食用菌栽培01-菌种生产

1、食用菌栽培技术滁州职业技术学院生化工程系汤士勇: tangshiyong_tsy163: 570424862第二章 食用菌菌种消费菌种消费类型及消费流程菌种消费的根本设备培育基的配制消毒与灭菌接种与培育菌种的分别方法菌种的保藏与复壮液体菌种消费本章主要内容一、菌种的消费类型及消费流程菌种：是指以适宜的营养培育基为载体进展纯培育的菌丝体，也就是培育基质和菌丝体的结合体。或者说是指人工培育，并供进一步繁衍的食用菌的纯菌丝体。菌种的消费类型：食用菌菌种是经过三级逐渐扩展培育的方式来消费的，在消费上通常把菌种分为一级菌种母种、二级菌种原种和三级菌种栽培种。一、菌种的消费类型及消费流程菌种一级菌种二级菌

2、种三级菌种从孢子分别培育或组织分别培育获得的纯菌丝体。由一级菌种扩展繁衍成的菌丝体。由二级菌种扩展繁衍成的菌丝体，是直接用于栽培的菌种。一、菌种的消费类型及消费流程母种一、菌种的消费类型及消费流程原种一、菌种的消费类型及消费流程栽培种一、菌种的消费类型及消费流程三级菌种之间的关系菌种类型制种容器培养基菌株来源用途要求一级菌种（ 母种、试管种）试管PDA、PSA种菇（孢子或菌肉组织） 扩制二级种菌种保藏 纯度高，质量好，绝对无杂菌 二级菌种（原种）菌种瓶固体培养基一级菌种 扩制三级菌种 纯度高，质量好，无杂菌三级菌种（栽培种）罐头瓶、菌种袋固体培养基二级菌种 用于栽培 高纯度，高质量，无杂菌 一

3、、菌种的消费类型及消费流程菌种消费流程：种菇一级菌种二级菌种三级菌种栽培一、菌种的消费类型及消费流程菌种消费工艺流程：三级种培育基制备高压或常压灭菌接种三级菌种栽培培育斜面一级种培育基制备高压灭菌接种培育挑选提纯原始种中试后确定一级种保管孢子或组织分别一级种转管、扩展菌种瓶二级种培育基制备高压灭菌接种培育二级菌种罐头瓶菌种袋一、菌种的消费类型及消费流程菌种制造的四个根本环节配制培育基灭菌接种培育二、菌种消费的根本设备菌种厂的规划仓库配料室灭菌室接种室培育室办公室栽培棚门口晒料场二、菌种消费的根本设备接种设备接种室缓冲间：23m2接种间：56m2面积79m2高2.22.5m要求 6个面平滑两门错

4、开、平拉式顶装紫外灯二、菌种消费的根本设备接种设备接种室清洁物品放缓冲间消毒 移物至接种间 喷消毒液 10min 后接种消毒液清洁 运用二、菌种消费的根本设备接种设备接种室二、菌种消费的根本设备接种箱察看窗紫外灯操作孔二、菌种消费的根本设备超净任务台净化任务台二、菌种消费的根本设备超净任务台净化任务台双人单人二、菌种消费的根本设备接种工具要求：前端为导热性好的金属资料枪匙钩铲镊耙针环接种二、菌种消费的根本设备培育设备培育室：培育大量菌种的恒温房要求光线暗；密闭好、通风性强；能升温、降温空调机；有培育架二、菌种消费的根本设备培育室：培育大量菌种的恒温房二、菌种消费的根本设备培育箱培育少量菌种的恒

5、温电器2040二、菌种消费的根本设备灭菌设备手提式高压灭菌锅高压锅外锅：装水内锅：装物锅盖平安阀排气阀压力表三、培育基的配制培育基概念：采用人工的方法，按照一定比例配制各种营养物质，以供应食用菌生长繁衍的基质。要求：含有该菌生长发育所需求的营养物质；水分、pH适宜；必需经过严厉的灭菌，坚持无菌形状。三、培育基的配制培育基种类类型天然：天然有机物合成：知成分的化学药品半合成：原料来源形状液体：营养液固体固体：天然固体原料固化：加1.5%2%琼脂外表外形斜面培育基平板培育基三、培育基的配制培育基成分：水分碳源：单糖、双糖、多糖氮源：有机氮氨基酸、蛋白质、尿素、铵态氮硫酸铵无机盐：磷、钾、钙、镁、硫

6、等。磷酸氢二钾对pH变化具有缓冲作用生长素：B族维生素凝固剂：琼脂三、培育基的配制粉状条状属天然植物多糖融点96以上凝点40 以下冷水中不溶透明度好、粘着力强不被微生物分解利用琼脂三、培育基的配制三、培育基的配制母种培育基PDA培育基和PSA培育基是一级菌种最常用的培育基，适用于大部分食用菌菌种的分别、培育和保藏，既是一种广泛培育基，也是一种根底培育基。PDA 培养基PSA 培养基马铃薯（去皮）200g马铃薯（去皮）200g葡萄糖 20g 蔗糖20g琼脂1820g琼脂1820g水1000ml水1000ml三、培育基的配制母种培育基配制过程煮沸20min，取定量滤液制马铃薯滤液滤液沸时参与，融后

7、加余料融化琼脂调理pH值勿污管口，控制装量分装试管预备灭菌包扎成捆1%NaOH或HCl 三、培育基的配制母种培育基配制过程三、培育基的配制原种、栽培种培育基棉籽壳培养基主料棉籽壳87，麦麸10辅料白糖1，石灰1，过磷酸钙1棉壳、麦麸干混余料溶于水后浇入主料清水翻拌至含水量配制三、培育基的配制原种、栽培种培育基谷粒培养基主料麦粒、玉米粒等98.5%辅料石膏粉1%,碳酸钙0.5%调pH与分装 pH：普通为8.0左右原种培育基装大口瓶栽培种培育基装菌种袋 外紧内松，上紧下松颗粒洗净，1%石灰水泡胀文火煮沸1520min晾至无明水后拌入余料配制四、消毒与灭菌根本概念杀死一切微生物，包括芽孢。灭菌分为杀

8、菌：菌体尚存溶菌：菌体消逝消毒：只杀死病原菌，未伤及芽孢防腐：暂时抑制微生物生长除菌：用冲洗、过滤等法，除去微生物四、消毒与灭菌物理消毒灭菌法热力灭菌一原理高温使菌体蛋白质、核酸、酶等凝固或变性失活。四、消毒与灭菌物理消毒灭菌法热力灭菌二方法 湿热灭菌 干热灭菌四、消毒与灭菌干热灭菌热源火焰及热空气特点简便、快速、范围有限方法小的金属、玻璃器皿酒精灯烧烘箱烤大的玻璃、金属器皿四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌器皿包装1601702h枯燥箱运用留意70以下开箱取物勿超180随用随开包 四、消毒与灭菌湿热灭菌热源热蒸气或热水特点范围广、温度低、效果好、时间短方法高压蒸汽灭菌常压蒸汽灭菌巴氏消毒四、消毒与

9、灭菌蛋白质凝固点与其含水量的关系蛋白质含水量(%)凝固温度()502518605674808090145160170热蒸气穿透力大蛋白质凝固点随其含水量的添加而降低四、消毒与灭菌干热灭菌与湿热灭菌穿透力的比较加热方式传导介质温度()加热时间（h）透过布层温度（）结果20层40层100层干热空气130140 486 7270以下灭菌不完全湿热饱和蒸汽 105.3 3101 10l 10l灭菌完全四、消毒与灭菌高压蒸气灭菌概念利用高压产生的高蒸汽温度杀灭微生物的方法 原理水沸点随热蒸汽压力的添加而升高密闭锅蒸气多压力高沸点高四、消毒与灭菌步骤：装锅加热排气升压保压灭菌降压出锅关键：排净冷空气留意灭

10、菌时间和压力因物而异升降压力要稳灭菌时间从保压时算起压力降至“0才干开盖使用四、消毒与灭菌四、消毒与灭菌排气四、消毒与灭菌纯蒸气压力与温度的关系1kg/cm2=0.098Mpa(兆帕=98Kpa千帕四、消毒与灭菌常压蒸气灭菌概念利用常压产生的100蒸汽温度进展灭菌的方法 特点设备简，本钱低，灭温低，时间长用法一次性灭菌100 ，10余h)尽快到达100 到达100 时开场计时灭菌中勿降温，勿干锅四、消毒与灭菌常压蒸气灭菌四、消毒与灭菌3.巴氏消毒概念利用低于100的温度杀灭有害微生物的方法 培育料堆积发酵料温6070杀死有害微生物方法四、消毒与灭菌物理消毒灭菌法紫外线灭菌概念 利用电子射过水银

11、气体 产生的紫外线而杀菌的方法 杀菌机理直接：使蛋白质、酶等变性失活间接：空气中产生臭氧或过氧化氢运用有效间隔：1.52.0m理想波长：265nm30w紫外灯照30min避光30min四、消毒与灭菌物理消毒灭菌法紫外线灭菌便携式四、消毒与灭菌物理消毒灭菌法紫外线灭菌透力很弱定期改换灯管只起辅助作用伤眼睛和皮肤特点四、消毒与灭菌化学消毒灭菌法利用化学药剂杀灭或抑制微生物的方法概念抑菌剂消毒剂灭菌剂浓度液态：喷雾、浸泡、洗刷等气态：加热、熄灭、氧化等形状划分四、消毒与灭菌气雾消毒灭菌法一要求密闭条件下坚持一定时间二种类甲醛气雾盒四、消毒与灭菌气雾消毒灭菌法机理：结合蛋白质氨基， 使其变性 。喷：5

12、%熏：10ml/m3+1/2KMnO4用法甲醛有刺激性和腐蚀性四、消毒与灭菌液体消毒灭菌法固体或液体药品水药液多现配现用概念种类氧化剂熟石灰外表活性剂乙醇酚类新洁尔灭四、消毒与灭菌液体消毒灭菌法一氧化剂氧化菌体蛋白质的活性基团，使其变性。 机理种类高锰酸钾过氧化氢漂白粉过氧乙酸四、消毒与灭菌液体消毒灭菌法高锰酸钾紫色针状结晶 0.1%0.2%浸泡手、器具等。四、消毒与灭菌液体消毒灭菌法过氧化氢无色液体，属环保型消毒剂3%皮肤、伤口消毒 6浸泡器皿30min四、消毒与灭菌液体消毒灭菌法漂白粉2%5%浓度洗刷、喷雾、浸泡湿处可干撒 作用约30min使用留意原品密封随配随用对衣物有退色和腐蚀性四、消

13、毒与灭菌过氧乙酸无色至微黄色液体，有刺激性、腐蚀性、挥发性。 1.5%熏蒸7ml/m30.2%洗手0.5%浸泡0.5%喷雾使用四、消毒与灭菌液体消毒灭菌法二外表活性剂脱水剂脂溶剂蛋白量变性剂乙醇7075效果最好 皮肤、器皿擦拭或浸泡浓度高浓度效果差无水的无杀菌作用四、消毒与灭菌3.新洁尔灭0.25%消毒皮肤、浸泡器具0.5%喷雾勿与肥皂混用酚类石炭酸：3%5%浸泡或喷雾来苏尔刺激性小效能比苯酚强4倍3%5%喷雾、擦洗2%消毒手四、消毒与灭菌液体消毒灭菌法三重金属盐类1、氯化汞升汞：常用浓度0.1%0.2%，主要用于食用菌菌种分别2、硝酸银：0.1%1.0%3、硫酸铜：常配制波尔多液五、接种与培

14、育母种的接种与培育接种转管：过程接种环取绿豆粒大母种移入新斜面中部留意种块勿太大原老种块勿再接入传代次数勿太多五、接种与培育培育：接种后的试管放入温箱内，于25左右的温度条件下培育。3d后检查菌丝生长情况及有无杂菌，培育715d母种菌丝即可长好。五、接种与培育原种的接种与培育接种：过程用接种耙取蚕豆大母种放于瓶中料面上五、接种与培育培育：前3-5d内直立放置，当菌丝吃料后倒卧叠放，并适时转动，这样可以保证水分分布均匀，使菌丝生长一致。定期检查有无杂菌污染。原种应在3个月内运用。五、接种与培育栽培种的接种与培育接种：过程用接种匙镊、铲取枣大原种放于袋的两端或瓶中料面上留意外表老菌丝及老种块勿接入

15、五、接种与培育培育：30-40d后栽培菌种即可长满菌丝，供栽培运用。五、接种与培育菌种质量鉴定母种质量鉴定：1、形状外观：菌丝白、整齐、粗壮、有弹性、萌生快等外观好差丝枯燥、收缩、自溶产生红褐色液体等五、接种与培育退化母种好母种五、接种与培育2、长势：将菌种接入适宜的培育基，在适宜的温度条件下培育，假设菌丝生长快而整齐，浓而强壮，那么为优良种类。假设菌丝生长过快或过慢，菌丝不整齐且混乱，那么为劣质种类。五、接种与培育3、出菇实验：栽培出菇快产量高质量好抗逆性强五、接种与培育2、温度顺应性：仍正常生长适温培育7天 3035 锻炼4h 再适温培育五、接种与培育2、干湿性鉴定：仍正常生长湿：15g琼

16、脂/1000ml培育基 适宜：16.5g琼脂/1000ml培育基干：18g琼脂/1000ml培育基五、接种与培育原种与栽培种质量鉴定：具有菌丝白符合该菌种的颜色均匀、粗壮、有菇香味接种后萌生快菌种种类种类称号菌种级别代 时消费厂家接种日期合格菌种用于消费没有无杂色、无黄水、无结皮、无原基、无干缩脱壁等景象五、接种与培育原种与栽培种质量鉴定：产生原基五、接种与培育原种与栽培种质量鉴定：黄水污染六、菌种分别方法孢子分别法：孢子分别法概念特点操作过程利用子实体产生的成熟有性孢子分别培育获得纯菌种的方法属于有性繁衍，后代易发生变异，可用此法培育新种类分别过程较复杂，适用于胶质菌类和小型伞菌孢子的采集孢

17、子的分别孢子的萌生六、菌种分别方法孢子分别法：孢子分别法多个孢子萌生后自在交配获得纯菌种的方法多孢分别单孢分别单个孢子萌生获得纯菌种的方法整菇插种法钩悬法孢子印法平板稀释法延续稀释法毛细血管法六、菌种分别方法组织分别法：组织分别法将食用菌的部分组织移接到斜面培育基上获得纯培育的方法简单易行坚持原菌种性状适用于大型肉质子实体反复多易退化种菇选择种菇消毒切取组织块移接组织块至斜面中央培育特点概念操作过程以伞菌为例六、菌种分别方法基内菌丝分别法：基内菌丝分别法概念特点适用范围从生长子实体的培育基中分别菌丝获得纯培育的方法易感染杂菌子实体已腐烂，但又必需保管该种菌种子实体小而薄，用组织分别法和孢子分别法较困难混合菌丝培育类型，如银耳，多采用此法七、菌种的保藏与复壮菌种的保藏使菌种不死亡不生长不污染，不降低或不丧失其优良性，以尽量延伸运用时间。保藏目的保藏原理发明不利于菌种生长的一切条件，使其代谢处于休眠形状。七、菌种的保藏与复壮菌种的保藏七、菌种的保藏与复壮菌种的保藏特点简便保藏时间短易污染及退化不适于草菇等菌类 1.斜面低温法斜面菌种置46冰箱中36个月七、菌种的保藏与复壮七、菌种的保藏与复壮1.液体石蜡保藏无菌检验 ？注入种管淹没斜面约1cm矿油处置灭菌：152kpa、30min去