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文档简介

1、Word文档 初代细胞培养实验 初代培育或原代培育，是从供体猎取组织后的培育。组织和细胞刚刚离体，生物性状尚未发生很大的变化，具有二倍体遗传性状，在供体来源充分、生物条件稳定的状况下（年龄、性别），在肯定程度上能 反 映体内状态。 试验方法原理 消化培育法 合成培育基胰蛋白酶消化培育法，能把组织块分散成细胞团或单个细胞，便于细胞从培育液中摄取养分和排出代谢产物，细胞能较快地长成单层。 本法尤适用于培育大量组织，细胞产量高；但用于常常性小量培育工作稍显繁琐，无菌操作不良时且易污染。 试验材料 组织 试剂、试剂盒 Hanks 培育液 胰蛋白酶 仪器、耗材 吸管平皿培育瓶烧杯搅拌器三角烧杯 眼科剪眼

2、科镊 计数板 试验步骤 1. 预备 取各种已消毒的培育用品置于净化台面，紫外线消毒20 分钟； 2. 布局 点燃酒精灯（或煤气灯），安装吸管帽（应通过火焰）； 3. 处理组织 把组织块置入烧杯中，用Hanks液漂洗23 次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中3060 分钟； 4. 剪切 用眼科剪把组织块切成23 毫米大小的块（用手术刀割亦可），以便于消化；加入比组织块总量多3050 倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞； 5. 消化 或用恒温水浴，或置入37 温箱消化均可，消化中每隔20 分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好（消化前瓶中需置

3、一无菌搅棒）；消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定； 6. 分别 在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观看，如组织已分散成细胞团或单个细胞，马上终止消化，随即通过相宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块（必要时可连续进行消化）；低速 （5001000 转/分）离心消化液5 分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培育液（如有其它酶或EDTA 等消化，需用Hanks液洗脱一两次后，再加入培育液）； 7. 计数 用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培育液调整后，分装入培育瓶中；对大多数细胞来说，pH 要求在7.27.4范围，培育液呈微红色，如颜色偏黄，说胆液体变酸，可用NaHCO3调整； 8. 培育 置入36.5 温箱培育；

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