人类白细胞抗原等位基因与HBV宫内感染关系

1、人类白细胞抗原等位基因与HBV宫内感染关系【关键词】乙型肝炎病毒；宫内感染；人类白细胞抗原DR等位基因(HLA-DR)摘要：目的研究人类白细胞抗原(HLA)-DR3、DR7、DR13、DR53等位基因与乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus，HBV)宫内感染的关系，讨论HBV宫内感染的遗传易感性，确定HBV宫内感染的易感基因和保护基因。方法采用聚合酶链反响/序列特异性引物(PR-SSP)技术检测HBsAg阳性孕妇及其新生儿各187例外周静脉血血块中HLA-DR3、DR7、DRl3、DR53等位基因型分布及频率。结果(1)宫内感染组孕妇HLA-DR3基因频率为2414(729)，显著高于非

2、宫内感染组孕妇的633(10158)(P=0007)。其余各表型比拟，差异无统计学意义(P005)。(2)宫内感染组新生儿HLA-DR3基因频率为1724(529)，显著高于非宫内感染组新生儿的506(8158)(P=0033)。其余各表型比拟，差异无统计学意义(P005)。(3)母婴HLA-DR3同阳性在宫内感染组与宫内未感染组间比拟差异有统计学意义(P=0049)；母婴HLA-DR7、DR13、DR53同阳性在宫内感染组与宫内未感染组间比拟，差异无统计学意义(P005)。结论HBsAg阳性孕妇及其胎儿同时或任一携带HLA-DR3，易导致HBV宫内感染；HLA-DR3是HBV宫内感染的易感基

3、因。关键词：乙型肝炎病毒；宫内感染；人类白细胞抗原DR等位基因(HLA-DR)AssiatinbeteenHLA-DRallelesandHBVintrauterineinfetinAbstrat：bjetiveTstudytheassiatinbeteenHLA-DR3,DR7,DR13,DR53andHBVintrauterineinfetintprbeintthesuseptibilitytintrauterineinfetinfhepatitisBvirusandtfinditspredispsinggenesandprtetinggenes.ethdsHLA-DR3,DR7,DR13

4、,DR53eredetetedbythetehniquefplyerasehainreatin-sequenespeifipriers(PR-SSP)inaternalandnenatalbldlt.Results(1)ThefrequenyfHLA-DRas24.14%inenithintrauterineinfetin,hihashigherthanthat(6.33%)inenithutintrauterineinfetin(P=0.007).ThereasnassiatinbeteenHLA-DR7,DR13,DR53psitiveinpregnantenandHBVintrauter

5、ineinfetin(P0.05).(2)ThefrequeneyfHLA-Rfnebrnsas17.24%inenithintrauterineinfetin,hihishigherthat(5.06%)inenithtllinfetin(P=0.033).ThereasnassiatinbeteenHLA-DR7,DR13,DR53psitiveinnebrnsandHBVintrauterineinfetin(P0.05).(3)ThereassignifiantassiatinbeteenHLA-DR3nrdaneandHBVintrauterineinfetin(P=0.049).T

6、hereasnassiatinbeteenDR7,DR13,DR53nrdaneandHBVintrauterineinfetin(P0.05).nlusinHLA-DR3arriersfpregnantenandthEirnebrnshavesuseptibilitytHBVintrauterineinfetin.HLA-DR3isthepredispsinggenefHBVintrauterineinfetin.Keyrds：HBV；intrauterineinfetin；HLA-DRantigen肝炎是一种严重危害人类安康的世界性传染病，我国是乙肝高发区，乙肝病毒的母婴传播不仅造成人群中

7、众多的HBsAg携带者，而且是引起成人慢性肝炎、肝硬化以及肝癌的重要因素。迄今，多数学者认为，人类白细胞抗原DR等位基因(HLA-DR)与乙型肝炎病毒(HBV)感染亲密相关，而HLA-DR等位基因与HBV宫内感染的关系争议较多。本文通过研究HLA-DR3、DR7、DR13、DR53与HBV宫内感染的关系，讨论HBV宫内感染的遗传易感性，为防制HBV宫内感染提供理论根据。1对象与方法11对象以2022年6月2022年11月太原市省各市级医院筛检，并在太原市传染病院妇产科进展产前检查及分娩的HBsAg阳性孕妇及其新生儿各187例作为研究对象。并根据新生儿有无宫内感染，分为宫内感染组(29例)和宫内

8、未感染组(158例)，2组在年龄分布、文化程度、职业构成等平衡可比。12方法121标本采集及处理搜集孕妇肘静脉血及新生儿出生24h内且未注射高效价免疫球蛋白(HBIG，hepatitisBiuneglbulin)的股静脉血各2l，4冰箱保存，6h内以4000r/in4离心15in，别离血清与血块，-20保存备检。122乙肝血清标志物检测采用酶联免疫吸附(ELISA)法，试剂盒上海科华实业总公司。123HBVDNA检测(1)HBVDNA提取：参考文献1，采用异硫氰酸胍一步法提取血清DNA；(2)HBVDNA的扩增：采用巢式聚合酶链反响(nPR)。124HLA-DR等位基因检测(1)人类基因组DN

9、A的提取十二烷基磺酸钠SDS蛋自酶K法提取血块基因组DNA。(2)HLA-DR等位基因扩增：参考文献2的引物设计采用聚合酶链反响序列特异性引物(PR-SSP)技术检测孕妇及其新生儿外周静脉血血块中HLA-DR3、DR7、DR13、R53基因型分布及频率。(3)PR产物的检测：取扩增产物510l，按5：1(V：V)与溴酚兰混匀，加样于15琼脂糖凝胶(含05gl溴化乙锭)板，在60V电压下泳动50in，紫外灯下观察结果。125新生儿HBV宫内感染诊断标准新生儿外周血血清HBsAg和/或HBVDNA阳性，即诊断为HBV宫内感染。13统计分析资料输入SPSS115软件进展统计分析；计算各指标的阳性率，

10、四格表2、Fisher确切概率、R值及R95%I。2结果21HBsAg阳性孕妇及其新生儿HLA-DR扩增图谱提取的血块DNA经PR扩增后呈现明显条带，与标准分子标记物arker条带比拟，确定HLA-DR基因型图1，2，3，4。DR3+：HBsAg阳性孕妇或其新生儿DR3阳性扩增产物，扩增产物片断长度为151bp;DR3-：HBsAg阳性孕妇或其新生儿DR3阴性扩增产物；：标准分子标记物(arker)图1HLA-DR3等位基因的PR扩增产物电泳结果略DR7+：HBsAg阳性孕妇或其新生儿DR7阳性扩增产物，扩增产物片断长度为232bp；DRT-：HBsAg阳性孕妇或其新生儿DR7阴性扩增产物；：

11、标准分子标记物(arker)图2HLA-DR7等位基因的PR扩增产物电泳结果略DR13+：HBsAg阳性孕妇或其新生儿DR13阳性扩增产物，扩增产物片断长度为130bp；DR13-：HBsAg阳性孕妇或其新生儿DR13阴性扩增产物；：标准分子标记物(arker)图3HLA-DR13等位基因的PR扩增产物电泳结果略DR53+：HBsAg阳性孕妇或其新生儿DR53阳性扩增产物，扩增产物片断长度为213bp；DR53-：HBsAg阳性孕妇或其新生儿DR53阴性扩增产物；：内对照注：DR53引物与内对照引物可能发生了引物间的错配等，故分管同时扩增图4HLA-DR53等位基因的PR扩增产物电泳结果略22

12、HLA-DR与HBV宫内感染的关系221孕妇HLA-DR等位基因分布及频率比拟表1宫内感染组孕妇HLA-DR3基因频率明显高于宫内未感染组，经检验，差异有统计学意义R=4709,P=0007；HLA-DR7、DR13、DR53基因频率在宫内感染组与宫内未感染组孕妇比拟，经检验，差异无统计学意义P005。表1宫内感染组与宫内未感染组孕妇HLA-DR基因分布及频率比拟略注：*为fisher确切概率法计算结果222新生儿HLA-DR等位基因分布及频率比拟(表2)宫内感染组新生儿HLA-DR3基因频率明显高于宫内未感染组，经检验，差异有统计学意义(R=3906，P=0033)；HLA-DR7、DR13

13、、DR53基因频率在宫内感染组与宫内未感染组新生儿比拟，经检验，差异无统计学意义(P005)。223母婴HLA-DR等位基因同阳性分布及频率比拟表3母婴HLA-DR3同阳性在宫内感染组与宫内未感染组间比拟，经检验，差异有统计学意义R=596,P=0049，母婴HLA-DR7、DR13、DR53同阳性在宫内感染组与宫内未感染组间比拟，经历验，差异无统计学意义P005。表2宫内感染组与宫内未感染组新生儿HLA-DR基因分布及频率比拟略注：*为fisher确切概率法计算结果表3宫内感染组与宫内未感染组母婴HLA-DR同阳性分布及频率比拟略注：*为fisher确切概率法计算结果3讨论Kilpatrik

14、D3的研究发现，HLA-A3是人类免疫缺陷病毒(HIV)宫内感染的保护基因，HLA-DR3是HIV宫内感染的易感基因。BsiL等4采用Lgisti回归分析发现，HLA-DR13与发生HV宫内感染呈负相关，即HLA-DR13是HV宫内感染的保护因素。在母亲同时感染HIV者中，HLA-DR13和HIV同时感染在HV宫内感染的发生中具有独立而相反的作用，即HLA-DR13是HV宫内感染的保护因素；HLA-DR13表达在未发生HV，宫内感染和发生了HV宫内感染者的R值为84(95I=11608)，且母乳喂养不影响该HV宫内感染的危险度。王素萍等5以HBsAg阳性孕妇新生儿为研究对象，随机选择发生及未发

15、生HBV宫内感染的新生儿各20例，应用试剂盒提供的序列特异性引物(sequenespeifipriers,SSP)采用PR-SSP技术扩增HLA-DR基因区18对等位基因，断定HLA-DR抗原的型别，计算HLA-DR抗原各型别出现频率并分析其在2组间的差异，发现DR3、DR51在宫内感染组的频率较高，分别为45，40。在非宫内感染组分别为20，15，P值分别为018，016。DR53在非宫内感染组的频率较高，为60，在宫内感染组为35。推测HLA-DR3、DR51可能是HBV宫内感染的易感型，而DR53有可能是具有保护作用型别。刘海英等6采用PR-SSP法合成相应的特异性引物序列，对HLA-D

16、R3、DR4、DR13、DR15进展研究。结果显示，宫内感染组孕妇HLA-DR3的基因频率为50，显著高于宫内未感染组的147(RR=58，2=490,P005)，其余各基因表型比拟，差异无统计学意义；宫内感染组新生儿HLA-DR3的基因频率为30，明显高于宫内未感染组的74，但差异无统计学意义(P005)，提示孕妇或胎儿携带HLA-DR3，易导致HBV宫内感染，即孕妇或胎儿HLA-DR3阳性是HBV宫内感染的易感基因。本文同样采用PR-SSP技术研究HLA-DR特异性等位基因与HBV宫内感染的关系。结果说明，HBsAg阳性孕妇及其胎儿同时或任一携带HLA-DR3，易导致HBV宫内感染；HLA

17、-DR3是HBV宫内感染的易感基因。提示在防制HBV宫内感染时不能无视人类遗传因素的作用，应采取综合措施防制HBV宫内感染。参考文献1向海平，郭雁宾，孟庆华，等.聚合酶链反响定量检测乙型肝炎病毒DNA及其临床意义分析J.中华实验和临床病毒学杂志，1999，131：89-90.2lerup,ZetterquistH.HLA-DRtypingbyPRaplifiatinithsequenespeifipriers(PR-SSP)in2hurs:analternativatserlgialDRtypinginlinialpratieinludingdnr-reipientathinginadaveritransplantatinJ.TissueAntigens,1992,39:225-229.3KilpatrikD,HagueRA,YapPL,etal.HLAantigenfrequeniesinh