植物病害诊断 第一章 绪论

1、植物病害诊断扬州大学园保学院Plant Disease Diagnosis课程安排理论部分 第1-8周实验部分 第3周开始，共8次序号章 名学 时 分 配讲授实验上机讨论习题其它小计1绪言442植物真菌病害诊断624303植物原核生物病害诊断2354植物病毒病害诊断2355植物线虫病害诊断1.512.56寄生性种子植物病害诊断0.511.5第一章 绪论扬州大学园保学院问题：产生植物病害的原因是什么？主要内容植物病害诊断的概念、意义植物病害诊断的程序、注意事项及要点侵染性病害非侵染性病害植物病害诊断技术 从症状等特征来判断其病因，确定病害种类。一、诊断 （diagnosis）第一节 植物病害诊断

2、的定义、意义及诊断程序二、诊断的意义1、及时准确的诊断，提出合适的防治措施控制病害，减少病害所造成的损失；2、如果诊断不当或失误(误诊)，就会贻误防治时机，造成更大损失。三、诊断的程序田间观察症状诊断病原鉴定确定病害从症状入手，全面检查，仔细分析，下结论要有余地。1、田间观察和病情调查1、田间观察和病情调查（1）病害病情：包括病害发生的普遍率、病情指数、反应型等。普遍率：调查的有病株（叶、果）数占调查总株（叶、果）数的百分比。即：普遍率（%）=病株（叶、果）数/调查总株（叶、果）数100%（代表病害发生的普遍程度。不能反映病害的严重度）1、田间观察和病情调查病情指数：反应病害的严重程度。 （各

3、级病株数级值）病情指数=100 总株数最高级值病害分级（图示）病害分级（文字叙述）1、田间观察和病情调查举例：由此计算：普遍率%=？；病情指数=？1、田间观察和病情调查（2）发病时期、寄主品种、受害部位、症状及地势、土壤、昆虫活动等环境条件；（3）田间栽培管理方面的差异（水肥、前茬作物、农药使用情况等）；（4）病田周围的环境（大气环境、工厂企业废水、废气的排放污染情况等）一般根据田间分布状况可区别两类病害：非侵染性病害和侵染性病害。（一）侵染性病害（病原生物侵染所致的病害）特征：病害有一个发生发展或传染的过程；在特定的品种或环境条件下，病害轻重不一；在病株的表面或内部可以发现其病原生物体的存在

4、(病征)，它们的症状也有一定的特征。(二)非侵染性病害（物理因素、化学因素、遗传因素等造成的病害）特征：没有逐步传染扩散的现象往往大面积同时发生同一症状的病害发病植物上无病征，也分离不到病原物 2、症状诊断 外部症状和内部症状：症状鉴别对病害的诊断意义重大。各种植物病害都有特异的症状。症状鉴别可用肉眼，也可借助扩大镜或显微镜检查。2、症状诊断观察症状发生的部位、形态、大小、气味、颜色、质地（软、干），有无病征及病征类型等外部症状特点；有的还可借助显微镜解剖观察内部症状，如病毒病，在寄主表皮细胞内有内含体存在；线虫病可看到线虫虫体。有些病害，在田间症状不明显，采集新鲜病害标本，带回室内保湿，待出

5、现病征后再鉴定。2、症状诊断 标本采集：（1）症状典型，有不同部位、不同阶段；（2）真菌病害应有子实体；（3）每种病害标本力求单纯；（4）各种标本应有一定份数。2、症状诊断（5）对病菌孢子容易分散的，一般用光滑的纸包好，带回；（6）水分多的、肉质的，放在塑料袋中，不能挤压；（7）适宜干制的，随时压制；（8）对于不认识寄主的，应采回寄主的花、叶、果实等，以便鉴定；（9）作好田间记录（记载内容：寄主名称、发病情况、环境条件，以及采集地点、日期、采集人等）。 2、症状诊断 标本制作：干燥和浸渍两种（1）干燥制作法：蜡叶标本。压前整形，用标本夹压好，并勤换纸。（2）浸渍制作法：一般果实和多汁的，用浸渍

6、法制作。2、症状诊断浸渍液的配方：A、普通防腐液：5%的福尔马林；B、保持绿色浸渍液：15g醋酸铜加1000ml50%的醋酸，用时稀释3倍。C、保持红色浸渍液：硼酸45g溶于2000ml水，加95%酒精280ml，取上清液。D、保持紫色或黑色浸渍液：福尔马林10ml，水175ml，饱和食盐水20ml。E、保持黄色或桔红色浸渍液：10%亚硫酸液。3、病原鉴定自然界中有许多病害，其病原不同，但症状相似；或病原相同，但是症状相异。（1）非侵染性病害的病原鉴定通常采用化学诊断法、人工诱发、化学治疗和指示植物鉴定法。3、病原鉴定A、化学诊断：尤其对营养元素的缺乏或过量，盐碱、有害气体、有毒气体，通过取样

7、化验结果与正常值比较，确定病原。B、人工诱发：对可疑病因，提供发病条件，如低温、药害、高温、人工强光照等，诱发相同症状的病害。C、化学治疗：对可疑病因给以满足，如怀疑缺素，给以该元素，观察症状是否恢复或减轻。D、指示植物：对木本植物可采用反应快的草本植物当指示植物确定病原。3、病原鉴定（2）侵染性病害的病原鉴定在排除次生物后，从病部表面或病组织挑片、切片（超薄切片）镜检，鉴定病原物形态，对常见的可鉴定出；或者进行分子生物学鉴定。对少见或新病害，必须进行柯赫氏证病（柯赫氏法则）后，才能确定病原物。3、病原鉴定（3）柯赫氏法则(Kochs Rules)：亦称柯赫氏假设（Kochs postulat

8、es）。Koch是德国医生，细菌学家。由于他最先分离出炭疽、结核病原菌而获得1905年诺贝尔医学生理学奖。他在研究人体和动物病害病原的基础上，于1882年提出证明某种微生物致病性的必要步骤，即柯赫氏法则。该法则不仅对人医、兽医起到巨大作用，对植物病害的研究也起到积极推动作用，现在仍在发挥着作用（当然并非完美无缺）。 3、病原鉴定柯赫氏法则（Kochs Rules）：微生物常与某种病害有联系，发生这种病害往往就有这种微生物的存在；这种微生物可以从病组织上分离得到纯培养，并且可以在各种培养基上研究它的性状；将纯培养微生物接种到相同品种的健株上，使其有发病的可能性，接种后出现的症状和原来病株症状相同

9、；从接种发病的植物上又能再分离到同一微生物。（1905年，Smith补充）通过上述四步，得到确实证据，即可确认该微生物即为某种病害的病原物。 3、病原鉴定柯赫氏法则的局限性：对有些专性寄生物，如病毒、类病毒、菌原体、霜霉菌、白粉菌和一些锈菌等不能直接应用，须改进后应用。对非侵染性病害的诊断，也须改进后应用。排斥了其他微生物的拮抗作用；发病条件与实际有差别，受人为影响；只能证明一菌一病，不能证明两种及两种以上微生物的复合侵染。所有侵染性病害的诊断与病原物的鉴定都必须按照柯赫氏法则来验证。柯赫氏法则同样也适用于对非侵染性病害的诊断。以某种怀疑因素来代替病原物的作用，例如当判断是缺乏某种元素引起病害

10、时，可以补施某种元素来缓解或消除其症状即可确认是某元素的作用。柯赫氏法则只是病害鉴定过程中的一个重要环节。只有通过对病原物的形态学观察和生理学及分子生物学研究才能鉴定病原物和确诊病害。3、病原鉴定（4）分离培养的一般方法、表面消毒：从病株上选取一小块病组织（选择新发病的组织或器官，以病健交界处分离效果最好，病原物生活力强，较少受杂菌污染）。用0.1%的升汞或70%酒精表面消毒，一般3分钟左右（因材料而异），然后用灭菌水冲洗数次。 3、病原鉴定、分离：组织分离：将上述处理过的病组织块在无菌条件下，移到普通马铃薯琼脂培养基上（平面或斜面培养基均可）。稀释分离：若不用病组织，则将病组织上的病原物水洗

11、后，直接配成悬浮液，经稀释后与熔化并冷却至45的培养基混合，倒入灭菌培养皿中；或将病组织压碎（多为细菌）配成悬浮液，划线法在培养基平面上分离培养。 3、病原鉴定培养：将上述培养皿用封口膜等封口或灭菌棉封口（斜面） ，放在25的培养箱中培养。一至数日后即可培养出目的微生物。常用培养基简介： 3、病原鉴定PDA培养基：真菌多用PDA（马铃薯potato葡萄糖 dextrose 琼脂agar）培养基。PDA培养基配方：马铃薯（去皮）：200g 琼脂：1720g葡萄糖（或蔗糖）：20g 去离子水：1000ml3、病原鉴定牛肉蛋白胨培养基：细菌培养用。配方：牛肉浸膏：3g 酵母膏：0.5g蛋白胨：510

12、g 葡萄糖（或蔗糖）10g去离子水：1000ml， pH=7.2。3、病原鉴定（5）接种方法种传的：拌种、浸种；土传的：菌土，浸根；气传的：喷雾、涂抹、注射、针刺、喷粉、扫接；虫传的：媒介虫传；嫁接传：菟丝子，嫁接；（6）病原的分子生物学鉴定优点：敏感、特异、快速缺点：成本、技术性、设备等限制主要方法：1、核酸技术2、免疫学技术3、其他技术(如噬菌体技术等)4.确定病害例子：浙江杨梅叶斑病的鉴定SCI论文四、植物病害诊断注意事项1、症状的复杂性和多变性同症不同病原物在同一寄主上表现相同的症状。如由缺素引起的黄化、根部线虫的危害和病毒侵染引起的症状很难区分，属同症。异症在不同寄主上、或同一寄主的

13、不同部位、不同生育期或不同环境条件下，相同病原物引起的症状表现不同。如苹果锈果病（国光、青香蕉上为锈果型，祝光、花红上为花脸型，元帅、倭锦为混合型）、苹果腐烂病（小枝干腐，大枝湿腐）、白粉病（生育前期白粉，后期黑色小颗粒状物）等。四、植物病害诊断注意事项复合症状（复合侵染）-两种及两种以上病原所致，症状可各自表现，也可只表现一种。如白粉病和锈病复合侵染，各自表现；病毒和线虫危害只表现黄化等；潜伏侵染-侵染了但未表现症状。如带毒现象，隐症现象（高温隐症）2、病害与伤害的区分：有无病理变化过程。并且，虫害有虫孔、取食后的伤痕、缺刻、排泄物、隧道等；机械伤有伤痕、刮痕。四、植物病害诊断注意事项3、病

14、原物与腐生物的区分：腐生物大量存在，多易生在死亡组织和腐烂、水分多的部位。这就要一方面分离培养鉴定，另外作病征观察时，注意病征出现的特点（普遍性、一致性和大量性）。但有时仍很难判断，就需要柯赫氏法则进一步验证。四、植物病害诊断注意事项4、并发性病害和续发性病害：并发性病害：一种病害发生的同时，伴随着另一种病害的发生；例如：柑橘线虫病发生同时，常伴随着衰退病发生。续发性病害：当植物发生一种病害后，可继而发生另一种病害，后者称续发性病害。例如：梨裂果病，常续发霉心病、青霉病等。问题：如何辩证看待症状在植物病害诊断中的作用？许多植物病害的症状有很明显的特点，一个有经验或观察仔细善于分析的植病工作者是

15、不难区分的。在多数情况下，正确的诊断还需要作详细和系统的检查，而不仅仅是根据外表的症状（新手或经验不多的人切记）。植物病害的诊断，首先要区分是属于侵染性病害还是非侵染性病害。（一）侵染性病害病原生物侵染所致的病害特征：病害有一个发生发展或传染的过程；在特定的品种或环境条件下，病害轻重不一；在病株的表面或内部可以发现其病原生物体存在(病征)，它们的症状也有一定的特征。1、真菌病害2、细菌病害3、病毒病害4线虫病害5菌原体病害 6寄生性植物病害第二节 植物病害的症状一、症状类型（插图） 1内部症状（1）内含体（inclusion）（2）侵填体（tylose）（3）胼胝质（callose）（4）维管

16、束变色polyomavirus nuclear inclusions cytoplasmic inclusions 2外部症状（1）病征 真菌的子实体：菌丝体、菌核、孢子器、 黑粉、白粉、锈状物、霉状物 细菌的菌脓 线虫的虫体 寄生植物的个体病征（真菌的菌丝体）病征（真菌的菌核）病征（真菌的白粉状物）病征（真菌的白粉状物）病征（真菌的黑粉状物）病征（真菌的黑粉状物）病征（锈状物）病征（锈状物）病征（真菌的霉状物）病征（黑色粒状物）病征（细菌的菌脓）病征（细菌的菌脓）病征（线虫的虫体）病征（寄生植物）病征（寄生植物）病征（寄生植物）病征（寄生藻）（2）病状变色坏死萎蔫腐烂畸形（2）病状 变色（discoloration） 黄化（yellowing） 花叶（mosaic） 斑驳（mottle） 变色（黄化） 变色（花叶） 变色（花叶） 变色（花叶） 变色（花叶） 变色（花叶） 变色（果实） 变色（果实） 变色（脉明） 变色（斑驳） 变色（碎锦） 变色（碎锦） 变色（碎锦） 变色（种子） 坏死(necrosis） 叶斑、穿孔、轮斑叶枯、叶烧猝倒(damping off)、立枯、梢枯(d