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1、第35讲 微生物的培养与应用考点三 分解纤维素的微生物的分离固必备知识提关键能力固必备知识一、筛选菌株1.原则:人为提供有利于目的菌株生长的条件,同时抑制或阻止其他微生物的生长。2.目的:在培养基上形成的由_繁殖而来的子细胞群体菌落。单个菌种3.分离微生物所用的选择培养基一定是固体培养基,因为菌落只能在固体培养基上形成。二、纤维素分解菌的分离1.方法:_。刚果红染色法红色复合物透明圈3.标志:使用以纤维素为唯一碳源的选择培养基,根据_来筛选纤维素分解菌。是否产生透明圈纤维素选择培养基梯度稀释纤维素酶三、菌株筛选原理的比较土壤中分解尿素的细菌筛选分解纤维素的微生物尿素作为唯一氮源纤维素作为唯一碳
2、源常用选择培养基进行筛选,即提供有利于目的菌株生长的条件,如营养、温度、 等,同时抑制其他微生物的生长刚果红 染色法,即在含纤维素的培养基中加入刚果红染液,刚果红与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被分解后,该复合物不能形成,培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈四、选择培养基的制作方法1.依据某些微生物对某些物质的抗性,在培养基具备全部营养成分的前提下,加入某些物质,以抑制不需要的微生物生长,促进所需的微生物生长。如在培养基中加入高浓度食盐时可抑制多种细菌的生长,但不影响金黄色葡萄球菌的生长,从而将金黄色葡萄球菌分离出来;在培养基中加入青霉素时可抑制细菌、放线菌的生长,从而分离得到酵
3、母菌和霉菌。3.利用培养基的特定化学成分分离特定微生物。如当石油是唯一碳源时,可抑制不能利用石油的微生物生长,使能够利用石油的微生物生存,从而分离出能降解石油污染的微生物。4.通过某些特殊环境分离微生物。如在高盐环境中可分离耐盐菌,其他菌在盐浓度高时因易失水而不能生存;在高温环境中可分离得到耐高温的微生物,其他微生物在高温环境中因酶失活而无法生存。反刍动物,如牛和山羊,具有特殊的器官瘤胃。在瘤胃中生活着多种分解纤维素的微生物,研究人员通过实验筛选山羊瘤胃纤维素分解菌。结合相关知识,回答下列问题:37在富含纤维素的条件下,纤维素分解菌能够分解纤维素并获取营养,因而能够迅速繁殖,不能分解纤维素的微
4、生物因缺乏营养而不能繁殖(2) 将培养至混浊的培养液涂布到含羧甲基纤维素钠和刚果红的培养基上,该培养基是_(功能)培养基。与“浓缩”纤维素分解菌的培养基不同的是,该培养基还需添加一定量的_,以便筛选纤维素分解菌。鉴别琼脂(或凝固剂)(3) 通过观察产生透明圈的不同菌落,该实验室提出山羊瘤胃中存在多种纤维素分解菌的观点,他们的实验依据是_。(4) 将不同纤维素分解菌纯化培养,并对其纤维素酶种类进行比较,发现均至少包括三种组分,即_。若定量比较不同微生物纤维素酶的活性高低,应如何操作?写出简要的实验思路:_。将等量不同来源的纤维素酶与等量纤维素混合,在相同且适宜的条件下反应一段时间,通过测定葡萄糖
5、的生成量确定不同酶的活性高低出现了多种不同特征(形状、颜色等)的菌落提关键能力考向 纤维素分解菌的分离和应用 (2021重庆质检)某生态农业示范区为使农作物秸秆垃圾资源化,准备用纤维素分解菌处理秸秆后用于酒精发酵。研究人员按下图相关工艺流程从土壤样品中分离出纤维素分解菌,并进行扩大培养。请回答下列问题:(1) 为保证分离得到纤维素分解菌,所取的土壤样品应具有什么特点?_。富含纤维素解析 纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中,因此为保证分离到纤维素分解菌,所取的土壤样品应该富含纤维素。(2) 选择培养时,应选择_(填“液体”或“固体”)培养基,原因是_。液体液体培养基能够振荡培养,让微生物充
6、分接触营养物质并快速繁殖解析 在对纤维素分解菌进行选择培养时,应用液体培养基,因为液体培养基能够振荡培养,让微生物充分接触营养物质、快速繁殖。(3) 涂布接种所用的工具为_,对其进行灭菌的正确步骤是_。A.在酒精中浸泡后,立即放在酒精灯火焰上灼烧B.在酒精中浸泡后,拿出,滴尽酒精,再放在酒精灯火焰上灼烧C.放在酒精灯火焰上灼烧后,立即放入酒精中充分浸泡涂布器B解析 涂布接种所用的工具为涂布器。对其灭菌常采用在酒精中浸泡后,拿出,滴尽酒精,再放在酒精灯火焰上灼烧,进行灼烧灭菌。(4) 涂布接种所用的培养基从用途上划分,属于_培养基,待菌落长出后,先后用_处理后可观察到菌落周围的透明圈,菌落周围的
7、透明圈大小可能与纤维素酶的_有关。鉴别刚果红染料、氯化钠溶液活力解析 培养基从用途上分为选择培养基和鉴别培养基,涂布接种所用的培养基从用途上划分,属于鉴别培养基。待菌落长出后,先后用刚果红染料(对纤维素染色)、氯化钠溶液(洗去多余的染液)处理,可观察到菌落周围的透明圈。菌落周围的透明圈大小可能与纤维素酶的活力有关;纤维素酶的活力越大,分解纤维素能力越强,菌落周围的透明圈越大。(5) 挑选透明圈较大的菌落进一步扩大培养若干天后,将发酵液离心、取上清液、浓缩、冻干,即获得纤维素酶冻干粉。测定该纤维素酶活性的一般方法是_。对纤维素酶分解纤维素后产生的葡萄糖进行定量测定(1) 纤维素酶是一种复合酶,一般认为它至少包括三种组分,即_。为筛选纤维素分解菌,将大熊猫新鲜粪便样品稀释液接种至以_为唯一碳源的固体培养基上进行培养,该培养基从功能上分类属于_培养基。纤维素选择(2) 配制的培养基必须进行灭菌处理,目的是_。检测固体培养基灭菌效果的常用方法是_。杀死培养基中的所有微生物(包括芽孢和孢子)不接种培养(或空白培养)解析 由于培养基具有适宜细菌、真菌等生长的条件,所以在配制完培养基后应进行灭菌处理,杀死培养基中的所有微生物(包括芽孢和孢子),以防止杂菌对实验的干扰。检测固体培养基灭菌效果的常
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