病毒感染检查方法和防治原则

1、关于病毒感染的检查方法与防治原则第一张，PPT共四十四页，创作于2022年6月第一节 病毒感染的检查第二张，PPT共四十四页，创作于2022年6月病毒感染的检查检测内容查病毒查特异性抗体 病毒颗粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶 电镜直接观察 光镜检查包含体 分离培养第三张，PPT共四十四页，创作于2022年6月一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似，但应注意： 1.标本用“双抗”或两性霉素B处理 2.低温保存，尽快送检 3.血清学诊断采双份血清第四张，PPT共四十四页，创作于2022年6月二、病毒的分离与鉴定（一）病毒的分离培养 细胞培养（cell culture） 鸡胚接种（eg

2、g inoculation） 动物接种（animal inoculation）第五张，PPT共四十四页，创作于2022年6月二、病毒的分离与鉴定一般程序：标本无菌处理动物接种鸡胚培养细胞培养指标阳性指标阴性 病毒鉴定 盲传23代指标阴性病毒阴性第六张，PPT共四十四页，创作于2022年6月（一）病毒的分离培养 1.细胞培养 单层细胞培养（monolayer cell culture） 分类 悬浮细胞培养（suspended cell culture） 原代细胞（primary cell）细胞种类 二倍体细胞（diploid cell） 传代细胞系（continuous cell line）第七

3、张，PPT共四十四页，创作于2022年6月病毒的细胞培养细胞培养瓶单层细胞第八张，PPT共四十四页，创作于2022年6月1.细胞培养(1)原代和次代细胞培养组织 组织块 分散的单个细胞 单层细胞 剪碎 培养基(原代细胞)单层细胞(次代细胞)传代培养蛋白酶 第九张，PPT共四十四页，创作于2022年6月特点：对多种病毒敏感 生长能力有限, 获取成本高 可携带潜伏病毒1.细胞培养(1)原代和次代细胞培养第十张，PPT共四十四页，创作于2022年6月(2)二倍体细胞培养 体外分裂50100代仍保持二倍体染色体数目，可用于病毒分离和疫苗生产。特点：对多种病毒敏感 不带异种蛋白(人源性) 不带病毒，无致

4、瘤潜能 可传50代左右1.细胞培养第十一张，PPT共四十四页，创作于2022年6月(3) 传代细胞培养特点：对多种病毒敏感性高 繁殖能力高，传代时间长 有致癌危险，不能用于疫苗生产1.细胞培养第十二张，PPT共四十四页，创作于2022年6月2.鸡胚培养 采用孵化914天的鸡胚 绒毛尿囊膜（allantocherion） 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔（allantoic cavity）接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔（amniotic cavity） 流感病毒的初次分离 卵黄囊（yolk sac） 嗜神经病毒 第十三张，PPT共四十四页，创作于2022年6月第十四张，PPT共四十四页，创

5、作于2022年6月2、鸡胚培养优点：易管理，不带微生物，成本较低缺点：操作程序复杂第十五张，PPT共四十四页，创作于2022年6月第十六张，PPT共四十四页，创作于2022年6月3.动物接种 应用：尚无敏感细胞的病毒培养 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动物 体内常带有潜伏病毒第十七张，PPT共四十四页，创作于2022年6月1病毒增殖鉴定 (1)细胞病变效应（cytopathic effect, CPE ） 细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）； 形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）； 在培养

6、细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。 （二）病毒的鉴定 第十八张，PPT共四十四页，创作于2022年6月第十九张，PPT共四十四页，创作于2022年6月细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)第二十张，PPT共四十四页，创作于2022年6月麻疹病毒感染细胞呼吸道合胞病毒感染细胞形成多核巨细胞或称融合细胞(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)第二十一张，PPT共四十四页，创作于2022年6月形成包涵体(inclusion body)(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)第二十

7、二张，PPT共四十四页，创作于2022年6月腮腺炎病毒感染细胞(2)红细胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)红细胞表面HA受体第二十三张，PPT共四十四页，创作于2022年6月(3)干扰现象（interference）风疹病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE()埃可病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE()人胚肾细胞风疹病毒？埃可病毒CPE(-)风疹病毒(+) 埃可病毒(-)CPE(+)风疹病毒(-) 埃可病毒(+)第二十四张，PPT共四十四页，创作于2022年6月(4)细胞代谢改变 细胞代谢变慢 pH变化减慢第二十五张，PPT共四十四页，创作于2022年6月2.病毒形态学鉴定

8、电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒）， 对一般病毒检测意义不大第二十六张，PPT共四十四页，创作于2022年6月3.病毒血清学鉴定 鉴定病毒种、型、亚型 (1)血凝抑制试验（hemagglutination inhibition test）正粘病毒型与亚型鉴定 病毒鸡红细胞凝集（血凝试验） 病毒特异性抗体鸡红细胞不凝集 （血凝抑制试验） 第二十七张，PPT共四十四页，创作于2022年6月(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA） 多种病毒鉴定(3)凝胶免疫扩散试验(gel immuno- diffusion test) 多种病毒鉴定3.病毒血清学鉴定第二十八张

9、，PPT共四十四页，创作于2022年6月4.病毒分子生物学鉴定抗原变异病毒基因的鉴定 核酸扩增 核酸杂交 基因芯片 基因测序第二十九张，PPT共四十四页，创作于2022年6月（三）病毒数量与感染性测定1.血凝试验：病毒总量（活病毒死病毒）2.蚀斑形成试验 （plaque formation test） 3.50组织细胞感染量 （50 tissue culture infectious dose, TCID50）感染性病毒量第三十张，PPT共四十四页，创作于2022年6月(四) 新病毒的鉴定核酸类型的测定 理化性状的检测 形态学鉴定 血清学鉴定 基因测序和生物对比第三十一张，PPT共四十四页，创

10、作于2022年6月三、病毒感染的血清学诊断应用：采取标本分离病毒为时已晚目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒为证实所分离的病毒的临床意义进行血清流行病学调查等第三十二张，PPT共四十四页，创作于2022年6月1.中和试验（neutralizing test）病毒中和抗体 病毒失去感染性 特点：特异性高，抗体维持时间长应用：人群免疫情况的调查 临床诊断少用第三十三张，PPT共四十四页，创作于2022年6月2.补体结合试验 （complement fixation test） 用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血清中相应的补体抗体 特点：特异性低，抗体出现早，消失快 应用：近期感染指标。第三十四

11、张，PPT共四十四页，创作于2022年6月四、病毒感染的快速诊断数小时内出结果病毒颗粒病毒成分（抗原或核酸） 早期抗体检测（IgM）第三十五张，PPT共四十四页，创作于2022年6月（一）形态学检查电镜和免疫电镜检查 普通光学显微镜检查 包涵体第三十六张，PPT共四十四页，创作于2022年6月（二）病毒成分检测1.病毒蛋白抗原检测 免疫标记技术2.病毒核酸检测 核酸扩增技术 核酸杂交技术 基因芯片技术 基因测序第三十七张，PPT共四十四页，创作于2022年6月（三）早期抗体检测 可诊断急性感染 特异性IgM抗体：孕妇感染风疹病毒 EBV早期抗原抗体 EAV核心抗原抗体 早期抗原的抗体 EAV衣

12、壳抗原抗体第三十八张，PPT共四十四页，创作于2022年6月第二节 病毒感染的特异性预防 微生物及其代谢产物 生物制品 动物免疫血清（biological products） 免疫细胞 细胞因子 防治和诊断感染性疾病第三十九张，PPT共四十四页，创作于2022年6月灭活疫苗（inactivated vaccine）活疫苗（living vaccine）重组载体疫苗（recombinant carrier vaccine）亚单位疫苗（subunit vaccine） 化学提取或人工合成疫苗 重组疫苗（recombinant vaccine）核酸疫苗（nucleic acid vaccine）一、人工主动免疫常用生物制品第四十张，PPT共四十四页，创作于2022年6月二、人工被动免疫常用生物制品 免疫球蛋白 血清丙种球蛋白 细胞免疫制剂 IFN-、 细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF 、CSF 淋巴因子激活的杀伤细胞 LAK细胞 第四十一张，PPT共四十四页，创作于2022年6月第三节 病毒感染的治疗 核苷类药物 非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂 其他抗病毒药物 干扰素和干扰素诱生剂 中草药 基因治