蛋白质结构与功能

1、关于蛋白质的结构与功能第一张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月什么是蛋白质?蛋白质(protein)是由许多氨基酸(amino acids)通过肽键(peptide bond)相连形成的具有特定空间构象的高分子含氮化合物。第二张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月蛋白质研究的历史1833年，从麦芽中分离淀粉酶；随后从胃液中分离到类似胃蛋白酶的物质。1864年，血红蛋白被分离并结晶。19世纪末，证明蛋白质由氨基酸组成，并合成了多种短肽。20世纪初，发现蛋白质的二级结构；完成胰岛素一级结构测定。第三张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月20世纪中叶，各种蛋白质分析技术相继建立，

2、促进了蛋白质研究迅速发展；1962年，确定了血红蛋白的四级结构。20世纪90年代，功能基因组与蛋白质组研究的展开。第四张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月蛋白质的生物学重要性分布广：所有器官、组织都含有蛋白质；细胞的各个部分都含有蛋白质。含量高：蛋白质是细胞内最丰富的有机分子，占人体干重的45，某些组织含量更高，例如脾、肺及横纹肌等高达80。1. 蛋白质是生物体重要组成成分第五张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月作为生物催化剂（酶）代谢调节作用免疫保护作用物质的转运和存储运动与支持作用参与细胞间信息传递2. 蛋白质具有重要的生物学功能3. 氧化供能第六张，PPT共一百一十页，创

3、作于2022年6月蛋白质的分子组成The Molecular Component of Protein第一节第七张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月组成蛋白质的元素主要有C、H、O、N和 S。 有些蛋白质含有少量磷或金属元素铁、铜、锌、锰、钴、钼，个别蛋白质还含有碘 。第八张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月 各种蛋白质的含氮量很接近，平均为16。 由于体内的含氮物质以蛋白质为主，因此，只要测定生物样品中的含氮量，就可以根据以下公式推算出蛋白质的大致含量：100克样品中蛋白质的含量 (g %)= 每克样品含氮克数 6.251001/16%蛋白质元素组成的特点第九张，PPT共一百

4、一十页，创作于2022年6月一、组成人体蛋白质的20种氨基酸均属于L-氨基酸（甘氨酸除外）存在自然界中的氨基酸有300余种，但组成人体蛋白质的基本氨基酸有20种，且均属 L-氨基酸（甘氨酸除外）。第十张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月H甘氨酸CH3丙氨酸L-氨基酸的通式RC+NH3COO-H第十一张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月非极性脂肪族氨基酸极性中性氨基酸芳香族氨基酸酸性氨基酸碱性氨基酸二、氨基酸可根据侧链结构和理化性质进行分类第十二张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月(一)侧链含烃链的氨基酸属于非极性脂肪族氨基酸第十三张，PPT共一百一十页，创作于2022年

5、6月(二)侧链有极性但不带电荷的氨基酸是极性中性氨基酸第十四张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月(三)侧链含芳香基团的氨基酸是芳香族氨基酸第十五张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月天冬氨酸 aspartic acid Asp D 2.97谷氨酸 glutamic acid Glu E 3.22赖氨酸 lysine Lys K 9.74精氨酸 arginine Arg R 10.76组氨酸 histidine His H 7.59(四)侧链含负性解离基团的氨基酸是酸性氨基酸(五)侧链含正性解离基团的氨基酸属于碱性氨基酸目 录第十六张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月小结：

6、A.几种特殊氨基酸 脯氨酸（亚氨基酸）CH2CHCOO-NH2+CH2CH2CH2CHCOO-NH2+CH2CH2注意点： 为亚氨基酸，此氨基仍能与另一羧基形成肽键 亚氨基的N在环中，移动的自由度受限制，当脯氨酸处于多肽链中时，往往形成转角 可被修饰为羟脯氨酸第十七张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3半胱氨酸 +胱氨酸二硫键-HHHS-CH2-CH-COO-HS-CH2-CH-COO-+NH3第十八张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月 B.哺乳动物体内还

7、有许多氨基酸，如鸟氨酸、瓜氨酸、同型丝氨酸、同型半胱氨酸等，它们出现于代谢过程中，并不参与构成蛋白质。 C.其它分类等:酸碱:冬天谷酸，赖组精碱 芳香族:色、酪、苯丙含硫 :半胱、蛋 支链：亮、异亮、缬酰胺：天冬酰胺、谷氨酰胺 R含羟基：苏、丝、酪缩写相近：色Trp、酪Tyr、苏Thr营养必需氨基酸：色赖苯丙蛋，苏亮异亮缬生酮：亮、赖；生糖：芳香族+苏、亮；生酮兼生糖：余 D .蛋白质中的氨基酸残基可被修饰，如：甲基化、乙酰化、甲酰化、异戊二烯化、磷酸化等第十九张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月三、20种氨基酸具有共同或特异的理化性质两性解离及等电点氨基酸是两性电解质，其解离程度取决

8、于所处溶液的酸碱度。 等电点(isoelectric point, pI) 在某一pH的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，成为兼性离子，呈电中性。此时溶液的pH值称为该氨基酸的等电点。（一）氨基酸具有两性解离的性质第二十张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月pH=pI+OH-pHpI+H+OH-+H+pHpI氨基酸的兼性离子 阳离子阴离子第二十一张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月（二）含共轭双键的氨基酸具有紫外吸收性质色氨酸、酪氨酸的最大吸收峰在 280 nm 附近。大多数蛋白质含有这两种氨基酸残基，所以测定蛋白质溶液280nm的光吸收值是分析溶液中蛋白质含量

9、的快速简便的方法。芳香族氨基酸的紫外吸收第二十二张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月（三）多数氨基酸与茚三酮反应生成蓝紫色化合物多数氨基酸与茚三酮水合物共热，可生成蓝紫色化合物，其最大吸收峰在570nm处。由于此吸收峰值与氨基酸的含量存在正比关系，因此可作为氨基酸定量分析方法。脯氨酸和羟脯氨酸与其生成亮黄色化合物，最大吸收峰在440nm处。第二十三张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月四、蛋白质是由许多氨基酸残基组成的多肽链肽键(peptide bond)是蛋白质分子中的氨基酸通过脱水缩合而形成的共价键。是一种酰胺键，具有部分双键性质。（一）氨基酸通过肽键连接而形成肽 (pept

10、ide)第二十四张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月+-HOH甘氨酰甘氨酸肽键第二十五张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月肽是由氨基酸通过肽键缩合而形成的化合物。两分子氨基酸缩合形成二肽，三分子氨基酸缩合则形成三肽肽链中的氨基酸分子因为脱水缩合而基团不全，被称为氨基酸残基(residue)。由十个以内氨基酸相连而成的肽称为寡肽(oligopeptide)，由更多的氨基酸相连形成的肽称多肽(polypeptide)。第二十六张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月N 末端：多肽链中有游离-氨基的一端C 末端：多肽链中有游离-羧基的一端多肽链有两端：多肽链(polypeptid

11、e chain)是指许多氨基酸之间以肽键连接而成的一种结构。第二十七张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月N末端C末端牛核糖核酸酶第二十八张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月（二）体内存在多种重要的生物活性肽 1. 谷胱甘肽(glutathione, GSH)第二十九张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月GSH过氧化物酶H2O2 2GSH 2H2O GSSG GSH还原酶NADPH+H+ NADP+ GSH与GSSG间的转换 GSH具还原性及噬核特性第三十张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月 体内许多激素属寡肽或多肽 神经肽(neuropeptide)2.多肽类激素

12、及神经肽第三十一张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月蛋白质的分子结构The Molecular Structure of Protein 第二节第三十二张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月蛋白质的分子结构包括: 高级结构一级结构(primary structure)二级结构(secondary structure)三级结构(tertiary structure)四级结构(quaternary structure)第三十三张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月定义:蛋白质的一级结构指在蛋白质分子从N-端至C-端的氨基酸排列顺序。一、氨基酸的排列顺序决定蛋白质的一级结构主要的

13、化学键:肽键，有些蛋白质还包括二硫键。 第三十四张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学功能的基础，但不是决定蛋白质空间构象的唯一因素。第三十五张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月二、多肽链的局部主链构象为蛋白质二级结构蛋白质分子中某一段肽链的局部空间结构，即该段肽链主链骨架原子的相对空间位置，并不涉及氨基酸残基侧链的构象 。定义: 主要的化学键：氢键氢键形成的两个条件：氢的供体、氢的受体(X-Hy) 第三十六张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月（一）参与肽键形成的6个原子在同一平面上由于肽键具有部分双键的性质，不能自由旋转，参与肽键的6

14、个原子C1、C、O、N、H、C2位于同一平面，C1和C2在平面上所处的位置为反式(trans)构型，此同一平面上的6个原子构成了所谓的肽单元 (peptide unit) 。C-N 0.149nm肽键中C-N 0.132nmC=N 0.127nm第三十七张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月蛋白质的空间构象：天然蛋白质在其一级结构的基础上通过折叠、盘旋，形成各自独特的空间结构。这种空间结构称为。蛋白质的主链骨架是由一系列刚性的肽平面所组成。肽键两端的-碳原子所形成的单键可自由旋转，此旋转决定了两个肽平面的相对关系，从而使多肽链折叠、盘曲成高级结构。第三十八张，PPT共一百一十页，创作于2

15、022年6月 肽单元 (peptide unit)第三十九张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月 -螺旋 ( -helix) -折叠 (-pleated sheet) -转角 (-turn) 无规卷曲 (random coil) （二）-螺旋结构是常见的蛋白质二级结构蛋白质二级结构第四十张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月-螺旋第四十一张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月小结多个肽键平面通过碳原子旋转，相互之间以顺时针方向紧密盘曲成稳固的右手螺旋。-47 -57主链呈螺旋上升，每3.6个氨基酸残基上升一圈，相当于0.54nm。氨基酸侧链伸向螺旋外侧。螺旋每个肽键的N-H

16、和第四个肽键的CO形成氢健，这是稳定螺旋的主要键。第四十二张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月（三）-折叠使多肽链形成片层结构第四十三张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月是肽链相当伸展的结构，每个肽单元以C 为转折点折叠成锯齿状，相邻肽键平面间呈110角。氨基酸残基的R侧链伸出在锯齿的上方或下方。依靠两条肽链或一条肽链内的两段肽链间的CO与H形成氢键，使构象稳定。两段肽链可以是平行的，也可以是反平行的。即前者两条链从“N端”到“C端”是同方向的，后者是反方向的。片层结构的形式十分多样，正、反平行能相互交替。平行的片层结构中，两个残基的间距为0.65nm；反平行的片层结构，则间距

17、为0.7nm.小结第四十四张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月（四）-转角和无规卷曲在蛋白质分子中普遍存在-转角无规卷曲是用来阐述没有确定规律性的那部分肽链结构。第四十五张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月（五）模体是具有特殊功能的超二级结构在许多蛋白质分子中，可发现二个或三个具有二级结构的肽段，在空间上相互接近，形成一个有规则的二级结构组合，被称为超二级结构。二级结构组合形式有3种：， 。主要由非极性氨基酸残基参与此类相互作用，亲水侧链多在分子的外表面。第四十六张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月二个或三个具有二级结构的肽段，在空间上相互接近，形成一个特殊的空间构象，

18、称为模体(motif) 。模体是具有特殊功能的超二级结构。第四十七张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月钙结合蛋白中结合钙离子的模体锌指结构-螺旋-转角（或环）-螺旋模体链-转角-链模体链-转角-螺旋-转角-链模体模体常见的形式第四十八张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月（六）氨基酸残基的侧链对二级结构形成的影响蛋白质二级结构是以一级结构为基础的。一段肽链其氨基酸残基的侧链适合形成-螺旋或-折叠，它就会出现相应的二级结构。 影响因素: 侧链基团过大,产生位阻效应 连续多个同性氨基酸出现 脯氨酸其结构特点 甘氨酸的存在第四十九张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月三、在二级结

19、构基础上多肽链进一步折叠形成蛋白质三级结构疏水作用力、离子键、氢键和 Van der Waals力等。主要的化学键:整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置。即肽链中所有原子在三维空间的排布位置。定义:（一）三级结构是指整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置第五十张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月范德华力：分子间非专一性的相互作用力 （取向力、诱导力和色散力）疏水作用力：主要指非极性的疏水基团为避开水相，互相聚集在一起，藏于蛋白质分子内部或非极性区的趋势。离子键（盐键）：指正负离子所带的相反电荷间的相互静电作用。二硫键：是蛋白质分子中2个巯基氧化形成的一种共价键结构。第五十一张，PPT

20、共一百一十页，创作于2022年6月第五十二张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月 肌红蛋白 (Mb) N 端 C端153个氨基酸 (A-H个a-螺旋)第五十三张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月（二）结构域是三级结构层次上的局部折叠区分子量较大的蛋白质常可折叠成多个结构较为紧密的区域，并各行其功能，称为结构域(domain) 。如 3-磷酸甘油醛脱氢酶每个亚基有两个结构域1-146：与NAD+结合147-333：与底物结合第五十四张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月纤连蛋白分子的结构域第五十五张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月（三）分子伴侣参与蛋白质折叠分子伴侣

21、(chaperon)通过提供一个保护环境从而加速蛋白质折叠成天然构象或形成四级结构。分子伴侣可逆地与未折叠肽段的疏水部分结合随后松开，如此重复进行可防止错误的聚集发生，使肽链正确折叠。 分子伴侣也可与错误聚集的肽段结合，使之解聚后，再诱导其正确折叠。 分子伴侣在蛋白质分子折叠过程中二硫键的正确形成起了重要的作用。 第五十六张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月伴侣蛋白在蛋白质折叠中的作用:Gro EL-Gro ES反应循环 第五十七张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月亚基之间的结合主要是氢键和离子键。四、含有二条以上多肽链的蛋白质具有四级结构蛋白质分子中各亚基的空间排布及亚基接触

22、部位的布局和相互作用，称为蛋白质的四级结构。有些蛋白质分子含有二条或多条多肽链，每一条多肽链都有完整的三级结构，称为蛋白质的亚基 (subunit)。第五十八张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月由2个亚基组成的蛋白质四级结构中，若亚基分子结构相同，称之为同二聚体(homodimer)，若亚基分子结构不同，则称之为异二聚体(heterodimer)。 血红蛋白的四级结构第五十九张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月五、蛋白质的分类根据蛋白质组成成分:单纯蛋白质结合蛋白质 = 蛋白质部分 + 非蛋白质部分根据蛋白质形状:纤维状蛋白质球状蛋白质第六十张，PPT共一百一十页，创作于202

23、2年6月六、蛋白质组学（一）蛋白质组学基本概念蛋白质组是指一种细胞或一种生物所表达的全部蛋白质，即“一种基因组所表达的全套蛋白质”。 研究对象：细胞内全部蛋白质的存在及其活动方式第六十一张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月（二）蛋白质组学研究技术平台 蛋白质组学是高通量，高效率的研究:双向电泳分离样品蛋白质 蛋白质点的定位、切取 蛋白质点的质谱分析 （三）蛋白质组学研究的科学意义第六十二张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月蛋白质结构与功能的关系The Relation of Structure and Function of Protein第三节第六十三张，PPT共一百一十页，

24、创作于2022年6月（一）一级结构是空间构象的基础一、蛋白质一级结构是高级结构与功能的基础牛核糖核酸酶的一级结构二硫键第六十四张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月 天然状态，有催化活性 尿素、 -巯基乙醇 去除尿素、-巯基乙醇非折叠状态，无活性第六十五张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月（二）一级结构相似的蛋白质具有相似的高级结构与功能胰岛素氨基酸残基序号A5A6A10B30人ThrSerIleThr猪ThrSerIleAla狗ThrSerIleAla兔ThrGlyIleSer牛AlaGlyValAla羊AlaSerValAla马ThrSerIleAla第六十六张，PPT共一百

25、一十页，创作于2022年6月（三）氨基酸序列提供重要的生物化学信息一些广泛存在于生物界的蛋白质如细胞色素(cytochrome C)，比较它们的一级结构，可以帮助了解物种进化间的关系。 第六十七张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月（四）重要蛋白质的氨基酸序列改变可引起疾病例：镰刀形红细胞贫血N-val his leu thr pro glu glu C(146)HbS 肽链HbA 肽 链N-val his leu thr pro val glu C(146) 这种由蛋白质分子发生变异所导致的疾病，称为“分子病”。第六十八张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月肌红蛋白/血红蛋白含有

26、血红素辅基血红素结构 二、蛋白质的功能依赖特定空间结构（一）血红蛋白亚基与肌红蛋白结构相似第六十九张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月肌红蛋白(myoglobin，Mb) 肌红蛋白是一个只有三级结构的单链蛋白质，有8段-螺旋结构。血红素分子中的两个丙酸侧链以离子键形式与肽链中的两个碱性氨基酸侧链上的正电荷相连，加之肽链中的F8（第93位）组氨酸残基还与Fe2+形成配位结合，所以血红素辅基与蛋白质部分稳定结合。 第七十张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月血红蛋白(hemoglobin，Hb)血红蛋白具有4个亚基组成的四级结构。成年人：22胎儿期： 2 2胚胎期： 2 2每个亚基可

27、结合1个血红素并携带1分子氧。Hb亚基之间通过8对盐键，使4个亚基紧密结合而形成亲水的球状蛋白。 第七十一张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月Hb与Mb一样能可逆地与O2结合， Hb与O2结合后称为氧合Hb。氧合Hb占总Hb的百分数（称百分饱和度）随O2浓度变化而改变。（二）血红蛋白亚基构象变化可影响亚基与氧结合第七十二张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月肌红蛋白(Mb)和血红蛋白(Hb)的氧解离曲线第七十三张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月协同效应(cooperativity)一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结合后，能影响此寡聚体中另一个亚基与配体结合能力的现象，

28、称为协同效应。 如果是促进作用则称为正协同效应 (positive cooperativity)如果是抑制作用则称为负协同效应(negative cooperativity)第七十四张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月第七十五张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月O2血红素与氧结合后，铁原子半径变小，就能进入卟啉环的小孔中，继而引起肽链位置的变动。0.075nm第七十六张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月变构效应(allosteric effect)这种配体与亚基结合后，导致蛋白质空间构象的改变，使之适应于功能的需要，称为变构效应。即蛋白质空间结构的改变伴随其功能的变化。

29、第七十七张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月（三）蛋白质构象改变可引起疾病蛋白质构象疾病：若蛋白质的折叠发生错误，尽管其一级结构不变，但蛋白质的构象发生改变，仍可影响其功能，严重时可导致疾病发生。第七十八张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月蛋白质构象改变导致疾病的机理：有些蛋白质错误折叠后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉样纤维沉淀，产生毒性而致病，表现为蛋白质淀粉样纤维沉淀的病理改变。这类疾病包括：人纹状体脊髓变性病、老年痴呆症、亨停顿舞蹈病、疯牛病等。第七十九张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月疯牛病是由朊病毒蛋白(prion protein, PrP)引起的一组人

30、和动物神经退行性病变。正常的PrP富含-螺旋，称为PrPc。PrPc在某种未知蛋白质的作用下可转变成全为-折叠的PrPsc，从而致病。PrPc-螺旋PrPsc-折叠正常疯牛病疯牛病中的蛋白质构象改变第八十张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月第四节蛋白质的理化性质The Physical and Chemical Characters of Protein第八十一张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月一、蛋白质具有两性电离的性质蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外，氨基酸残基侧链中某些基团，在一定的溶液pH条件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。 当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质

31、解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。蛋白质的等电点( isoelectric point, pI)第八十二张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月二、蛋白质具有胶体性质蛋白质属于生物大分子之一，分子量可自1万至100万之巨，其分子的直径可达1100nm，为胶粒范围之内。颗粒表面电荷水化膜蛋白质胶体稳定的因素:第八十三张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月+带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质水化膜+带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质不稳定的蛋白质颗粒酸碱酸碱酸碱脱水作用脱水作用脱水作用溶液中蛋白质的聚沉第八十四张，PPT

32、共一百一十页，创作于2022年6月三、蛋白质空间结构破坏而引起变性在某些物理和化学因素作用下，其特定的空间构象被破坏，也即有序的空间结构变成无序的空间结构，从而导致其理化性质改变和生物活性的丧失。蛋白质的变性(denaturation)第八十五张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月造成变性的因素:如加热、乙醇等有机溶剂、强酸、强碱、重金属离子及生物碱试剂等 。 变性的本质:破坏非共价键和二硫键，不改变蛋白质的一级结构。第八十六张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月变性后特征: 生物活性丧失 溶解度下降 粘度增加 易被酶水解应用举例:临床医学上，变性因素常被应用来消毒及灭菌。此外,

33、防止蛋白质变性也是有效保存蛋白质制剂（如疫苗等）的必要条件。 第八十七张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，蛋白质仍可恢复或部分恢复其原有的构象和功能，称为复性(renaturation) 。第八十八张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月 天然状态，有催化活性 尿素、 -巯基乙醇 去除尿素、-巯基乙醇非折叠状态，无活性第八十九张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月在一定条件下，蛋白疏水侧链暴露在外，肽链融会相互缠绕继而聚集，因而从溶液中析出。变性的蛋白质易于沉淀，有时蛋白质发生沉淀，但并不变性。 蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固的凝

34、块，此凝块不易再溶于强酸和强碱中。 蛋白质沉淀蛋白质的凝固作用(protein coagulation)第九十张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月四、蛋白质在紫外光谱区有特征性吸收峰由于蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此在280nm波长处有特征性吸收峰。蛋白质的A/OD280与其浓度呈正比关系，因此可作蛋白质定量测定。第九十一张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应。 蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为双缩脲反应，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。五、应用蛋白质呈色反应可测定蛋白质溶液

35、含量茚三酮反应(ninhydrin reaction)双缩脲反应(biuret reaction)第九十二张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月第五节蛋白质的分离纯化与结构分析The Separation and Purification and Structure Analysis of Protein第九十三张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月一、透析及超滤法可去除蛋白质溶液中的小分子化合物应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜，达到浓缩蛋白质溶液的目的。透析(dialysis)超滤法利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。第九十四张，PPT共一百

36、一十页，创作于2022年6月二、丙酮沉淀、盐析及免疫沉淀是常用的蛋白质沉淀方法使用丙酮沉淀时，必须在04低温下进行，丙酮用量一般10倍于蛋白质溶液体积。蛋白质被丙酮沉淀后，应立即分离。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。 盐析(salt precipitation)是将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。 第九十五张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月免疫沉淀法：将某一纯化蛋白质免疫动物可获得抗该蛋白的特异抗体。利用特异抗体识别相应的抗原蛋白，并形成抗原抗体复合物的性质，可从蛋白质混合溶液中分离获得抗原蛋白。 第九十六张，PPT共一百

37、一十页，创作于2022年6月三、利用荷电性质可用电泳法将蛋白质分离蛋白质在高于或低于其pI的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。这种通过蛋白质在电场中泳动而达到分离各种蛋白质的技术, 称为电泳(elctrophoresis) 。根据支撑物的不同，可分为薄膜电泳、凝胶电泳等。 第九十七张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于蛋白质分子量的测定。等电聚焦电泳，通过蛋白质等电点的差异而分离蛋白质的电泳方法。双向凝胶电泳是蛋白质组学研究的重要技术。几种重要的蛋白质电泳:第九十八张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月四、应用相分配或亲和原理可将蛋白质进行层析分离待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相）时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等，使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配，并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的。层析(chromatography)分离蛋白质的原理第九十九张，PPT共一百一十页，创作于2022年6月离子交换层析：利用