细胞培养液配制

1、关于细胞培养液的配制第一张，PPT共二十七页，创作于2022年6月 培养基的选择 依据: 经验、文献、尝试 常用: RPMI1640、DMEM 培养基的来源 市售干粉培养基-自己配制 液体培养基-直接使用(注意有效期) 第二张，PPT共二十七页，创作于2022年6月培养基的除菌方法 过滤除菌: (1) 正压过滤-效率高 (2) 负压过滤-效率低 高压蒸气灭菌: 不含谷氨酰胺，灭菌后另外添加培养基附加成分的添加 按使用说明或实验要求添加 配制时加: 碳酸氢钠、抗生素、血清等 临用前加: 生物活性因子如EGF、FGF、NGF、PDGF等 第三张，PPT共二十七页，创作于2022年6月RPMI164

2、0培养液配制过程 准备物品 (1) 不锈钢过滤器, 滤膜(0.45m,0.22m),磁力搅拌器,天平,烧杯,量筒,盐水瓶 (2) 培养粉,1N HCl,NaHCO3,青霉素,链霉素,胎牛血清,新鲜三蒸水 消毒物品 滤器中放置0.45m和0.22m滤膜, 包装, 高压蒸气消毒第四张，PPT共二十七页，创作于2022年6月配制步骤 (1) 10.4g/包培养粉溶至1L三蒸水中, 磁力搅拌20min(2) 加2g NaHCO3/L, 继续搅拌10min(3) 加青霉素100U/mL(80万U溶至4ml三蒸水, 取0.5ml) 链霉素100U/mL(100万U溶至5ml三蒸水, 取0.5ml)(4)

3、加1N HCl约3mL, 调pH至7.2, 继续搅拌第五张，PPT共二十七页，创作于2022年6月(5) 按要求加血清（血清一般需经56，30min灭活） 例如: 10%胎牛血清 无血清培养液 900ml 灭活胎牛血清 100ml(6) 正压过滤除菌 (气压适当, 防止滤膜破裂)(7) 分装,贮存于4，2周内用完。(8) 无菌试验: 取样, 37放置2472h, 无细菌、霉菌污染方可使用第六张，PPT共二十七页，创作于2022年6月注意事项 谷氨酰胺在溶液中很不稳定，分解，放置两周以上时，根据需要添加谷氨酰胺。配制母液（200 mmol/L, 即29.22g/L）, 每100ml加入0.52

4、ml母液，终浓度14 mmol/L 抗生素在37稳定性维持34d, 可控制轻度污染。防污染重在无菌操作 第七张，PPT共二十七页，创作于2022年6月 培养液配制过程 （以RPMI1640为例）第八张，PPT共二十七页，创作于2022年6月1. 物品准备(1）滤器、 微孔滤膜、磁力搅拌器、天平、烧杯、量筒、pH计、贮液瓶等。 第九张，PPT共二十七页，创作于2022年6月(2) 培养粉、 NaHCO3、 1N HCl、青霉素、链霉素、血清、新鲜制备的三蒸水第十张，PPT共二十七页，创作于2022年6月 2. 滤器消毒准备第十一张，PPT共二十七页，创作于2022年6月取孔径为0.45m和0.2

5、2m滤膜各一张，浸入三蒸水中 第十二张，PPT共二十七页，创作于2022年6月将浸湿后的滤膜光面向上依次置于滤器上第十三张，PPT共二十七页，创作于2022年6月将装有滤膜的滤器包装后高压蒸气消毒第十四张，PPT共二十七页，创作于2022年6月 3.液体配制第十五张，PPT共二十七页，创作于2022年6月 将培养粉倒入容器中第十六张，PPT共二十七页，创作于2022年6月加入新鲜制备的三蒸水磁力搅拌器充分搅拌第十七张，PPT共二十七页，创作于2022年6月按照实验的具体要求分别加入 NaHCO3和青链霉素（青霉素100U/mL：80万U溶至4ml三蒸水, 取0.5ml； 链霉素100U/mL：

6、100万U溶至5ml三蒸水, 取0.5ml)第十八张，PPT共二十七页，创作于2022年6月按要求加入一定比例的血清（血清一般需经56，30min灭活） 例如: 配制含10%胎牛血清的RPMI1640培养液1升，应加入 无血清培养液900ml 灭活胎牛血清100ml第十九张，PPT共二十七页，创作于2022年6月加入1N HCl约3mL,调整pH至7.27.4第二十张，PPT共二十七页，创作于2022年6月磁力搅拌器充分搅拌准备过滤第二十一张，PPT共二十七页，创作于2022年6月 无菌条件下装好滤器，检查气体以及液体管道是否通畅。 (一般使用氧气。注意气压适当, 防止滤膜破裂，)第二十二张，PPT共二十七页，创作于2022年6月将液体倒入无菌滤器，接通气体第二十三张，PPT共二十七页，创作于2022年6月 过滤后的液体分装于贮液瓶第二十四张，PPT共二十七页，创作于2022年6月分装过程严格无菌