细胞培养心得

1、目录293 和 293T293T细胞的培养心得293T细胞的培养与传代Jurcat细胞的传代悬浮细胞培养方法Jurcat细胞培养方法细胞名称293 和 293T种属人组织来源293细胞是转染腺病毒 E1A基因的人肾上皮细胞系，293T细胞由293细胞派生，同时表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。用Ca3(PO4)2转染效率可高达50%蛋白表达水平高，转染后 2-3天用碱性磷酸酶分析可较容易地检测到表达的蛋 白。瞬时转染293T细胞是过表达蛋白并获得细胞内及细胞外(分泌的或膜)蛋白的便捷方 式。形态特点上皮细胞致瘤性+产物或抗原大T抗原亚三倍体人细胞系。染色体众

2、数为64, 30%勺细月有64条染色体。4.2%的细胞染色体数目更多。多数细胞 der(1)t(1;15) (q42;q13), der(19)t(3;19) (q12;q13), der(12)t(8;12)(q22;p13),还有四条标记染色体，有的细胞另有 5条标记染色体。der(1)与M8 (or Xq+)常 常成对出现。N17与N22各有四条。值得注意的是多数细胞有三条X染色体，两条Xq+, 一条 Xp+o生长特性粘附/贴壁细胞文献评价293细胞系是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒(Ad 5) DNA的永生化细胞。RF32725表达转染的腺病毒 5的基因。RF32725早期报道认为此细胞

3、含有 Ad 5基因组左端和右端RF32764,现已清楚仅含有左端序列。RF50113此细胞系人腺病毒滴度高。室温不贴壁,37 c几日后重新贴壁。表达由整合素beta-1亚基与玻基结合素受体alpha-v 亚基组成的玻基结合素细胞表面受体.RF33793The Ad5 insert was cloned and sequenced, and it was determined that a colinear seqment from nts 1 to 4344 is integrated into chromosome 19 (19q13.2).传代293:弃培养基，含0.25%胰酶，0.03%

4、 EDTA消化液洗涤，弃去，加1-2ml消化液室温或37c 消化。加入新鲜培养基，吸出，分到新培养皿中。一传二至一传四。293T:生长快，通常倍增时间不到一天。每34天1: 10至1: 20稀释，5% CO2条件下培养。细胞贴壁疏松，可只用EDT内肖化，不要用胰蛋白酶过度消化。培养基更换每2-3天一次冻存液95%t养基；5%,DMSO culture medium 95%; DMSO, 5% ;培养条件ATCCt养基：90%勺MEM Eagle,加入2mM L合氨酰胺，1.5g/L碳酸氢钠，0.1 mM必需氨基酸，1.0 mM丙酮酸钠；10%ffl热灭活的马血清37 c培养293T细胞的培养心

5、得点击次数：12 发表于：2008-08-24 23:25转载请注明来自丁香园来源：丁香园293T细胞差点被我养死，幸好我又将它起死回生，一点心得。细胞传代：当细胞在细胞培养瓶内长满达到80 %时就要传代，一传二，24小时后再传代。48小时传就不好了，如果在 24小时后细胞没有长到 80%,应该换新的培养基，不 然，培养基变黄，细胞脱落。细胞消化：将细胞培养瓶竖立放置，吸走培养基，如果培养基中的脱落细胞较多，说 明细胞现在很容易脱落，只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%),来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落，加入 10mlMEM(10%杭州四季青胎牛血清)，混匀，不能吹打，分装 2瓶，

6、如果细胞没长满就脱落，则只需加入5mlMEM ,不分装。如果培养瓶中的细胞贴壁较牢固，培养基上清没有细胞脱落碎片，且细胞长满达到80 %以上，吸走培养基，加入 5ml的PBS+EDTA(0.02%),迅速轻微晃动，竖立培养瓶，吸走，加入 1ml0.05% 胰酶，37度消化不超过3min，细胞完全消化脱壁，取出加入10ml培养基轻微吸打混匀，分装2瓶。培养基：MEM(GIBCO)+10% 胎牛血清(杭州四季青)十双抗293T细胞的培养与传代点击次数：24 发表于：2008-08-25 20:47转载请注明来自丁香园来源：丁香园293细胞是转染腺病毒 E1A基因的人肾上皮细胞系，293T细胞由29

7、3细胞派生,同时表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。大家注意293T细胞的一个重要特性：室温下不贴壁，但37度时可以重新贴壁。我的293T细胞时老板从美国千里迢迢带回来的，当时正是冬天，老板把瓶子放在大 衣口袋里在飞机上折腾了两天，等拿到实验室已经看不到贴壁的细胞了。我以为在外面这么久细胞可能已经冻死了，肯定没救了。但本着死马当活马医的想法在培养箱里放了一个星期，还是不见起色。正准备丢的时 候，一次上网查 293T细胞的特性时看到：室温下不贴壁，但 37度时可以重新贴壁如获至宝，赶紧跑到实验室在显微镜下仔细寻找，竟然真的发现少量贴壁细胞，后来 经过我们的细心呵

8、护， 这些细胞终于活了下来。通过这个也让我明白了一个道理，不到最后时刻不要轻言放弃。言规正传，这个细胞我按照老板在美国的习惯处理：用90 %的DMEM + 10 %的胎牛血清培养 37度培养箱。这个细胞增殖很快，大概 2-3天就要传代。需要提醒的是：细胞贴壁很疏松，换液 时注意不要用力摇晃培养瓶，否则有可能会把细胞摇下来。细胞 容易消化，我用0.02 g/L 蛋白酶E消化半分钟就可以了。要注意的是：消化下 来的细胞容易成团， 要吹打很久才能把细胞打开。 否则传代后细胞会成团生长，不均匀，影 响试验结果。Jurkat细胞（人外周血白血病T细胞）的传代点击次数：46 发表于：2008-08-24

9、23:07 转载请注明来自丁香园来源：丁香园Jurkat细胞（人外周血白血病 T细胞），是一种悬浮细胞。我的经验如下：1、培养液：RPMI1640 , 15 %小牛血清，2%Na2CO3 , 1%HEPES ,青霉素 100IU /1ml,庆大霉素 100IU/ml;2、培养条件：5%CO2 , 37度，30%湿度；3、细胞复苏：要快速将冻存管放入37度水中，不断轻轻摇晃，直到细胞完全溶解，加入10ml左右的培养液，8001000rpm , 10分钟离心，之后倒掉液体，加入新的培养基 就可以进行培养了；4、细胞培养：起初进行传代时由于细胞刚刚复苏，长得比较慢，所以可以34天传一代，传过两代后，

10、一般 23天传一代，每次传代后在倒置显微镜下观察细胞形态，在传 过几代合适的时候可以进行实验。5、细胞冻存：1000rpm离心后，弃去液体，加入含有15%DMSO的冻存液，按下列顺序降温：室温一4 c (20分钟一冰箱冷冻室(30分钟)一低温冰存1( 80 C 1小时) 一液氮。6、我在做细胞培养时的一些小经验：(1)细胞培养箱在每使用 1个月最好用酒精擦洗一次，这样可以减少污染；(2)虽然说加样器放在紫外下照射会不准，但我们还是丢了一把 1ml的加样器在超净台，没有拿出来过，我想这样也许会减少污染；(3)小牛血清我们用的是国产的，所以在一开始的时候加了15 %的小牛血清，但细胞总是长不好，后

11、来摸索条件，把小牛血清的量调到了20%,细胞生长旺盛；(4) HEPES虽然贵点，但加上去后细胞会长的不错；(5)在超净台操作前要用 0.1 %的新洁尔灭或75%酒精擦手。悬浮细胞培养方法求心得点击次数：226 发表于：2008-08-03 19:17转载请注明来自丁香园来源：丁香园goingba网友的观点：悬浮细胞最好养，不用消化，关于几天离一次心，要看你的细胞生长状态了，我养过 血液肿瘤细胞，增值比较快。我一般是第二天半量换液(加等量培养基后一分二)，第三天 若长得比较满，就离心换液。若你不想每天都去管它， 你可以把细胞密度中的相对稀一点(不能太稀，太细了细胞不好好长)，可以 2-3天换一

12、次液(半量，不用离心)，这要看细胞状态，和你试验进度，若你急着用细胞，那就将细胞中密一点，天天换液，用胎牛血清，这样细胞会疯长的。要是比较娇气的细胞，象RPMI-8226 ,一定要用胎牛血清，2-3天半量换液， 依据细胞状态再离心换液，等细胞进入对数生长期了，养起来也就好养了。若是正常人T细胞，也要3-5天换一次液，最好 3天的时候加入些新培养基，我曾经有一次1周忘了换液（因为T细胞增殖很慢，或者说在体外不给刺激基本不增殖，所以培养基的颜色不发生 改变，但他也消耗营养），最后作流式发现细胞大部分凋亡和死亡了。有关jurkat的培养方法jurkat,就是1640 10%NBS ,养，没什么特殊要求。我是用培养皿在养jurkat ,换液的时候不想293那样方便，每次都要离心。但我听说离心多 了对细胞不好，请问可有什么好办法不用离心也能换液的？谢谢！建议你先看看细胞培养方面的书。里面对悬浮细胞怎么培养说得很清楚。一悬浮细胞换液当然要离心，只要注