医学毕业论文-天麻牛膝胶囊制剂提取工艺改进

1、本 科 生 毕 业 论 文论文题目：天麻牛膝胶囊制剂提取工艺改进学 校：徐州医学院院 部：药学院专 业：药学学 号：061611031姓 名：徐华业指导教师：林奇泗 赵子明实习单位：徐州医学院药学院论文工作时间：2021年12 月 至 2021 年5 月目 录 TOC o 1-4 h z u HYPERLINK l _Toc264899279 摘 要 PAGEREF _Toc264899279 h 1 HYPERLINK l _Toc264899280 Abstract PAGEREF _Toc264899280 h 2 HYPERLINK l _Toc264899281 1 仪器和材料 PA

2、GEREF _Toc264899281 h 5 HYPERLINK l _Toc264899282 1.1 仪 器 PAGEREF _Toc264899282 h 5 HYPERLINK l _Toc264899283 1.2 材 料 PAGEREF _Toc264899283 h 5 HYPERLINK l _Toc264899284 2 方法与结果 PAGEREF _Toc264899284 h 5 HYPERLINK l _Toc264899285 2.1 处 方 PAGEREF _Toc264899285 h 6 HYPERLINK l _Toc264899286 2.2 醇提工艺优选

3、 PAGEREF _Toc264899286 h 6 HYPERLINK l _Toc264899287 2.2.1 正交试验设计 PAGEREF _Toc264899287 h 6 HYPERLINK l _Toc264899288 2.2.2 样品制备 PAGEREF _Toc264899288 h 6 HYPERLINK l _Toc264899289 齐墩果酸含量测定 PAGEREF _Toc264899289 h 6 HYPERLINK l _Toc264899290 2.2.3.1 色谱条件 PAGEREF _Toc264899290 h 6 HYPERLINK l _Toc264

4、899291 对照品溶液的配制 PAGEREF _Toc264899291 h 6 HYPERLINK l _Toc264899292 供试品溶液的配制 PAGEREF _Toc264899292 h 6 HYPERLINK l _Toc264899293 方法学特异性考察 PAGEREF _Toc264899293 h 7 HYPERLINK l _Toc264899294 2.2.3.5 线性关系考察 PAGEREF _Toc264899294 h 7 HYPERLINK l _Toc264899295 精密度考察 PAGEREF _Toc264899295 h 8 HYPERLINK l

5、 _Toc264899296 2.2.3.7 样品含量测定 PAGEREF _Toc264899296 h 8 HYPERLINK l _Toc264899297 2.2.4 黄芪甲苷含量测定 PAGEREF _Toc264899297 h 8 HYPERLINK l _Toc264899298 2.2.4.1 色谱条件 PAGEREF _Toc264899298 h 9 HYPERLINK l _Toc264899299 2.2.4.2 对照品溶液的配制 PAGEREF _Toc264899299 h 9 HYPERLINK l _Toc264899300 2.2.4.3 供试品溶液的配制

6、PAGEREF _Toc264899300 h 9 HYPERLINK l _Toc264899301 2.2.4.4 方法学特异性考察 PAGEREF _Toc264899301 h 9 HYPERLINK l _Toc264899302 线性关系考察 PAGEREF _Toc264899302 h 9 HYPERLINK l _Toc264899303 精密度考察 PAGEREF _Toc264899303 h 10 HYPERLINK l _Toc264899304 2.2.4.7 样品含量测定 PAGEREF _Toc264899304 h 10 HYPERLINK l _Toc264

7、899305 正交实验结果与分析 PAGEREF _Toc264899305 h 11 HYPERLINK l _Toc264899306 2.3 水提工艺优选 PAGEREF _Toc264899306 h 13 HYPERLINK l _Toc264899307 2.3.1 正交试验设计 PAGEREF _Toc264899307 h 13 HYPERLINK l _Toc264899308 2.3.2 样品制备 PAGEREF _Toc264899308 h 13 HYPERLINK l _Toc264899309 2.3.3 出膏率测定 PAGEREF _Toc264899309 h

8、13 HYPERLINK l _Toc264899310 2.3.4 苯酚-硫酸法测总糖含量 PAGEREF _Toc264899310 h 14 HYPERLINK l _Toc264899311 2.3.4.1 苯酚-硫酸法原理 PAGEREF _Toc264899311 h 14 HYPERLINK l _Toc264899312 2.3.4.2 标准品溶液配制 PAGEREF _Toc264899312 h 14 HYPERLINK l _Toc264899313 2.3.4.3 苯酚溶液配制 PAGEREF _Toc264899313 h 14 HYPERLINK l _Toc264

9、899314 2.3.4.4 标准曲线绘制与线性关系考察 PAGEREF _Toc264899314 h 14 HYPERLINK l _Toc264899315 2.3.4.5 粗多糖制备 PAGEREF _Toc264899315 h 15 HYPERLINK l _Toc264899316 2.3.4.6 供试品溶液制备 PAGEREF _Toc264899316 h 15 HYPERLINK l _Toc264899317 2.3.4.7 供试品溶液总糖含量测定 PAGEREF _Toc264899317 h 15 HYPERLINK l _Toc264899318 正交实验结果与分析

10、 PAGEREF _Toc264899318 h 16 HYPERLINK l _Toc264899319 3 讨 论 PAGEREF _Toc264899319 h 18 HYPERLINK l _Toc264899320 3.1 预实验工艺改进 PAGEREF _Toc264899320 h 18 HYPERLINK l _Toc264899321 3.1.1 水提醇沉法改为煎煮法 PAGEREF _Toc264899321 h 18 HYPERLINK l _Toc264899322 3.1.2 煎煮法改为醇提水提法 PAGEREF _Toc264899322 h 18 HYPERLIN

11、K l _Toc264899323 3.1.3 粉末入药讨论 PAGEREF _Toc264899323 h 19 HYPERLINK l _Toc264899324 3.2 苯酚处置方法 PAGEREF _Toc264899324 h 19 HYPERLINK l _Toc264899325 3.3 Sevage 法 PAGEREF _Toc264899325 h 19 HYPERLINK l _Toc264899326 4 结 论 PAGEREF _Toc264899326 h 19 HYPERLINK l _Toc264899327 参考文献 PAGEREF _Toc264899327

12、h 20 HYPERLINK l _Toc264899328 致 谢 PAGEREF _Toc264899328 h 21天麻牛膝胶囊制剂提取工艺改进 实 习 生： 徐华业 061611031 药学院药学专业指导教师： 林奇泗 徐州医学院药学院 赵子明 徐州医学院药学院摘 要目的：通过改进传统验方天麻牛膝胶囊的制剂工艺，使其更加适合于临床应用。方法：分别以醇提干膏中的黄芪甲苷、齐墩果酸的含量为指标，采用高效液相色谱法，通过L9(34)正交设计试验，优选醇提工艺；分别以出膏率、总糖含量为指标，通过L9(34)正交设计试验，优选水提工艺；结果：最正确醇提工艺为：70%的乙醇浸渍12 h，用10倍体

13、积的70%乙醇以2 ml/min的流速渗漉。最正确水提工艺为：煎煮3次，每次10倍体积的水煎煮1h。结论： 经正交设计优化后，制备工艺切实可行，适于工业化生产。关键词：天麻牛膝胶囊；工艺改进；正交设计Extraction process improvement of A. bidentata gastrodia CapsuleStudent：XU Hua-ye (061611031) Pharmacy speciality, Xuzhou Medical CollegeTutor： LIN Qi-si School of Pharmacy，Xuzhou Medical College ZHAO

14、 Zi-ming School of Pharmacy，Xuzhou Medical CollegeAbstractObjective: Through improvement of the preparation process of traditional proved prescription A. bidentata gastrodia Capsule, make it more appropriate in clinical application. Methods: Ethanolic dry extract in each astragaloside, oleanolic aci

15、d content as the index, using HPLC, through L9 (34) orthogonal design, optimizing ethanol-extraction process; With a cream rate, total sugar content for index, through L9 (34) orthogonal test, optimizing water extraction process. Results: The best ethanol-extraction process of as, with 70% ethanol s

16、oaked 12h, with 10 times the volume of 70% ethyl alcohol ,Seep by 2 ml/min flow rate. Water extraction process for the best, 10 times the amount of water, boiled three times, 10 times the volume of water to boil 1h each time. Conclusion: Optimized by orthogonal design, preparation practicable, suita

17、ble for industrial production.Keywords: A. bidentata gastrodia capsule; Process improvement ;the orthogonal design重症肌无力(Myasthemina Gravis,MG) 全名“获得性自身免疫性重症肌无力，是一种主要由乙酰胆碱受体抗体引起的神经肌肉连接处传递障碍的一种自身免疫性疾病。发病率为 8/10 万，并呈逐年上升趋势。其临床表现为受累肌肉极易疲劳、活动后加重、休息后减轻、晨轻暮重的随意肌无力。假设诊疗不够及时，那么会使病人丧失劳动能力，重那么危及生命1。现代医学治疗该病主要以

18、胸腺摘除、胆碱酯酶抑制剂、糖皮质激素为主，但其副反响多、高依赖性、高复发率等弊病，在一定程度上限制了上述手段的应用，增加了患者的痛苦1。天麻牛膝胶囊系以天麻和牛膝为君药，辅以黄芪、杜仲等七味中药，经过科学加工而成的复方制剂。作为治疗重症肌无力的中药制剂，天麻牛膝胶囊在治疗此病上取得较好的近期和远期疗效,且无明显毒副作用。天麻Gastrodia elata Blume)又名赤箭芝、合离草、白龙皮等，为兰科植物天麻的枯燥块茎，是一种名贵中草药，有较高的药用价值，其主要活性成分是天麻素(Gastrodin)。具有平肝熄风、祛风定惊的功能，临床上主要用于平肝镇痉，主治头晕目眩、肢体麻木、小儿惊风、癫痫

19、抽搐、高血压、耳源性晕眩等症2。牛膝Radix Achyranthis Bidentatae又名百倍、怀牛膝，为苋科植物牛膝的枯燥根。其有效成分为总皂苷、总甾体、总生物碱，具有补肝肾、强筋骨、逐瘀通经、引血下行的功能，临床上主治腰膝酸痛、筋骨无力、经闭徵瘕、肝阳眩晕等症2。黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bunge又名黄耆，为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的枯燥根。?神农本草经?将其列为上品。其有效成分为黄酮类及黄芪皂甙类。具有补气固表、利水退肿、托毒排脓、生肌等成效。临床上主治气虚乏力、表虚自汗、气虚水肿、痈疽难溃、久溃不敛、内热消渴等症2。杜仲Eucomm

20、ia ulmoides Oliv.又名杜仲、丝棉皮、棉树皮。为杜仲科植物杜仲的枯燥树皮。?神农本草经?将其列为上品。其有效成分为环烯醚萜类 杜仲胶木脂素类及苯丙素类等。具有补肝肾、强筋骨、安胎等成效。临床上用于肾虚腰痛、筋骨无力、胎动不安、高血压等症2。鉴于其主要成分有许多相同之处，那么结合使用更能全面增进人体健康。因此天麻牛膝胶囊适合作为重症肌无力、进行性肌营养不良等肌肉神经系统疾病人群首选营养药品。传统工艺的局限性：全药材全粗粉制备而成，但是这样使得服药量大，从而给患者带来不便，为此，本研究在原有的工艺及研究根底上加以改进，重新确定其制备工艺。本实验的目标：将处方中的几味药材通过现代工艺进

21、行提取精制，减少服用的剂量，明确质量标准。技术路线为：采用醇提水提工艺精制牛膝、黄芪等几味药材，通过正交试验，以提取物中的齐墩果酸、黄芪甲苷、总糖、干浸膏的含量为指标，对该制剂的改进工艺进行研究。以期改善患者的服药量问题，增进药物疗效，从而有利于药品的推广和临床应用。1 仪器和材料 仪 器 Shimadzu LC-10A高效液相色谱仪日本岛津制作所，包括SCL-10Avp 系统控制器，SPD-M20A 二极管阵列检测器，LC-10ADvp两元泵，SIL-20A自动进样器，FCV-10Alvp四元低压梯度洗脱系统，DGU-20As在线脱气机，岛津Lcsolution 色谱数据工作站；5417R型

22、台式高速冷冻离心机德国Eppendorf公司；Millipore Direct-QTMS超纯水机美国Millipore公司；752N型紫外可见分光光度计上海精密科学仪器；RE52C型旋转蒸发仪上海亚荣生化科技，B-260型数显恒温水浴锅上海亚荣生化科技；高速中药粉碎机浙江省兰溪市伟能达电器；FA1004型电子天平上海精科天平；DZF-6020型真空枯燥箱上海三发科学仪器；KQ-200KDE型高功率数控超声波清洗器上海科导超声仪器；DZTW型调温电热套北京市永光明医疗仪器厂；XW-80A型微型漩涡混合仪上海沪西分析仪器厂。1.2 材 料黄芪批号：090801牛膝批号：090501、杜仲批号：09

23、0701、麦冬批号：090901、胆南星批号：091101、天麻批号：100105、僵蚕批号：100105、蜈蚣批号：091222、全蝎批号：091016均购自徐州彭祖中药饮片。经鉴定：黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus-membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao的枯燥根；牛膝为苋科植物牛膝Achyranthes bidentata Bl的枯燥根。黄芪甲苷对照品批号：20211020，齐墩果酸对照品批号：20210910均购自四川维克奇生物科技。葡萄糖对照品批号：20211215购自汕头市西陇化工厂。甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂

24、均为分析纯。2 方法与结果2.1 处 方天麻90 g，黄芪60 g，牛膝30 g，杜仲炭45 g，麦冬45 g，胆星30 g，僵蚕45 g，全蝎45 g，蜈蚣12g。2.2 醇提工艺优选2.2.1 正交试验设计以齐墩果酸、黄芪甲苷的含量为指标，考察醇提法中的浸泡时间A、 乙醇浓度B)、乙醇倍数C和渗漉速度D四个因素，每个因素优选3个水平，按照L934正交表见表8)进行醇提，醇提因素水平见表1。表1 醇提因素水平表水 平ABCD浸泡时间h乙醇浓度乙醇倍数流速ml/min1650812127010232490123 样品制备称取黄芪粗粉10 g、牛膝粗粉5 g过20目筛，置于渗漉筒中，按正交设计表

25、中的要求进行渗漉，收集渗漉液药渣备用，60 旋转蒸发浓缩至20 ml，然后80 水浴蒸干，得干浸膏。2.2.3齐墩果酸含量测定.1 色谱条件 3 色谱柱：ZORBAX SB- mm 150 mm, 5 um)柱；流动相：甲醇：水87:13；流速：1 ml/min；柱温：30 ；检测波长：210 nm；进样量：20 l。.2对照品溶液的配制 mg，置于5 ml mg/ml。.3供试品溶液的配制取醇提干 g，置25 ml烧杯中以90%乙醇10 ml超声溶解，置50 ml圆底烧瓶中。参加浓盐酸1 ml，加热回流1 h，放冷，参加10 ml水，蒸去局部乙醇，以石油醚萃取3次，每次20 ml，合并三次石

26、油醚层并蒸干，残渣加1 ml甲醇超声溶解，转移至1.5 ml EP离心管中，加甲醇补足至1 ml。摇匀，离心10 min，取上清液100 l，加甲醇稀释10倍作为供试品溶液4。.4方法学特异性考察A齐墩果酸齐墩果酸B 图1 齐墩果酸HPLC色谱图A 对照品；B 供试品；.5 线性关系考察取齐墩果酸对照品溶液，加甲醇稀释成含齐墩果酸 g/ml，再按一定比例稀释成不同浓度的溶液，注入液相色谱仪，测定峰面积，以浓度Cg/ml 对峰面积A进行回归，得回归方程，齐墩果酸：A=+19565r=，结果说明齐墩果酸在 g/ml范围内与峰面积呈良好线性关系，结果见表2。表2 齐墩果酸线性关系工程浓度g/ml峰面

27、积A回归方程相关系数r线性范围g/ml 齐墩果酸(n=7)24214-1956510.7467786162542329032414701633666856056.6精密度考察取“.5项下对照品3个不同浓度，分别在日内一日重复5次和日间4日之内进行HPLC分析，结果说明，日内、日间精密度结果均符合要求，见表3。表3 齐墩果酸含量测定精密度实验结果组分浓度日内n = 5日间n = 4g/mlRSD%RSD%齐墩果酸.7 样品含量测定按“.3项下供试品溶液制备方法，同法制备9批样品溶液,测定各样品中齐墩果酸的峰面积,计算每个样品中的齐墩果酸总量。结果见表4。表4 齐墩果酸样品含量测定数据表工程编号总

28、重g称重g峰面积A浓度g/ml单位含量mg/g总含量mg齐墩果酸n = 91111122213332123223123123132321333211988545133082997120504026585224311546214916963.184.282345112.2.4 黄芪甲苷含量测定.1 色谱条件 5 色谱柱：Kromawsil C18 mm 250 mm , 5 um)柱；流动相：乙腈-水31:69；流速：1 ml/min；柱温：35 ；检测波长：200 nm；进样量：20 l。.2 对照品溶液的配制精密称取对照品 mg，置于2 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液黄

29、芪甲苷： mg/ml。.3 供试品溶液的配制6取醇提干浸膏，精密称取0.5 g，置25 ml烧杯中以60%乙醇10 ml超声溶解，参加乙醚萃取3次，每次20 ml，去乙醚层，水层用水饱和正丁醇萃取3次，每次20 ml，合并正丁醇层，参加氨水洗涤2次，每次20 ml，弃去氨水洗液，正丁醇层再以纯水萃取2次，每次20 ml，最终取正丁醇层，旋转蒸发蒸干，残渣加1 ml 流动相超声溶解，转移至ml EP离心管中，加流动相补足至1 ml，摇匀，离心30 min，取上清液150 ul作为供试品溶液。.4 方法学特异性考察A黄芪甲苷B黄芪甲苷图2 黄芪甲苷HPLC色谱图A 对照品；B 供试品.5线性关系考

30、察取黄芪甲苷对照品溶液，加流动相稀释成含黄芪甲苷 g/ml，再按一定比例稀释成不同浓度的溶液，注入液相色谱仪，测定峰面积，以浓度Cg/ml 对峰面积A 进行回归处理，得回归方程，黄芪甲苷：A = 1294.6C - 13027r=9，结果说明黄芪甲苷在 g/ml范围内与峰面积呈良好线性关系，结果见表5。表5 黄芪甲苷线性关系工程浓度g/ml峰面积A回归方程相关系数r线性范围g/ml 黄芪甲苷(n=7)15890-1302720.5 410390885112682274125598205251367517802.6精密度考察取“.5项下对照品3个不同浓度，分别在日内一日重复5次和日间4日之内进行

31、HPLC分析，结果说明，日内、日间精密度结果均符合要求，见表6。表6 黄芪甲苷含量测定精密度实验结果组分浓度日内n = 5日间n = 4g/mlRSD%RSD%黄芪甲苷0.26.7 样品含量测定按“.3项下供试品溶液制备方法，同法制备9批样品溶液，并测定各样品中黄芪甲苷的峰面积，并计算每个样品中黄芪甲苷总量，结果见表7。表7 黄芪甲苷样品含量测定数据表工程编号总重g称重g峰面积A浓度g/ml单位含量mg/g总含量mg11115101712222971661333166132黄芪甲苷212358238(n=9)2231236442312159983313231009321333806332129

32、29262.2.5正交实验结果与分析正交试验结果见表8，方差分析结果见表9、表10。由表8直观分析可知，对于齐墩果酸，有A2B2C2D1为最正确条件，对于黄芪甲苷，有A1B2C2D2为最正确条件。由表9方差分析可知，各因素对齐墩果酸结果的影响为：乙醇浓度B乙醇倍数C浸泡时间A 渗漉速度D，其中，因素B对实验结果呈显著性影响P渗漉速度D浸泡时间A 乙醇浓度B，其中，因素C对实验结果呈显著性影响P。考虑到因素A无统计学差异，并根据生产实际需要，选用A2，即为A2B2C2D2。综上，醇提工艺最正确组合是A2B2C2D2，即按处方量取黄芪、牛膝粗粉，以70%的乙醇浸泡12h，以10倍量进行渗漉，渗漉速

33、度为2ml/min。表8 醇提正交试验表试验号因 素齐墩果酸含量(mg)黄芪甲苷含量(mg)ABCD111112122231333421235223162312731328321393321齐墩果酸黄芪甲苷RR表9 齐墩果酸含量的方差分析方差来源离差平方和自由度均方F值PA2B2C2D2误差8表10 黄芪甲苷含量的方差分析方差来源离差平方和自由度均方F值PA2B2C2D2误差82.3 水提工艺优选2.3.1 正交试验设计以出膏率及总糖百分含量为考察指标，考察煎煮法中的加水量E、煎煮时间F)和煎煮次数G三个因素，每个因素优选3个水平，按照L934正交表见表16进行煎煮，水提因素水平见表11。表1

34、1 水提因素水平表水 平EFG加水量ml煎煮次数煎煮时间18121021312322 样品制备按处方量的一半，称取杜仲炭、麦冬两味饮片，并参加醇提药渣，共得9份，然后置于大圆底烧瓶中，按正交设计表中的要求分别参加水，采用加热回流的方法，加热至微沸时开始计时，煎煮次数，煎煮时间按正交试验表进行。煎好后将煎煮液浓缩至约100ml，浓缩液置于已枯燥至恒重的蒸发皿中，80水浴浓缩至干，即得水提干浸膏。2.3.3 出膏率测定将水提干浸膏从蒸发皿中取出，称重，计算出膏率。结果见表12。 表12 干浸膏重数据试验号111122133212223231313321332干膏重g出膏率%12212623注：出膏

35、率%=干膏重/30g生药1002.3.4 苯酚-硫酸法测总糖含量.1 苯酚-硫酸法原理根据多糖及其衍生物在浓硫酸水合产生的高温下迅速水解, 生成单糖; 单糖在强酸条件下与苯酚反响生成橙黄色衍生物, 此衍生物的溶液在490nm 波长处有特征吸收峰, 在一定浓度范围内, 该衍生物的吸收值与糖的浓度呈线性关系, 由此可通过比色法测定其含量。.2 标准品溶液配制精密称取105枯燥至恒重的葡萄糖对照品25.8mg，加适量水溶解，转移至25mlml的标准葡萄糖溶液备用。.3 苯酚溶液配制取苯酚5g，加适量水溶解，转移至100ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得5% 苯酚溶液。每次试验所用5% 苯酚

36、溶液须当场配制。.4 标准曲线绘制与线性关系考察ml置10ml容量瓶中，参加蒸馏水至刻度，摇匀。精密吸取各溶液2ml于10ml具塞刻度试管中，分别参加5%苯酚溶液1ml，摇匀，迅速参加5ml浓硫酸溶液，置冰水浴冷却，定容。置沸水浴加热15min，然后冷水浴冷却至室温，每个浓度平行做三个。以蒸馏水同法做空白对照7,8。在波长490nm处测定其吸光度并绘制标准曲线，以浓度Cg/ml 对吸光度A 进行回归处理，得回归方程： A = 0295 g/ml范围内与吸光度呈良好线性关系。结果见表13。表13 标准曲线数据浓度g/mlA1A2A3.5 粗多糖制备称取干浸膏 g，加20 ml水超声溶解，随后加4

37、0 ml无水乙醇醇沉，过滤，得滤渣，滤渣置50 烘箱烘干，即得粗多糖9，所得粗多糖质量及其在干浸膏中的百分含量见表14。表14 粗多糖数据试验号111122133212223231313321332粗多糖g0.709粗多糖%.6 供试品溶液制备精密称取粗 g，加5 ml水超声溶解，随后用sevage法10除去蛋白，于80 水浴挥去有机相，最后移入移入10 ml具塞刻度试管，补足5 ml，作为储藏液。精密量取100 l储藏液置100 ml容量瓶中，定容，作为供试品溶液。.7 供试品溶液总糖含量测定精密量取供试品溶液2 ml, 置10 ml具塞试管中，参加5%苯酚溶液1 ml，摇匀，迅速参加5 m

38、l浓硫酸溶液，置冰水浴冷却，定容。置沸水浴加热15 min，然后置冷水浴中冷却至室温，每组样品溶液平行做三个。以蒸馏水同法做空白对照。在波长490 nm处测定其吸光度，并计算出样品总糖百分含量以葡萄糖量计算，结果见表15。表15 供试品溶液吸光度数据试验号粗多糖称重wgA1A2A3Cg/ml总糖量%111122133212223231313321332注：总糖量%= 11000：稀释倍数2V：储藏液5ml3W：干浸膏总重，见表104粗多糖%：见表122.3.5正交实验结果与分析正交试验结果见表16,方差分析结果见表17、表18。由表16直观分析可知,对于总糖量，有E3F3G3为最正确条件，对于

39、出膏率，有E2F3G3为最正确条件。由表17、18方差分析可知，各因素对总糖量及出膏率结果影响均为：煎煮次数F煎煮时间G加水量E，其中，因素F对实验结果呈显著性影响P。而因素E及因素G那么均无统计学差异，综合各因素考虑并根据生产实际需要，确定最正确提取工艺为：E2F3G2，即按处方量取杜仲炭、麦冬两味饮片，与醇提药渣一起，加10倍量水，煎煮3次，每次1 h。表16 水提正交试验表试验号因素总糖量%出膏率%EFG空白列H111112122231333421235223162312731328321393321总糖量R出膏率R表17 总糖量的方差分析方差来源离差平方和自由度均方F值PE2F2G2H

40、20.773误差8表18 出膏率的方差分析方差来源离差平方和自由度均方F值PE2F2G2H2误差8综合分析可知，最正确制备工艺为A2B2C2D2E2F3G2：1醇提工艺：以70%的乙醇浸渍12 h，用10倍体积的乙醇以2ml/min的流速渗漉。2水提工艺：煎煮3次，每次用10倍体积的水煎煮1 h。3 讨 论3.1 预实验工艺改进 水提醇沉法改为煎煮法水提醇沉法是提取中药材的常规方法，然而在长期的应用中，也发现存在不少问题：第一，用醇沉除杂，常常影响药效。一方面是一些有效成分如多糖、氨基酸等不溶于醇而被除去；另一方面，生物碱、苷、黄酮之类醇溶性成分，本来提取不完全，除杂时又受加醇操作的影响而不同

41、程度的被裹附，致使含量明显降低。第二，生产本钱高。由于在醇沉中大量使用酒精，其回收损失至少在30%以上，且耗能耗物，必须购置专门设备，也大大增加了生产本钱。第三，生产周期长。一般生产周期都在4-5天以上。另外，口服固体制剂也不用水提醇沉法。因为醇沉时将多糖等除去，醇液回收乙醇浓缩后又加几倍量的淀粉、糊精等辅料方能成型。这样既浪费了资源，又大大提高了本钱。因此，为了最大地保存原药材中的有效成分，降低生产本钱和生产周期，采用传统的煎煮法而不用醇沉除杂。 煎煮法改为醇提水提法煎煮法黄芪、牛膝、杜仲、麦冬、天麻，取水提液10ml按中国药典2005版中齐墩果酸供试品处理方法处理，同法做无牛膝的阴性对照品

42、。然后做齐墩果酸的薄层鉴别，展开剂为氯仿-甲醇40:1，显色剂为10%硫酸乙醇溶液，经检识，在与标准品斑点相同位置上，供试品与阴性对照均无斑点显示，再辅之以HPLC检识，在对照品峰位置上，并不存在相应的供试品峰。经分析，可能齐墩果酸水溶性较差。后改用醇提法试验，TLC结果良好，在与标准品斑点相同位置上，存在供试品斑点。而对于黄芪，展开剂为氯仿-甲醇-水13:7:2。无论水提或醇提，TLC结果均良好，在与黄芪甲苷标准品斑点相同位置上，存在供试品斑点。而且醇提斑点比水提斑点明显。因此，在正式试验中，采用醇提水提法对制剂工艺进行研究，即对黄芪、牛膝采用醇提，而杜仲、麦冬及醇提药渣那么用水提。 粉末入药讨论作为主药的天麻及其它几味药僵蚕、蜈蚣、全蝎、胆星那么是粉末直接入药，这样做，可以防止水提的糊化，而最大限度地保存了药物的活性成分，最大程度的保存其药效。3.2 苯酚处置方法苯酚容易氧化，见光或空气逐渐变成淡红色，因此测定时要尽可能避光和操作迅速。苯酚在水中的溶解度较小，故需限制苯酚用量本研究采用5%的用量，否那么会生成乳白色沉淀或针状结晶而干扰测定。3.3 Sevage 法利用蛋白质在三氯乙烷等有机溶剂中变性的特点，将提取液与 Sevage试剂氯仿:正丁醇=5:1V/V5:1 混合，振荡，离心，变性后的蛋白质介于提取液与 Sevag