一致。AgilentQuantitativeDataAnalysis-NewMethod:FileDditVjewArialyzeMethodUzidateReportJpcikHelp:J虽I肿al熔釦Layout:EHHEELFlestoreDefaultLayout:MethodEditTasksNew/OpenMethodMethodSetupTasksftMFlMCompoundSetupRetentionTimeSetupISTDSetupCongntra

44、tionSetupQualifierSetupCalibrationCurveSetupE、校正曲线的设置百a单击方法设置任务-校正曲线设置:TimeSegment:Compound:Amp-OlR:LevelNamePrefix:L#ofLevels5CreateLevelsSampleNameTypeLevelAcq.Date-TimeDat|CMAMCalL5.d|CMAMCcQuantifierNameTSTransitionScanT.-卜|Amp1136.2-91.4|MRM|Target:MethodTableCalibrationCone.LevelTasksMethodetu

45、p里的CalibrationCurveSetup,从CF曲线拟合（CurveFit）选项中选择Linear丄“CFOriginL3略）,“CFWeigt”的下拉菜单中选定它权重系数为L1/X2。L5的菜单中选择125叩叩.re（忽单击GlobalsSetup（全面设置），检查有无错误。单击Validate验证方法，如提示方法正确则此方法设定成立,如提示有错误,则按照提示进行方法修改。G、方法的保存和应用单击“SaveAs进行方法设置保存。单击Exit,然后选择Yes应用方法到此批处理表。H、最小峰面积的设置：在方法编辑界面下，选择Advanced中的IntegrateParameterSetu

46、p中，点击IntParms中的PeakFilter中的PeakArea（%）选择合适数值即可。可以消除其他小的色谱峰积分干扰。至和计算器计算结果一致。注意:使用同一方法（只是不同的内标浓度）分析同一批次样品，结果是线性的方程不同，但样品的分析结果是相同的。不同分析批使用同一方法进行时，需注意不同分析批的样品色谱保留时间会有很大差异，应相应修改保留时间的设置。如果重新称样则应相应修改标线浓度的设置。保留时间设置不当会导致色谱峰积分不完全，所以范围应设置尽量宽并检查核对积分是否合理。2）调用已经编辑保存过的分析方法分析方法可以单独保存在方法文件中，也可以保存在batch中，因此，打开已有的分析方法

47、有两种方式。单击菜单Method中的Open，选择OpenMethodfromExistingFileOpenMethodfromExistingBatch,选定方法名或batch名，点击Open按钮，导入MRM方法进行编辑或分析。单击菜单Method中的Edit,切换到方法编辑模式。3使用定量方法分析数据1）分析：在工具栏上单击分析批处理（AnalyzeBatch）图标启动批处理分析。2）检查检查Batch表中化合物项下的RT（保留时间）和Resp.（峰面积响应）是否正常。Exp.Conc（理论浓度）、Calc.Conc（回代浓度）和RT（保留时间）、Accuracy（准确度）、Resp.（

48、峰面积响应）等有无异常，可以右键点击选择Add/RemoveColumn，添加其它的详细信息（如Width和Height）进行查看。注意:定量结果中尤其应注意准确度值是否符合线性回代和QC的合格范围。E3Agilent0uanijiativeDo|aAiil-ysis-JrugOfAbuse-Test_O|:FileEditViewAnalyzeMethodUpdateReportToolsHelp=nH1AnalyzeBstch）越:Layout:尿範0（牒回回RestoreDefaultLayout:BatchTabteAnalyzeBatch #SBDidiHRMflMwi3HE-5Li

49、Kif1-Li-aAiW4d11bro.t-lnrUwd,:UCr|呻化kjnnmiiJqijoi-etijwWH,M|1U.J円1L沁-.11 # #选择Batch表中的内容，点击开的Excel文件中进行粘贴，编辑相二-frijuWnTIrwI应内容。3）数据的输出 也可以将Batch表输出成Excel格式的文件，点击File中的Export,选择ExportTablet,存为相应的文件（xls格式），再用Excel打开该文件进行编辑。4、Batch的保存和关闭单击FileSaveBatch,则保存Batch,单击FileSaveBatchAs，则另存Batch,要退出所选择的图谱文件，点击

50、“Close”三、日常维护流动相配制1）液相-质谱联用仪的流动相所需的有机溶剂（如甲醇和乙腈等）要求为进口色谱级试剂,其他试剂如甲酸、乙酸、氨水、甲酸铵和乙酸铵等要求HPLC级。2）含甲酸（或乙酸）2%。含三乙胺Vl%。含醋酸铵V10mmol/l。含钠和钾的成分必须Vlmmol/l。（盐分太高会抑制离子源的信号和堵塞喷雾针及污染仪器）3）严禁使用不挥发性的磷酸盐、硼酸盐、含氯的缓冲液等；禁止使用盐酸、硫酸等无机酸。冲洗色谱柱每天进完样品后,应对色谱柱进行冲洗。如果流动相为不含缓冲盐的系统（如甲醇-水或乙腈-水等系统），可以直接用甲醇对色谱柱进行冲洗，应保证流速在0.5ml/min下冲洗至少30

51、分钟。如果流动相为含缓冲盐的系统（如含乙酸铵等），应先用甲醇-水（10:90）保证流速在0.5ml/min下冲洗至少30分钟，然后再用甲醇对色谱柱进行冲洗，保证流速在0.5ml/min下冲洗至少30分钟。在线清洗HPLC用缓冲盐时，由于泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现象，析出的细小盐粒非常坚硬,附着在蓝宝石活塞杆上，随着蓝宝石活塞杆的往复运动，容易产生划痕，并磨损密封垫，造成漏液等故障。故使用10%异丙醇在线清洗。清洗液配制:90%水+10%异丙醇.该混合液可抑制菌类生长和减小水的表面张力。以2-3滴/min的速度虹吸流下，不能干涸。喷雾室清洁：操作者每天应用50%异丙醇水溶液清洁喷雾室，用棉

52、签或专用清洁布 清洁喷雾室的半圆形电极、对电极、毛细管帽和喷雾挡盖等部位。注意：清洁过程中不要接触到喷雾针头，以免针头受损!液氮罐状态：操作者每天使用前应检查液氮罐中的液氮量和液氮罐内压力情况，在液氮量显示到红线时准备换氮气罐，特别晚上排针进样时一定要保证氮气充足,否则机器停机后,八级杆等部分很容易脏.（如不是连续进样可以等到机器质谱部分变红,自动停机再更换氮气）.充氮之前将质谱检测器的状态选择为“待机（standby）”，在使用过程中应先打开氮气阀,再将增压阀打开。检查前置真空泵透过前置真空泵的可视窗口检查泵油，看泵油液面是否低于下限，如是则打开气震阀（逆时针旋转2-3圈）以便泵油能够回流并

53、去除泵油中易挥发的组分。一般每周打开一次，每次1小时。泵油的更换通常是连续使用3000h更换一次，但如果发现油的颜色变深或液面下降至1/2之下，需要及时更换。注意：气震后一定记得关闭气震阀，以免意外停电，泵油流向真空腔!毛细管清洗及钝化1）关机：质谱放空约30分钟左右，等涡轮泵转速降下来，且干燥器温度和四级杆温度降至50度以下后，关闭质谱电源。如果质谱不提前关机，毛细管则无法拔出，强行拔出易使毛细管断裂。2）拆卸毛细管：小心将离子源和圆形电极拆卸下来，拧开毛细管帽，小心地将毛细管沿着它本身的长轴心垂直拉出，放置于干净的无尘布上面。拉出毛细管时切不可将毛细管左右旋转，否则易刮花毛细管两头的铂金涂层。3）清洗毛细管：切取50cm左右长的毛细管清洁镍丝，将线的两头穿过毛细管（从里端穿向外端），取少量脱脂棉用50%异丙醇润湿后穿过镍丝，轻轻拉动镍丝，带动脱脂棉擦洗毛细管，此步清洗根据毛细管脏的程度可反复进行几次。其中脱脂棉不可取过多，否则有可能损坏毛细管。最好每结束一个项目清洗一次毛细管。4）安装毛细管：依次安装毛细管，圆形电极和离子源，打开质谱电源开始抽真空。钝化：1）把清洗好的、干燥的毛细管垂直放入盛有1MNaOH溶液的聚丙烯烧杯