Alltech 2000型蒸发光散射检测器解决HPLC检测难题

1、ELSD检测器的选择和主要的应用介绍GRACE 格雷斯公司探索科技 Davison 从分析到制备的解决方案美国奥泰公司(Alltech)于2004年8月并入Grace公司，隶属于三大 分支之一的Davison旗下的探索科技部门。Davison是全球最大的硅胶生产商，能够为LC,GC和LC的应用提供从小规模研发到大规模工业生产的一站式解决方案。 HPLC和GC柱，配件和仪器 硅胶基色谱填料HPLC毛细柱和微径柱 HPLC柱和小型仪器 制备级和工业级LC柱和装柱服务 生物分离专用HPLC柱和填料 GRACE大纲常规检测器的回顾ELSD的检测原理ELSD与常规检测器的比较ELSD在分析上的优点All

2、tech ELSD的介绍ELSD的维护质量保证总结GRACE其它检测器的介绍 紫外可见UV/Vis 示差折光RI 荧光Fluorescence 质谱Mass SpectrometryGRACE检测器是高效液相色谱（HPLC）的核心部件之一，被喻为HPLC的眼睛。它的作用是将色谱柱流出物中样品含量的变化转换为可供观测的信号，通常是转换为电信号，以便自动记录下来进行定性定量分析。检测器的应用分布紫外可见 65%示差和蒸发光10%电化学10%荧光8%质谱4%其它3%GRACE紫外/可见检测器UV/VIS优点： 易于操作 可靠性 费用相对低廉 溶剂梯度兼容 对样品没有破坏性 相对灵敏度高GRACE局限

3、性： 没有好的发光基团 的化合物响应较差 溶剂的使用上受紫外截止波长的限制荧光检测器Fluorescence 优点：很好的灵敏度很好的选择性受流速和温度的变化影响很小GRACE局限性：线性范围窄操作复杂-需要对化合物和仪器的变化了解透彻某些物质如氧气会熄灭荧光-必须严格脱气能够自然产生荧光的化合物不是很多衍生方法复杂示差折光检测器RI优点：通用性-对几乎所有的物质具有相应宽的动态线性范围-104易于操作GRACE局限性:检测灵敏度不高对于温度和压力的波动敏感平衡慢检测既有正峰也有负峰不能进行梯度洗脱流动相预先混合后的效果好于泵在线混合的质谱 MS优点:灵敏度高选择性好提供化学结构信息GRACE

4、局限性:购买费用高操作复杂需要经常维护定量分析困难蒸发光散射检测器ELSD发展历史检测原理局限性优点在分析中的应用GRACE发展历史: 第一台商业化的产品出现在80年代初期 最早的应用集中在聚合物的分析上 90年代初期，更多其它方面的应用 目前,应用在广泛的领域GRACEELSD行业超过20年的领先制造经验:GRACE500 型2000 型800 型2000ES型3300 型独特的检测方法：检测三部曲:雾化溶剂的蒸发检测GRACEELSD可以对所有挥发性低于流动相的物质作出准确检测，而与被检测物质的化学基团关系不大，物理性质类似的物质响应一致，响应值与样品的质量成正比。第一步：雾化色谱柱流出物

5、通过喷雾器针孔与氮气混合形成均匀的雾状液滴(气溶胶)GRACE第二步：溶剂的蒸发液滴通过加热的漂移管流动相蒸发干燥的样品颗粒保留GRACE第三步：检测样品颗粒通过流动池激光“撞击”颗粒被散射光电二极管检测散射光检测角度为90，避免虚假信号(90折射/衍射光；90反射光)GRACE两种类型气溶胶处理方式：A型-所有液滴进入漂移管及流动池(又称为“无气溶胶分流 No Aerosol Splitting”)B型-部分液滴分流排掉；只有一部分进入漂移管及流动池(“气溶胶分流Aerosol Splitting”)GRACEA型ELSD-气溶胶不分流操作所有样品从喷雾器进入漂移管及流动池需要较高温度才能完

6、全蒸发流动相；A型ELSD只有不分流一种操作模式GRACEB型ELSD-气溶胶分流操作部分样品被排掉较低的温度已足够蒸发所有溶剂B型ELSD只有分流一种操作模式GRACEAlltech 2000(ES)型ELSD唯一提供两种操作模式的ELSD，在任何流动相及样品分析条件下均达到最佳结果GRACE一台仪器，两种操作模式：撞击器(Impactor)关-所有液滴进入漂移管及流动池(A型ELSD-无分流)撞击器(Impactor)开-部分液滴被排除，只有一部分进入漂移管及流动池(B型ELSD-气溶胶分流)采用新型专利“气溶胶分流技术” US Patent #6229605 GRACE撞击器关模式撞击器

7、与气溶胶流向平行所有样品流过漂移管到达流通池最适用于非挥发性样品及挥发性溶剂(大部分为有机)Drive ShaftNebulizerOpticsImpactor OffGRACENebulizerDrive ShaftImpactor OffOpticsExhaustDrift TubeNebulizerImpactorDrain撞击器开模式撞击器垂直于气溶胶流向，部分液滴碰上撞击器从废液管排掉;其余穿过撞击器，经过漂移管到达流动池最适用于半挥发性样品及低挥发性溶剂(大部分为水溶液)Drive ShaftNebulizerImpactor OnOpticsGRACENebulizerDrive

8、 ShaftImpactor OnNebulizerDrainImpactorDrift TubeExhaustOptics撞击器关-最适合非挥发性样品Column: Alltech 700CH Carbohydrate Column 10m, 300 x6.5mmMobile Phase: 100% WaterFlowrate:0.5mL/min1. 蜜三糖 (50g/mL)2. 乳糖(50g/mL)3. 葡萄糖 (50g/mL)4. 甘露糖 (50g/mL)Column: Alltech 700CH Carbohydrate Column 10m, 300 x6.5mmMobile Pha

9、se: 100% WaterFlowrate:0.5mL/min# 9206# 9205Impactor OnImpactor Off碳水化合物非挥发性样品在撞击器“关”的情况下也不挥发，全部进入流动池，得到最高灵敏度 GRACE撞击器关-最适合挥发性溶剂有机溶剂在较低温度蒸发，在撞击器“关”的情况下，也会完全蒸发，B型ELSD 任何条件下均分流，造成样品损失，降低检测灵敏度Column: Alltech Econosphere, C18, 5m, 150 x 4.6 mmMobile Phase: Methanol:Water (90:10)Flowrate:0.8mL/minColumn:

10、 Alltech Econosphere, C18, 5m, 150 x 4.6 mmMobile Phase: Methanol:Water (90:10)Flowrate:0.8mL/min1. n-癸基-b-D-吡喃糖苷 (5g/mL)2. n-辛基-b-D-吡喃糖苷 (5g/mL)3. n-十二烷基-b-D-吡喃糖苷(5g/mL)葡萄糖苷分析Impactor OnImpactor Off# 9180# 9179GRACE撞击器开-最适合半挥发性样品在撞击器开情况下，可以较低温蒸发溶剂，防止半挥发性样品蒸发防腐剂分析Column: Alltech Econosphere, C18, 5m

11、, 150 x 4.6 mmMobile Phase: Methanol:Water (90:10)Flowrate:0.8mL/minColumn: Alltech Econosphere, C18, 5m, 150 x 4.6 mmMobile Phase: Methanol:Water (90:10)Flowrate:0.8mL/min1. 羟基苯甲酸甲酯 2. 羟基苯甲酸乙酯3. 羟基苯甲酸丙酯4. 羟基苯甲酸丁酯# 9202Impactor OffImpactor On# 9201GRACE撞击器开-在几乎室温下检测半挥发样品Column:Prevail Carbohydrate E

12、S, 5m, 250 x 4.6mm Mobile Phase: Acetonitrile: 0.04% Ammonium Hydroxide (80:20)Flowrate: 1.0mL/min 1.Glycerol甘油GRACEELSD的局限性1. 只能使用挥发性的流动相2. 样品的挥发性必须要小于流动相3. 检测器响应是非线性的GRACE挥发性的流动相改性剂#1Volatile Mobile Phase ModifierspKapKbpH RangeBPMPAcidsTrifluoroacetic Acid三氟乙酸0.313.7072.4CFormic Acid甲酸3.7510.2510

13、0.7CAcetic Acid醋酸4.759.25116.0CCarbonic Acid碳酸6.377.63BasesAmmonia氨水9.254.75-33.35CMethylamine甲胺10.813.1916.6CEthylamine二乙胺10.663.34-6.3CTriethylamine三乙胺11.012.9989.3CBuffersAmmonium Formate甲酸胺3.0-5.0120CPyridinium Formate甲酸吡啶翁3.0-5.0Ammonium Acetate乙酸胺3.8-5.8111CPyridinium Acetate乙酸吡啶翁4.0-6.0Ammoni

14、um Carbonate (for reverse phase)碳酸胺(用于反相)8.0 (adjusted)Ammonium Carbonate碳酸胺5.5-7.5 and 9.3-11.3GRACE挥发性的流动相改性剂#2Volatile Mobile Phase ModifierspKapKbpH RangeBPMPIon-Pair ReagentsPentafluoropropionic Acid五氟丙酸0.696-97CHeptafluorobutyric Acid七氟丁酸0.6120CNonafluoropentanoic Acid九氟戊酸140CPentadecafluorooc

15、atanoic Acid十五氟辛酸0.6189CTridecafluoroheptanoic Acid十三氟庚酸0.6175CGRACE载气流速与漂移管温度GRACE载气流速和漂移管温度是ELSD中可以调节的两个重要参数，建立适当的HPLC-ELSD分析方法需要对这两个参数进行优化。优化的原则是降低噪声到可以接受的程度，并尽量提高信噪比。载气流速与漂移管温度GRACE漂移管温度对基线水平和噪音的影响并无明显的规律性。低于某一温度，基线水平较高，因为低于这一温度，流动相得不到充分挥发，而盐的加入将会提高这一温度，因为盐的挥发需要更高的温度，但并不是漂移管温度越高越好，因为温度太高会使流动相沸腾，

16、反而会增加背景噪音，同时还有可能导致溶质的部分挥发，降低信噪比。故最优温度应为在流动相（包括其中所含的盐）基本挥发的基础上，产生可接受噪音的最低温度载气流速与漂移管温度GRACE一般来说，在其它条件不变的情况下，载气流速越小，形成的物质粒子半径越大，对激光的散射能力越强，相应的响应信号越大。但并不是载气流速越小越好，因为当载气流速太小时，流动相不能完全挥发，背景噪音会增加，信噪比也会降低。最优载气流速应是在可接受噪音的基础上，产生最大检测响应值时的最低流速。如何应对非线性响应的检测器？选择2阶方程或者幂指曲线方程使用曲线的仅仅线性部分使用log/log 双对数方法产生线性曲线 即:对照品的浓度

17、和面积同时取对数,至少两个点得到直线方程在中国药典2005版中，中药计算采用两点双对 数方法,抗生素计算采用三点双对数方法GRACE散射光的响应值与粒子质量的关系： Ikmb取对数： lgIblgmlgk m：待测组分的粒子质量和 I： 待测组分所产生的散射光光强 k,b：常数Log-Log线性方程GRACEELSD-功能强大的HPLC检测器通用性高-可检测任何挥发性低于流动相 的化合物灵敏度好-比示差及低波长紫外灵敏一致的响应-给出准确的样品浓度用途广泛-梯度相容，改善分离及缩短分析时间GRACEELSD响应因子的一致性GRACE不同的物质在蒸发光散射检测器中几乎具有相同的响应因子，这种响应

18、因子的一致性，使纯度分析结果和多组分物质的相对比例测定结果更准确。在无合适对照品的情况下，采用另外一种含量已知的物质作内标，测定未知物含量成为可能。这一点对组合分子库、无紫外发色团物质的新药基准品的建立尤为有用。ELSD比较其它几种检测器的优势示差 RI紫外可见 UV/Vis荧光Fluorescence 质谱MSGRACEELSD相比示差的优势:示差检测器的限制ELSD优点温度变化会引起基线不稳定不受环境温度影响可能出现负峰均是正峰不可以用梯度洗脱梯度洗脱兼容受溶剂峰干扰溶剂无响应，无溶剂峰灵敏度差ng级的检测限GRACEELSD不会出负峰五糖, 1.5mg/mLELSDRIRI (反转极性)

19、GRACEELSD相对RI，提高了检测灵敏度和基线稳定性RIELSD10277102781.Fructose 果糖2.Glucose 葡萄糖3. Sucrose 蔗糖Column: Prevail Carbohydrate ES, 5m, 53 x 7mm (Part No. 35104) Mobile Phase: Acetonitrile:Water (75:25) Flowrate: 2.0mL/min Column Temp: 30CGRACE碳水化合物的梯度洗脱# 7576 (Isocratic)1. 核糖2. 木糖3. 果糖4. 葡萄糖5. 蔗糖6. 麦芽糖7. 乳糖8. 棉子糖1

20、. 果糖2. 葡萄糖3. 蔗糖4. 麦芽糖5. 乳糖# 7570 (Gradient)CarbohydratesGRACEELSD相比紫外检测器的优势: UV的局限性 ELSD的优点只能检测吸收紫外或可见光 检测挥发性低于溶剂的任的化合物何化合物检测基于样品的消光系数 检测基于样品浓度低波长紫外检测作梯度洗脱时梯度洗脱时基线稳定 出现基线漂移溶剂峰会干扰 溶剂没有响应，无溶剂峰 溶剂选择受其紫外末端吸收限制可用任何挥发性的溶剂GRACE甾体化合物# 79411. 雌酮-3-硫酸钠, 100ng2. b-雌二醇-17- b -D-葡萄糖苷酸钠, 100ng3. 5b -孕烷-3a,20a-二醇-

21、葡萄糖酸苷, 220ng # 7940 Column: Alltima C18, 5m, 150 x 2.1mm(Part No. 88370)Mobile Phase:A: 0.1% TFA in WaterB: 0.1% TFA in MethanolGradient: Time:01018%B:60100100 Flow Rate: 0.2mL/minGRACE10446ELSD显示在UV谱图中未检测到的成分 Lotrimim AF Topical Solution1. PEG2. ClotrimazoleColumn: Alltima C18, 5m, 150 x 4.6mm (Par

22、t No. 88302)Mobile Phase:A: Water B: MethanolGradient: Time:081020 25%B:305010010030Flow Rate: 1.0mL/minColumn Temp.:40C#10446 #10447GRACEELSD比UV更能准确反映样品实际的量1:1 混合物1. Ephedrine 麻黄素2. Caffeine 咖啡因1045010449Column: Alltima HP EPS C18, 5m, 150 x 4.6mm (Part No. 87715) Mobile Phase: 1% Acetic Acid:Metha

23、nol:Acetonitrile (70:20:10) Flow Rate: 1.0mL/minGRACEELSD检测没有发光团的化合物不需要衍生1. lauric Acid2. Myristic Acid3. Palmitic Acid4. Stearic Acid5. Arachidic Acid6. Behenic Acid9539Column: Prevail Organic Acid, 5m, 150 x 4.6mm (Part No. 88640) Mobile Phase: (75:25) Acetonitrile:Methanol Flow Rate: 1.0mL/min脂肪酸

24、GRACEELSD在分离使用的溶剂选择上有特点1. LGG2. LGL3. LLL4. OGL5. PGL6. OLL7. OGO + PLL8. OOO10047Column: Alltima C18, 5m, 250 x 4.6mm (Part No. 88056) Mobile Phase: A: Acetonitrile B: Dichloromethane Gradient: Time:040%B:3050 Flow Rate: 1.0mL/minTriglycerides in Evening Primose Oil 月见草油中的甘油三酯GRACE二氯甲烷对于高分子量的甘油三酯溶解

25、度高.荧光检测器的局限性大多需要柱前或柱後衍生无需衍生荧光检测器的限制 ELSD的优点GRACE柱前衍生法分析氨基酸紫外&荧光1. 天门冬氨酸2. 谷氨酸3. 丝氨酸4. 甘氨酸5. 组氨酸6. 苏氨酸7. 丙氨酸8. 精氨酸9. 脯氨酸10. 酪氨酸11. 蛋氨酸12. 缬氨酸13. 半胱氨酸14. 异亮氨酸15. 亮氨酸16. 苯丙氨酸17. 赖氨酸#7596#5164GRACE 1. Gly2. Ser/Asn3. Asp4. Gln5. Ala/Thr6. Glu7. Cys/Lys8. His9. Pro10. Arg11. Val12. Met13. Tyr14. Ile15. L

26、eu16. Phe17. TrpColumn: Prevail C18, 5m, 250 x 4.6mm (Part No. 99210)Mobile Phase: A: 5mM Heptafluorobutyric Acid, pH1.0 w/0.7% TFA B: AcetonitrileGradient: Time:06825%B:001535Flow Rate: 1.0mL/minGRACEELSD对无衍生氨基酸分析虽然MS是通用性的检测器，ELSD也有自己的优势投入和操作的成本低操作容易维护简单定量相比更准确 对于色谱条件的要求在ELSD和MS上是相似的，所以ELSD方法能够方便的应

27、用在MS上不需要修改。 在ELSD上进行MS的方法研究，能够节省MS用于实际样品的分析GRACE并联使用UV/ELSD/MS能够得到最多的结构和浓度信息1. Aspartame2. Hydrocortisone 3. Reserpine4. Terfenadine Column: ZORBAX StableBond C18, 3.5m, 50 x 4.6mm (Part No. 835975-902)Mobile Phase: A: 0.025% Formic Acid in Water B: 0.025% Formic Acid in AcetonitrileGradient: Time:0

28、155.1%B:250025Flow Rate: 1.0mL/minColumn Temp: 30C Chrom#10456 #10458 #10457GRACE总结:用ELSD替代或补充现有检测器的益处消除衍生简化方法比RI有更好的灵敏度和稳定性给其它检测器作补充，能够看到哪些物质没有检测到能够比UV&MS得到更准确的样品量的信息GRACEELSD更多的优点：通用性的检测器:- 可以使用微径柱来提高灵敏度- 条件方便放大到制备- 在极端的梯度条件下进行快速分离检测没有发光团的化合物的理想选择:- Lipids磷脂- Polymers聚合物- Surfactants表面活性剂- Carbohy

29、drates碳水化合物GRACE在ELSD上用微径柱检测1.Vitamin A(100ng on-column)2.Vitamin E(160ng on-column)3.Vitamin K1(130ng on-column)Column:Alltima C18, 3m, 150 x 1mm (Part No. 88384) Mobile Phase: Methanol:Chloroform (90:10)Flow Rate: 50L/min #10279GRACE制备时通过ELSD控制馏分收集器，过滤UV无吸收化合物Column: Alltima C18, 5m, 150 x 10mm (P

30、art No. 81102)Mobile Phase: Water:Acetonitrile (55:45)Flow Rate: 5.0mL/minColumn Temp.: 25C1. Ethinamate (5.0mg/mL)#10438GRACEELSD对流动相的组成改变不响应，允许在极端梯度条件下的快速分离1.Ephedrine2.Acetylsalicylic acid3.Diphenhydramine4.Trimipramine Column:Alltech Alltima HP C18, 3m, 33 x 7.0mm (Part No. 87671)Mobile Phase: A

31、: 0.1% TFA in Water B: 0.1% TFA in Acetonitrile Gradient: Time:03%B:1090 Flow Rate:2.5mL/min Column Temp:30C #10451GRACE主要的应用领域GRACEPharmaceuticals 药物Non-chromophoric drugs 没有发光团的药品Excipients 赋性剂Impurities 杂质Amino acids氨基酸Aminoglycoside antibiotics 氨基糖甙类Nutraceuticals 天然产物Ginseng 人参Astragaloside IV

32、黄芪甲苷Ginkgolides 银杏Glucosamine氨基葡萄糖Polymers/Surfactants聚合物/表面活性剂PEGs Polysorbate聚山梨酸酯Tween PVA聚乙烯醇GPECDimethiconeLipids 脂类Phospholipids磷脂Triglycerides 甘油三酸酯Fatty acids 脂肪酸Carbohydrates碳水化合物Simple sugars单糖Oligomers 寡糖Sugar alcohols糖醇2005版中国药典中用ELSD检测的药品名称 序号产品名称检测化合物色谱条件药典页码1地肤子地肤子皂苷甲醇水冰醋酸=85:15:0.2一部

33、P812路路通路路通酸甲醇水冰醋酸=87:13:0.1一部P2053黄芪 黄芪甲苷 C18柱，乙腈：水=32：68 一部P212 4炙黄芪 黄芪甲苷C18柱，乙腈：水=32：68 一部P213 5银杏叶 萜类内酯 白果内酯 C18柱，甲醇:四氢呋喃：水=25：10：65 一部P220 6银杏叶提取物 萜类内酯 白果内酯C18柱， 正丙醇：四氢呋喃：水=1：15：84一部P282 7知母 拔契皂苷元 C18柱，甲醇：水=95：5 一部P1 48 8意苡仁 甘油三油酸酯 C18柱，乙腈：二氯甲烷=65：35 一部P260 9浙贝母 贝母素 C18柱，乙腈：水：二乙胺=70：30：0.3 一部P20

34、5 10乙肝宁颗粒黄芪甲苷甲醇水=75:25一部P29011玉屏风口服液黄芪甲苷乙腈水=35:65一部P40912补中益气丸（水丸）黄芪甲苷C18柱，乙腈：水=35：65 一部P48013银杏叶片萜类内酯 白果内酯C18柱， 正丙醇：四氢呋喃：水=1：15：84一部P597GRACE2005版中国药典中用ELSD检测的药品名称 序号产品名称检测化合物色谱条件药典页码13硫酸卡那霉素卡那霉素 C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=95：5 二部P724 14硫酸庆大霉素 庆大霉素 小诺霉素 C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=92：8二部P730 15硫酸依替米星 依替米星 奈

35、替米星 C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=84：16 二部P740 16硫酸小诺霉素 小诺霉素/庆大霉素C1a C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=94：6 二部P718GRACEELSD对氨基葡萄糖有比RI和UV更好的响应Column: Prevail Carbohydrate ES, 5m, 150 x 4.6mm (Part No. 35102)Mobile Phase: Acetonitrile:Water (65:35) Flow Rate: 1.0mL/min1. Glucosamine (1mg/mL)# 10412# 10413# 10411GRACE使用

36、ELSD可以梯度洗脱完全分离多种磷脂,灵敏度高GRACE1. Cholesterol 胆固醇2. Palmitic acid 棕榈酸3. Phosphatidylethanolamine 磷脂酰乙醇胺4. Phosphatidylserine 磷脂酰丝氨酸5. Phosphatidylcholine 卵磷脂6. Sphingomyelin 神经鞘磷脂Column: Alltech Allsphere Silica, 3m, 100 x 4.6mm (Part No. 778382)Mobile Phase: A: IPA B: Hexane C: WaterGradient:Time:0715

37、%B:404040%C:288Flow Rate: 1.25mL/minELSD检测糖醇-高灵敏度和稳定的基线Column: Prevail Carbohydrate ES, 5m, 250 x 4.6mm (Part No. 35101)Mobile Phase: Acetonitrile:Water (70:30) Flow Rate: 1.0mL/min1. iso-Erythritol异赤藻糖醇2. Xylitol 木糖醇3. Mannitol甘露醇4. Maltitol麦芽糖醇# 9352糖醇GRACEELSD轻松检测困难化合物-Tween 80GRACE5% Tween 80Col

38、umn: Alltech Alltima C18, 5m, 250 x 4.6mm (Part No. 88056)Mobile Phase: Water:Methanol (60:40)Flow Rate: 1.0mL/minELSD梯度洗脱分离玉米糖浆低聚糖GRACE 1. Dextrose 2. Maltose 3. Maltotriose 4. Maltotetraose 5. Maltopentaose 6. Maltohexaose 7. Maltoheptaose 8. Maltooctaose 9. Maltononaose10. Maltodecaose11. Maltoun

39、decaose12. Maltododecaose13. Maltotridecaose14. Maltotetradecaose15. MaltopentadecaoseColumn: Alltech Prevail Carbohydrates ES 300A, 5m, 250 x 4.6mm (Part No. 35101) Mobile Phase: A: Acetonitrile B: WaterGradient:Time:015%B:3550Flow Rate: 1.0mL/min无需衍生检测橄榄油中的甘油三酯GRACE1. 1,2-Dilinoleyl-3-Oleyl-rac-gl

40、ycerol (LLO)2. 1,2-Dilinoleyl-3-Palmityl-rac-glycerol (LLP)3. 1,2-Dioleyl-3-linolein-rac-glycerol (OOL)4. 1-Palmityl-2-Olein-3-linolein-rac-glycerol (POL)5. 1,2-Dipalmityl-3-linolein-rac-glycerol (PPL)6. Triolein (OOO)7. 1,2-Dioleyl-3-palmityl-rac-glycerol (OOP)8. 1,2-Dipalmityl-3-oleyl-rac-glycerol

41、 (PPO)9. 1,2-Dioleyl-3-stearyl-rac-glycerol (OOS) Column: Alltech Alltima C18, 3m, 150 x 4.6mm (Part No. 91387)Mobile Phase: A: Dichloromethane B: AcetonitrileGradient:Time:0101820%B:70557070Flow Rate: 1.5mL/min脂肪和油一般含有特征性的甘油三酯,分析甘油三酯可以鉴定脂肪和油的品种.掺有植物油的橄榄油的鉴定分析GRACE1. LLL2. LLO3. LLP4. OOL5. POL6. OO

42、O7. OOP8. PPO9. OOSColumn:Alltima C18, 3m, 150 x 4.6mmMobile Phase:A: Dichloromethane B: AcetonitrileGradient:Time:010 18 20%B:7055 7070Flowrate:1.5mL/minDetector:ELSD 2000橄榄油含有大量的油酸甘油三酯,而不含亚麻酸甘油三酯.后者却存在于菜油中,显示于掺有菜油的橄榄油谱图中.生物柴油(Biodiesel Poster)生产中的反应和质量监控GRACE生物柴油是一种可再生、生物可降解和无毒燃料,它可以通过动植物油的转酯反应来制备

43、.作为天然柴油的替代物.目前国内外学者广泛采用的转酯法,即三甘油酯在酸、碱或酶等催化剂作用下经转酯反应制备生物柴油MAGs, DAGs和未反应的TAGs会造成污染影响生物柴油的品质GRACEBiodiesel Contaminated with Mono-, Di- and TriacylglycerolsUnreacted Tryacylglycerols (豆油Soy Oil) Column:Alltima HP C18-HL, 5m, 250 X 4.6mmMobile Phase: A: Acetonitrile B: DichloromethaneGradient:Time05303

44、235% B01570700Flow rate:1.0 ml/min氨基糖苷类抗生素的ELSD分析(中国药典2005)Column: Apollo C18, 5m, 250 x 4.6mm Mobile Phase: 0.2M Trifluoroacetic Acid:Methanol (94:6)Flow Rate: 0.6mL/min1. Sulfate2. Gentamicin C1a3. Gentamicin C24. Gentamicin C2b5. Gentamicin C2a6. Gentamicin C1# 10425庆大霉素 C组分 *中检所抗生素室GRACE银杏叶提出物中内

45、酯含量的ELSD测定(中国药典2005)银杏叶提出物的内酯类成份决定了其药理作用，HPLC-RI法灵敏度与稳定性均不理想；若采用紫外分析因为内酯类成份吸收差，最大吸收波长在219nm，受试剂末端吸收影响很大。1. 银杏苦内酯C2. 白果内酯3. 银杏苦内酯A4. 银杏苦内酯BGRACEColumn: Platinum C18, 5m, 250 x 4.6mm Mobile Phase: H2O:MeOH:THF=75:20:10Flow Rate: 1.0mL/min黄芪中黄芪甲苷的ELSD分析(CHP2005)黄芪甲苷常作为指标性成份用于黄芪药材的质量监控，因为只在220nm有弱的末端吸收，

46、过去未能使用HPLC法定量，ELSD有通用响应，使用HPLC-ELSD法干扰少，分离度高.1. 黄芪甲苷GRACEColumn: Apollo C18, 5m, 250 x 4.6mm Mobile Phase: CAN:H2O= (32:68)Flow Rate: 1.0mL/min三七药材及其制剂中三七皂苷R1,人参皂苷Rg1及Rb1的含量 GRACE图 三七药材及血塞通注射液HPLC色谱图a.对照品b.三七药材c.血塞通注射液 1.三七皂苷R1 2.人参皂苷Rg13. 人参皂苷Rb1Column: Alltech Alltima C18, 5m, 150 x 4.6mm Mobile P

47、hase: A: Water B: AcetonitrileGradient:Time:021%B:3060Flow Rate: 0.6 mL/minAlltech ELSD 2000ES光路和电子元件进行更新布儒斯特角光阱,增加光阱尾吹30mW的激光光源光池涂四氟乙烯的抗腐蚀涂层降低背景噪音，比2000ELSD提高一个数量级的灵敏度GRACE关于布儒斯特角当反射光线和折射光线的传播方向互相垂直时,入射光线的偏振角称为布儒斯特角.当透镜只能通过垂直方向的偏振光时,便可挡住部分散射的光线.自然光在两种各向同性媒质分界面上反射、折射时，反射光和折射光都是部分偏振光。反射光中垂直振动多于平行振动，折

48、射光中平行振动多于垂直振动。 GRACEELSD 2000ES性能更新灵敏度的挑战一种措施是仅仅增加光强，但是同时会增加基线的噪音，导致LOD和信噪比没有变化。ELSD 2000ES 克服这种障碍，专利设计的布儒斯特角光阱，当光强增加时，信号的增强远大于噪音的增加。2000ES结合布儒斯特角光阱和30mW的光源为一体。GRACEELSD 2000ES灵敏度更新对相同的浓度的样品有多于10倍的信噪比(S/N)增长增强最小检出限 (LOD)GRACE灵敏度比较 2000ES vs 20002000ES对相同量的氢化可的松增加灵敏度1. Hydrocortisone (100ng on column)Column: Alltima C18, 5m, 4.6 x 250mm (Part No. 88056)Mobile Phase: Water:Acetonitrile (55:45)Flow Rate:1.0mL/minGRACE灵敏度比较表 与其它品牌的ELSDGRACEAlltech 2000(ES)ELSD具有专利保护