微生物常规鉴定技术

1、关于微生物常规鉴定技术课件第一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月 培养特性：指微生物在培养基上所表现的群体形态和生长情况。 形态结构：通过染色，在显微镜下微生物的形状、大小、排列方式、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性。 一、培养特性和形态结构观察第二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月细菌的培养特性固体培养基 菌落大小、形态、颜色、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性液体培养基 表面生长情况（菌膜、环）、混浊度及沉淀半固体培养基 穿刺接种观察运动、扩散情况（一）培养特性第三张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月1.点状 2

2、.圆形 3.丝状 4.不规则形 5.假根状 6.纺锤状 7.扁平 8.隆起 9.凸起 10.垫状 11.脐状 12.边缘整齐 13.波状 14.裂片状 15.啮蚀状 16.丝状 17.卷发状 18.丝线状 19.刺毛状 20.串珠状 21.疏展状 22.树根状 23.假根状 第四张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月细菌的培养特征 24.丝状 25.串珠状 26.乳头状 27.绒毛状 28.树根状 29.量杯状 30.萝卜状 31.漏斗状 32.囊状 33.层状 34.絮状 35.环状 36.蹼状 37.膜状 第五张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月金葡在不同平板上的菌落特征

3、大肠杆菌在不同培养基上的菌落特征第六张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月沙门氏菌在不同平板上的菌落特征李斯特氏菌在不同平板上的菌落特征第七张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月 固体斜面培养 液体培养基半固体培养第八张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月酵母的培养特性固体培养基 菌落大小、形态、颜色、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征液体培养基 表面生长情况（菌膜、环）、混浊度及沉淀（一）培养特性第九张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月酵母的菌落特征第十张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月霉菌的培养特性固体培养基 菌落大小、颜色（正反面）、菌

4、落表面形状、 菌落组织形状液体培养基 表面生长情况（菌膜、环）、混浊度及沉淀（一）培养特性第十一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月棉絮状毛霉菌落特征第十二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月地毯状青霉菌落特征蜘蛛网状根霉菌落特征第十三张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月绒毛状曲霉菌落特征第十四张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月放线菌的培养特性固体培养基 菌落大小、颜色（正反面）、光泽度、质地、菌落表面形状、菌落组织形状液体培养基 静置培养：表面生长情况（菌膜、环）、沉淀 振荡培养：球状菌丝团 （一）培养特性第十五张，PPT共一百三十四页，创作于202

5、2年6月产抗菌素的放线菌的菌落特征A：卡特利链霉菌；B：弗氏链霉菌；C：吸水链霉菌金泪亚种；D：卡那霉素链霉菌；E：除虫链霉菌；F：生磺酸链霉菌A：诺尔斯氏链霉菌；B：皮疽诺卡氏菌第十六张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月（二）形态结构细菌的形态结构细菌的基本形态细菌大小细菌细胞结构（染色观察）细菌的基本形态第十七张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月单球菌如尿素小球菌 双球菌如肺炎双球菌四联球菌如四联小球菌球菌形态第十八张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月八叠球菌如尿素八叠球菌链球菌如乳链球菌葡萄球菌如金黄色葡萄球菌球菌形态第十九张，PPT共一百三十四页，创作于2

6、022年6月 短杆菌长杆菌梭状芽孢杆菌杆菌形态单杆菌链状杆菌杆菌细胞两端的形态特征第二十张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月弧菌螺旋菌螺旋体螺旋菌形态第二十一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月特殊形态第二十二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月异 常 形 态第二十三张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月细 菌 大 小细菌大小的测定：(1)测量：测微尺(2)长度单位：微米(m)(3)表示： 球菌：直径 杆菌： 宽长 螺菌： 宽、长、螺距第二十四张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月细菌的大小第二十五张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月细

7、菌 细胞结构阴性菌阳性菌革兰氏染色法第二十六张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月芽孢染色法细菌芽孢的各种类型芽孢的在细胞中的位置第二十七张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月鞭毛染色法鞭毛的着生方式第二十八张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月荚膜染色法第二十九张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月（二）形态结构酵母的形态结构酵母的基本形态酵母大小酵母细胞结构（染色观察）第三十张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月（二）形态结构放线菌的形态结构放线菌的基本结构链霉菌孢子丝形态第三十一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月第三十二张，PPT共一百

8、三十四页，创作于2022年6月分生孢子的形成过程第三十三张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月第三十四张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月（二）形态结构第三十五张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月第三十六张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月第三十七张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月第三十八张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月二、微生物生理生化检验碳水化合物代谢试验蛋白质类代谢试验有机盐类试验酶类试验其他生化试验第三十九张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月（一）碳水化合物代谢试验糖（醇、苷）类发酵试验葡萄糖氧化发酵试验（O/F

9、试验）-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）七叶苷水解试验甲基红试验V-P试验第四十张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月糖（醇、苷）类发酵试验方法原理： 多糖单糖丙酮酸酸性产物(或产酸产气)pH 指示剂呈酸性变色（若产气者有气泡出现）培养基指示剂 酚红（pH：6.88.4） 色泽变化（酸碱：黄红） 第四十一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月方法 将纯种细菌以无菌操作接种到含有指示剂的培养基中，置35温箱培养数小时至两周，观察结果。 伤寒沙门菌甲型副伤寒第四十二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月糖（醇、苷）类发酵试验结果第四十三张，PPT共一百三十四页，创作于2022

10、年6月应用： 主要用于肠杆菌科的鉴定。第四十四张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月原理：细菌分解葡萄糖对O2需求不同， 氧化型：细菌只在有氧环境中分解葡萄糖； 发酵型：细菌可在有氧、无氧环境中分解G; 产碱型：细菌在有氧、无氧环境中都不 分解葡萄糖;葡萄糖氧化/发酵试验第四十五张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月方法： 取2支HL葡萄糖培养管煮沸，待冷后接种菌种。一管管口敞开，一管用液体石蜡封管，培养1824h观察结果。葡萄糖氧化/发酵试验方法 大肠杆菌 铜绿假单胞菌 粪产碱杆菌第四十六张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月葡萄糖氧化/发酵试验结果两管均分解葡萄糖大

11、肠杆菌发酵型开管分解葡萄糖封闭管不分解葡萄糖氧化型铜绿假单胞菌开管、封管均不分解葡萄糖 粪产杆菌产碱型第四十七张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月应用： 主要用于革兰阴性杆菌的鉴别。葡萄糖氧化/发酵试验第四十八张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月原理：有-半乳糖苷酶的细菌，可以分解邻硝基酚-半乳糖苷(ONPG),而释放黄色的邻硝基酚。应用： 常用于迟缓发酵乳糖的细菌的快速鉴定。 -半乳糖苷酶试验（ONPG）第四十九张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月-半乳糖苷酶试验（ONPG）方法方法： 取新鲜细菌一环，加人到0.25ml的无菌生理盐水中，加甲苯一滴充分振动，37

12、、5min，再加入无色ONPG溶液0.25ml，置37水浴，悬液变黄则为阳性。第五十张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月-半乳糖苷酶试验（ONPG）结果 阴性 阳性第五十一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月原理： 七叶苷可以被细菌分解为葡萄糖和七叶素，七叶素与培养基中的Fe2+反应，形成黑色化合物，使培养基变黑。七叶苷水解试验应用： 主要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别。 第五十二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月方法： 将待检菌接种于七叶苷培养基上，培养后观察结果。 七叶苷水解试验方法第五十三张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月甲基红试验原理： 细

13、菌分解培养基中的葡萄糖丙酮酸大量混合酸培养基pH4.4以下甲基红试剂培养基变红。应用： 主要用于大肠和产气肠杆菌鉴定。 第五十四张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月方法： 将待检菌种接种于葡萄糖蛋白胨水中,35培养618小时后,往培养基中加入甲基红指示剂少许,观察结果。甲基红试验 空白对照 阴性 阳性第五十五张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月原理： 某些细菌分解糖类丙酮酸继续脱羧乙酰甲基甲醇（碱性）空气氧化双乙酰+-萘酚、肌酸红色化合物。V-P试验应用： 主要用于鉴别大肠和产气肠杆菌。第五十六张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月V-P试验方法： 将待检菌种接种于

14、葡萄糖蛋白胨水培养基中，35培养48h后按每毫升培养基加入0.1ml含2肌酸或肌酐的40KOH溶液,数分钟或数小时后观察结果。 空白对照 阴性 阳性第五十七张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月（二）蛋白质类代谢试验靛基质试验硫化氢试验苯丙氨酸脱氨酶试验尿素酶试验第五十八张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月原理： 含有色氨酸酶的细菌，能分解色氨酸产生吲哚，吲哚能与对二甲氨基苯甲醛作用，形成红色玫瑰吲哚。吲哚（靛基质）试验应用： 主要用于肠杆菌科中产气肠杆菌与大肠埃希菌的鉴别，常与MR试验联用。第五十九张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月吲哚（靛基质）试验方法： 将待

15、检菌接种于胰蛋白胨水中，35培养2448h，取出后沿试管壁缓慢加入靛基质试剂数滴，在两液面观察结果。第六十张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月硫化氢试验原理： 有些细菌能分解含硫氨基酸，产生H2S与培养基中的铅盐或铁盐发生反应，生成黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀。 应用： 肠杆菌科的属间鉴定第六十一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月方法： 将细菌穿刺接种到醋酸铅培养基中， 35、2448h，观察结果。硫化氢试验第六十二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月苯丙氨酸脱氨酶试验原理： 有苯丙氨酸脱氨酶的细菌，可以使苯丙氨酸脱氨 形成苯丙酮酸，苯丙铜酸与三氯化铁作用形成绿色

16、化合物。应用： 多用于肠杆菌科的鉴定。第六十三张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月苯丙氨酸脱氨酶试验方法：琼脂斜面法：将待检细菌接种到苯丙氨酸琼脂斜面上， 35培养2448h，取出，将三氯化铁试剂45滴滴于斜面上，观察结果。快速纸片法：将待检菌涂于苯丙氨酸纸片上，孵育15min，取出，滴加三氯化铁试剂，立即观察结果。 绿色阳性 黄色阴性第六十四张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月原理： 产生尿素酶的细菌,能分解尿素产生氨和CO2,氨在溶液中形成碳酸铵，使培养基变碱，酚红指示剂变红。尿素分解试验应用： 肠杆菌科属间鉴别。第六十五张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月方

17、法： 将待检菌接种于尿素培养基中，35培养1824h取出观察。对照阳性阴性尿素分解试验第六十六张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月枸橼酸盐利用试验硝酸盐还原试验（三）有机盐类试验第六十七张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月枸橼酸盐利用试验原理： 能利用枸橼酸盐的细菌，也能利用铵盐作为唯一的碳源，分解后生成碳酸钠和氨，使培养基变为碱性，使指示剂溴麝香草酚蓝由浅绿色变为深蓝色。应用： 主要用于肠杆菌科属间的鉴别。第六十八张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月枸橼酸盐利用试验方法： 将待检菌接种于含有枸橼酸盐和铵盐的西蒙和柯氏培养基培养1824h后，观察结果。蓝色为阳性绿

18、色为阴性第六十九张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月原理： 使硝酸盐还原的细菌能从硝酸盐中获得氧，使其成为亚硝酸盐或其它还原物。培养基中的亚硝酸基能与-萘氨和苯磺酸形成红色的N-萘氨偶氮苯磺酸。若出现红色现象则说明该菌还原硝酸盐。 硝酸盐还原试验应用： 有助于鉴别肠杆菌科、嗜血杆菌属、奈瑟菌属、布兰汉菌属、假单胞菌属等第七十张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月方法： 取一环待检菌接种到硝酸盐琼脂斜面上，35 培养1824小时，然后依次加入含-萘氨和对氨基苯磺酸的试剂各1mL，30s后观察结果。硝酸盐还原试验红色为阳性无色为阴性第七十一张，PPT共一百三十四页，创作于2022

19、年6月（四）酶类试验细胞色素氧化酶试验过氧化氢酶试验凝固酶试验第七十二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月原理： 某些细菌具有细胞色素氧化酶，能将二甲基对苯二胺或四甲基对苯二胺试剂氧化成紫红色 醌类化合物。氧化酶试验应用： 用于科别鉴定试验第七十三张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月方法： 滤纸法：用洁净滤纸蘸取菌落，加一滴试剂，观察结果菌落法：直接在菌落上加试剂，观察结果纸片法：使用试剂浸泡制成的试剂纸片，取足够的菌落，观察结果。氧化酶试验第七十四张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月滤纸法：阳性结果纸片法：阳性、阴性结果氧化酶试验第七十五张，PPT共一百三十四页

20、，创作于2022年6月原理： 有触酶的细菌能催化过氧化氢生成水和初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。触酶试验应用： 用于革兰阳性球菌初步分属。第七十六张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月触酶试验方法：用接种环取备检菌少许，置于洁净的玻片上，滴加3%的过氧化氢12滴，观察结果。试管法：用洁净的玻棒蘸取待检菌少许，置于装有3%过氧化氢的试管内，观察结果。第七十七张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月血浆凝固酶试验原理： 有些细菌能产生血浆凝固酶，可以使人和动物血浆中的纤维蛋白原转化成纤维蛋白，从而使血浆凝固。应用： 主要用于金葡菌的鉴定。第七十八张，PPT共一百三十四页，创作于20

21、22年6月血浆凝固酶试验方法：玻片法：取洁净玻片一张，加生理盐水两小滴于玻片两端，用接种环挑取待检菌落和对照菌均匀涂于盐水中，制成浓菌液，加兔或人血浆一滴于菌液中，观察结果。试管法：于3支试管中分别加入1:4稀释的血浆0.5ml，1支管加入待检菌肉汤培养物0.5ml,另两支分别加阴阳性对照菌肉汤培养物0.5ml，35培养34h后观察结果。第七十九张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月血浆凝固酶试验第八十张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月（五）其他试验胆汁溶菌试验CAMP试验氢氧化钾拉丝试验第八十一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月原理： 胆盐、取氧胆酸钠和硫磺胆

22、酸钠能选择性地溶解肺炎链球菌，其它链球菌则能耐受这些试剂。胆汁溶菌试验应用： 主要用于肺炎链球菌与甲型链球菌。第八十二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月方法：平板法：取胆酸钠溶液一环，放在平板的菌落上，3530min观察结果。试管法：于0.9ml培养了1824小时的菌液中，加入取氧胆酸钠试剂0.1ml或牛胆盐0.2ml混匀，37水浴1030min，观察结果。胆汁溶菌试验第八十三张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月CAMP试验原理： B群链球菌能产生一种胞外因子CAMP,它能增强金黄色葡萄球菌-溶血毒素的活性，因此，在两菌交界处出现箭头样的溶血增强区。应用： 用于鉴定B群链

23、球菌。第八十四张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月方法： 取血平板一块，用产生-溶血毒素的金葡菌在中央划一道线，将待检菌据此线0.5cm处垂直划线。351824小时培养，观察结果。CAMP试验第八十五张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月三、微生物血清学检验血清学反应是指：相应的抗原与抗体在体外一定条件下作用，可出现肉眼可见的沉淀、凝集现象。在微生物检验中，常用血清学反应来鉴定分离到的细菌，以最终确认检测结果。 第八十六张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月经典的免疫学反应凝集反应沉淀反应补体结合反应中和反应第八十七张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月凝集反

24、应颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体结合，在电解质参与下所形成的肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应（Agglutination reaction）。直接凝集反应玻片凝集法：痢疾杆菌的检测试管凝集法：伤寒、付伤寒杆菌的检测间接凝集反应第八十八张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月沉淀反应可溶性抗原与相应抗体结合，在有适量电解质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应（Precipitation）。液相沉淀反应絮状试验环状试验凝胶内沉淀反应扩散试验免疫电泳技术第八十九张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月液相内沉淀反应絮状沉淀反应环状沉淀反应+抗血清抗原抗原抗体第

25、九十张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月凝集内沉淀反应免疫扩散技术免疫电泳技术单向扩散试验双向扩散试验火箭电泳对流电泳免疫电泳第九十一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月第九十二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月补体结合反应补体结合反应(Complement fixation reaction)是在补体参与下，以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统的抗原抗体反应。待检系统指示系统补体待检系统指示系统（不溶血）补体消耗第九十三张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月中和反应细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应 第九十四张，PPT共一百三十四页，创作于202

26、2年6月美国细菌学家Salmon与Smith于1885年分离出猪霍乱沙门菌。1990年为纪念Salmon，定名这类细菌为沙门菌属。沙门菌是肠杆菌科的重要致病菌。包括伤寒、副伤寒甲、乙、丙型，肠炎，鼠伤寒等沙门菌，现今已发现2324个血清型。四、沙门菌检测（一）沙门菌特性第九十五张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月生物学特性形态 两端钝圆的革兰氏阴性杆菌，（0.4-0.9）m (1-3)m，无芽孢，周生鞭毛，一般无荚膜，少数有包膜。 光滑型的细菌大小均匀，粗糙型则大小不一，长短不一。第九十六张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月培养特性在营养琼脂平板上18-24h培养形成无色半

27、透明，表面光滑、湿润、隆起的菌落，直径2-3mm。有些菌株在营养琼脂平板上生长不良，形成 “侏儒”菌落，加葡萄糖或甘油，生长良好，但易使菌株粗糙, 呈干燥、无光泽、边缘不整齐。光滑型菌在肉汤中无菌膜、无沉淀；粗糙型则产生沉淀，上层液透明。生长温度在10-42，最适38；pH4.5-9，最适pH6.8-7.8；需氧或兼性厌氧。第九十七张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月生化特性靛基质-，甲基红+，v-p -，柠檬酸盐反应d，产硫化氢，尿素酶反应-，还原硝酸盐， -葡萄糖醛酸苷酶d，不能发酵乳糖，可以被噬菌体裂解。第九十八张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月 抗原结构（1）抗原

28、构造菌体抗原（o）：不被乙醇、0.1%石炭酸所破坏。与特异性抗血清呈颗粒状凝集，形成慢，不易摇散。表面抗原（K抗原）：沙门菌中有三种K抗原，即Vi抗原、M抗原和5抗原。可阻止O抗原被抗O血清所凝集，具有O不凝集性。常用于菌型鉴定。M抗原：粘液抗原，在菌型鉴定上无特殊意义。5抗原：第九十九张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月鞭毛抗原（H抗原）：经乙醇或酸处理后失去与特异性抗体的结合力。制备时，应用具有丰满鞭毛的菌种18-24h的培养物，加甲醛固定或60以下加热后即成H抗原。H抗原与抗H血清562h后，可出现疏松易于摇散的絮状凝集。 抗原结构第一百张，PPT共一百三十四页，创作于2022

29、年6月 沙门菌的H抗原有两相，特异性高的称为第1相（特异相）抗原；特异性低的称为第2相（非特异相）抗原；多数沙门菌同一菌株，常可分离出两种H抗原的菌落，菌落的外观性状完全一样，但与相应抗体作凝集反应时则明显不同。具有两相抗原的称为双相菌，仅有一相抗原的则称为单相菌。 抗原结构第一百零一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月菌量大活菌和菌体内毒素协同作用小肠和结肠里繁殖，侵入粘膜 ，由淋巴系统进入血液潜伏期8-48h急性期，每克粪便中沙门菌多至10亿个 发病机理和症状第一百零二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月食物中毒的特征性症状腹泻恶心腹痛低烧和寒颤有时呕吐、头痛、倦怠伤寒

30、的典型症状持续发热39-40昏睡症剧烈腹痛（腹部痉挛）头痛食欲不振出现扁平的玫瑰红色点状红疹第一百零三张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月供试品供试液预增菌增菌DHLS.SEMBMaCCTSI（三糖铁琼脂）氰化钾赖氨酸脱羧酶试验尿素酶试验吲哚试验血清学试验半固体营养琼脂革兰染色、镜检报告沙门菌常规检查法（二）沙门菌检验程序第一百零四张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月预增菌将供试液接种在无选择性增菌培养基中培养，使受损伤的细菌得以修复，然后再转接至增菌培养基中。一般在营养肉汤中。但美、英、日、欧均选用乳糖肉汤作预增菌液。以1：10的比例接种，18-24h,35-37。第一百

31、零五张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月预增菌培养基的选择培养基商品缓冲蛋白胨水（BPW）使用于所有商品BPW+酪蛋白巧克力乳糖肉汤蛋和蛋制品，火腿，pH6的着色食品乳糖肉汤+表面活性剂7或曲拉通X-100椰肉，肉，干燥或加工过的动物食品乳糖肉汤+ 0.5%凝胶酶凝胶脱脂乳+亮绿巧克力，糖，糖衣胰蛋白胨大豆肉汤香料、香草、干酵母胰蛋白胨大豆肉汤+ 0.5%硫酸钾洋葱和蒜粉等水+亮绿奶粉第一百零六张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月选择性增菌取1mL预增菌液转种至增菌培养基10mL。3724h，培养基可采用亚硒酸盐胱氨酸肉汤培养基或四硫磺酸盐煌绿肉汤培养基，我国与英国相同采用

32、后者。美、日采用二者联用有助于提高沙门菌的检出率。第一百零七张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月分离培养选择性培养基：DHL：无色半透明，产硫化氢的菌落中心黑色或全黑，乳糖阳性菌株粉红色、中心黑色HE：蓝绿或蓝色，产硫化氢的菌落中心黑色或全黑，乳糖阳性菌株黄色、中心黑色SS：无色半透明，产硫化氢的菌落中心黑色或全黑，乳糖阳性菌株粉红色、中心黑色第一百零八张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月分离沙门菌应以出现单个菌落为准，否则应重新分离。由于平板用前未烘干，或因分离不良菌落连片均须重新分离。致病菌菌落一般在经3624h培养后，再放置室温2-3天后不发生变化，而非致病菌则继续增

33、生、增厚，并带黄灰色，并产生臭味。对可疑菌落可放置室温观察几天，再决定取舍第一百零九张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月(1)初步鉴别试验：三糖铁琼脂 乳糖:蔗糖:葡萄糖=10 : 10 : 1以酚红作指示剂当待检菌发酵乳糖或蔗糖时，产酸量多，使整个培养基均呈黄色；如仅发酵葡萄糖，则产酸少，斜面由于细菌生长分解蛋白胨而释放氨，酚红显碱性红色、而底层黄色细菌对培养基中硫代硫酸钠或硫酸钠、亚硫酸钠的还原作用，生成硫化氢。硫化氢遇硫酸亚铁或柠檬酸铁铵产生不溶性黑色硫化亚铁。生化试验第一百一十张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月斜面红色、底层黄色，出现部分黑色或全部黑色斜面红色、底

34、层黄色，无黑色斜面、底层均黄色，出现部分黑色或全部黑色 除沙门菌外，变形杆菌、柠檬酸盐菌、志贺菌等也可出现上述反应。 吲哚试验：阴性第一百一十一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生H2S。大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生H2S 。沙门氏菌，能分解葡萄糖，不发酵乳糖、蔗糖，大多数产生H2S ，多数产气。下面照片所示2-3-4，可能是大肠杆菌、沙门氏菌还是志贺氏菌？第一百一十二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月第一百一十三张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月（2）赖氨酸脱羧酶试验纯培养

35、菌落赖氨酸脱羧酶 产酸含糖蛋白胨培养基溴甲酚紫产碱(尸胺) CO2对照为黄色,阳性为紫色培养时间不超过四天伤寒和鸡沙门菌除外，均为阳性含糖蛋白胨培养基紫色第一百一十四张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月(3)尿素酶试验区别变形杆菌具有尿素酶的细菌分解培养基中的尿素，产生氨，培养基碱性，使酚红变红。沙门菌反应阴性 注意：用无尿素的培养基作对照 第一百一十五张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月(4) 氰化钾试验沙门菌、志贺菌和埃希菌的生长受KCN抑制。KCN 浓度为1：13300或1：10000。沙门菌此反应阴性。待检菌新鲜培养物KCN培养基3648h不生长铁卟啉呼吸酶失活注意

36、：氰化钾的浓度控制接种量试管封口严密操作谨慎用后的培养管加硫酸亚铁和氢氧化钾去毒对照不加 KCN第一百一十六张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月第一百一十七张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月动力检查沙门菌周生鞭毛，能运动。猪霍乱沙门氏菌（S.gallinarum）和鸡白痢沙门氏菌（ S.pullorum）没有运动性第一百一十八张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月血清学凝集试验（1）沙门菌属诊断血清诊断血清规格：10种1套：主要供伤寒、副伤寒沙门菌初步诊断用。包括Vi及A-F群多价血清各1种；O因子血清4种；H 因子血清4种26种1套：主要供沙门菌常见菌型定群和初

37、步定型用。包括Vi及A-F群多价血清各1种；O因子血清9种；H 因子血清15种第一百一十九张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月57种1套：主要供沙门菌常见菌型定型用。包括Vi及A-F群多价血清各1种；O因子血清16种； O复合因子血清各1种；H 因子血清31种； H复合因子血清3种144种全套：供各型沙门菌诊断用。包括诊断各型沙门菌用的各种多价O、多价H血清和单因子及复合因子血清第一百二十张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月 群别菌种名称O抗原成分A甲型副伤寒杜雷佐变种(S. para Typhi A)2,12B里丁沙门菌(S. reading)4,12C1猪霍乱沙门菌13

38、50(S. cholerae-suis)6,7C2新港(纽波特)沙门菌(S. newport)6,8D1伤寒沙门菌0901(S. typhi)9,12E伦敦沙门菌(S. London)3,10F阿伯丁沙门菌 (S. aberdeen)11A-F群O多价血清的代表菌株根据沙门菌菌型调查结果，95%以上的沙门菌都属于A-F六个O群，常见菌型不过20个左右，因此沙门菌检验，主要是对A-F群沙门菌做出初步鉴定。按常规方法选用A-F群多价O血清。第一百二十一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月凝集试验方法二者比例适当，菌量过多过少均不易观察到正确结果。 阳性反应通常在3min内发生。血清效价低

39、反应迟缓时，应将玻片置培养皿内，放一个湿棉球，盖上皿盖，经约20min再观察结果。出现凝集现象的待检菌培养物，应以灭菌的生理盐水溶液代替A-F多价O血清，与培养物混匀做对照试验，对照应无凝集现象，方可判为阳性反应。A-F多价O血清稀释接种环沾取2-3环1.5cm0.5cm条形涂抹待检菌36 18-24h接种环刮取少许混匀第一百二十二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月 待检菌在生理盐水溶液中产生凝集，称自家凝集现象，这种现象多为S-R所致。 当A-F多价O血清凝集试验为阴性时，还应当考虑是否因为待检菌含有Vi抗原所致。第一百二十三张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月结果判断及报告（1）生化试验符合沙门菌属反应，沙门菌属A-F多价O血清凝集试验阳性反应，做出供试品检出沙门菌报告。（2）生化试验不符合沙门菌属反应，沙门菌属A-F多价O血清凝集试验阴性反应，做出供试品未检出沙门菌报告。（