STZ诱导的糖尿病鼠视网膜β连环蛋白表达上调

1、STZ诱导的糖尿病鼠视网膜-连环卵白表达上调李养军惠延年王雨生【摘要】目的:探究链脲霉素Streptztin,STZ诱导的糖尿病鼠视网膜-连环卵白-atenin表达以及与早期糖尿病视网膜病变生长的大概干系。要领:创立STZ诱导的糖尿病大鼠模子，用伊文思蓝检测视网膜血管的渗出性；免疫构造化学和esternblt要领检测糖尿病鼠视网膜及胰卵白酶消化的视网膜微血管-连环卵白的表达环境。效果：糖尿病诱导4、8和12k后视网膜血管渗出性别离增长68%、91%和125%P0.005。免疫组化阐发证明比拟组视网膜-连环卵白重要表达在视网膜光感觉器、外网状层、内网状层、神经节细胞层、内界膜及视网膜微血管内皮细

2、胞和周细胞。STZ诱导糖尿病大鼠12k后，视网膜及视网膜微血管-连环卵白表达明显增长。esternblt阐发证明随着糖尿病视网膜病变的生长，视网膜-连环卵白表达明显增长。结论：STZ诱导的糖尿病视网膜-连环卵白的表达增长，提示-连环卵白大概到场早期糖尿病视网膜病变的产生。【关键词】-连环卵白糖尿病视网膜病变StreptztinInreasedexpressinf-atenininthestreptztin-indueddiabetiratretinaAbstratAI:Tstudytheexpressinf-atenininstreptztin(STZ)-indueddiabetiratret

3、inaandthepssiblerelevanef-ateninintheearlystagefSTZ-indueddiabetiretinpathy.ETHDS:VasularpereabilityasquantifiedbyeasuringalbuinleakagefrbldvesselsinttheretinausingtheEvansblueethd.ThedelfSTZ-indueddiabetiratassetup.-ateninexpressinaseasuredinbthnralandSTZ-indueddiabetiratretinasandretinalirvesselus

4、ingiunhistheistryandesternbltanalysis.RESULTS:Retinalvasularpereabilityasinreasedby68%,91%and125%inthe4-,8-and12-eekdiabetiretinas,respetively,parediththatinthentrls(P0.005).Iunhistheistryshedtheexpressinf-ateninasdetetedandlalizedtthephteptr,uterplexifrlayer,innerplexifrlayer,ganglinelllayer，intern

5、alliitingebraneandirvesselfratretinas.Hever,theexpressinf-ateninassignifiantlyinreasedinSTZ-indueddiabetiratretinasiththeprgressinfdiabetes.NLUSIN:Theinreasedexpressinf-ateninintheretinasfSTZ-indueddiabetiratayrefletthat-ateninpartiipatesinthedevelpentfdiabetiretinpathy.KEYRDS:-atenin;diabetes;retin

6、pathy;streptztin0弁言糖尿病视网膜病变是引起糖尿病视力损害严峻的并发症，也是紧张的致瞎眼玻其早期损害的标记是视网膜微血管周细胞凋亡、血视网膜屏蔽的粉碎、血管渗出性增长和希望性的血管闭塞。如今详细的发病机制仍旧不明晰。迩来的研究创造，N-钙粘卵白簇生在差异构造微血管内皮细胞和周细胞之间的黏附毗连及视网膜构造，对内皮细胞和周细胞之间彼此作用起关键的作用，且对血管的成熟和不变起决定性作用1-3。-连环卵白-atenin调控钙粘卵白介导的黏附保持，钙粘卵白的细胞质域羧基端结合到-连环卵白，依次与-连环卵白和肌动卵白细胞骨架相接洽。这些彼此作用对正常的黏附体系的活性至关紧张，由于-连环卵

7、白对钙粘卵白布局组成和成效方面起紧张的作用。但是如今为止没有关于-连环卵白在糖尿病视网膜病变中的作用的相干证据。探究-连环卵白在STZ诱导的鼠糖尿病视网膜中的表达及其对糖尿病视网膜病变的大概性作用大概有助于深化相识糖尿病视网膜病变的发病机制。1质料和要领1.1质料糖尿病大鼠模子的创立，雄性S-D大鼠第四军医大学实行动物中央，饥饿8h后称重量约重量约25015g，随机分派到比拟组n=30，糖尿病组n=30。大鼠分笼豢养，每笼4只，无穷制的尺度鼠食和水,豢养场合透风精良，室温1825，相对湿度40%70%，12h光照昼夜循环。大鼠禁食12h后，轻度麻醉(氯胺酮40g/kg),按70g/kg剂量1次

8、ip溶解在0.05l/L，pH4.5，灭菌枸橼酸盐缓冲液，含量为20g/L的STZ(Siga公司)，利用前暂时设置。注射7d后经大鼠尾静脉穿刺取全血查抄空腹血糖，血糖15l/L以上者为糖尿病大鼠模子创立乐成。正常大鼠担当1次ip0.05l/L等体积枸橼酸盐缓冲液作为比拟组。以后每周监测血糖和重量。1.2要领统计学处置惩罚：全部实行数据用表现，用Preier5.0统计阐发软件，两组均数比力用t查验，P0.05以为有明显差异。2效果2.1大鼠体质量和血糖程度的变革STZ诱导的糖尿病大鼠体重明显减轻与比拟组比拟(P0.05)，12k后糖尿病鼠体23614.1g(n=30)。比拟组数体质量为49610

9、.2g(n=30).图1A。STZ诱导的糖尿病大鼠血糖程度明显升高与比拟组比拟(P0.05)，糖尿病诱导12k后血糖为30.24.8l/L(n=30)，比拟组血糖为4.90.12l/Ln=30)图1B。图1STZ诱导的糖尿病大鼠体质量和血糖的变革2.2STZ诱导的鼠视网膜微血管渗出性视网膜血管渗出性丈量用伊文思蓝要领。与比拟组比拟，糖尿病诱导4、8和12k后视网膜血管渗出性别离增长68%、91%和125%。图2糖尿病诱导的视网膜血管渗出性变革图中N、D4、D8和D12别离代表比拟组、糖尿病诱导后4、8和12k视网膜血管渗出性。*P0.005与比拟组,*P0.005与比拟组和糖尿病4k,*P0.

10、005与比拟组和糖尿病4k和8k。2.3STZ诱导的鼠视网膜-连环卵白表达免疫组化阐发效果表白，STZ诱导的糖尿病大鼠12k后，视网膜-连环卵白的表达较比拟组明显增长，-连环卵白的免疫反响性重要漫衍在光感觉器、外网状层、内网状层和神经节细胞层及内界膜图3。阴性比拟组无表达。图3视网膜-连环卵白表达SAB200A：比拟组；B：糖尿病鼠12k2.4STZ诱导的鼠视网膜微血管N-钙粘卵白表达视网膜血管消化铺片免疫构造化学染色创造比拟组视网膜血管表达-连环卵白，免疫组化染色漫衍在周细胞和内皮细胞图4A。STZ诱导的糖尿病大鼠3后视网膜血管消化铺片免疫构造化学染色-连环卵白表达明显增长图4B。图4胰卵白

11、酶消化的视网膜微血管-连环卵白表达SAB200A：比拟组B：糖尿病组2.5STZ诱导的鼠视网膜-连环卵白程度为了进一步证明STZ诱导的糖尿病鼠视网膜在差异阶段-连环卵白程度的变革，esternblt阐发效果表现糖尿病视网膜N-钙粘卵白在4、8和12k较比拟组别离淘汰13.2,15.8,35.1图5。图5鼠视网膜-连环卵白阐发N、G4、G8、G12别离代表比拟组、糖尿病4、8和12k，条带的分子量为92kDa，-atin为内参照。*P0.05与比拟组比拟3讨论糖尿病视网膜病变是糖尿病患者眼部视网膜微血管疾病，早期病理改变是视网膜微血管周细胞凋亡、血视网膜屏蔽的粉碎，血管渗漏，导致这些改变的重要因

12、素是高血糖6-8。我们通过免疫组化证明正常大鼠视网膜表达-连环卵白，重要漫衍在视网膜光感觉器、外纵状层、内纵状层、神经节细胞层、内界膜及视网膜微血内皮细胞和周细胞。STZ诱导的糖尿病大鼠，视网膜及微血管-连环卵白表达明显增长，初次证明高血糖对视网膜及微血管-连环卵白的表达具有显着的影响。esternblt阐发表白随着糖尿病视网膜病变的生长-连环卵白的表达明显增长。我们同样证明随着糖尿病视网膜病变的生长，视网膜血管渗出性明显增长。STZ诱导的糖尿病血视网膜屏蔽的粉碎最早产生在糖尿病诱导后8d9，进一步说明-连环卵白的表达增长到场早期糖尿病血视网膜屏蔽的粉碎和视网膜的成效停滞。血视网膜屏蔽的完备性

13、是由精细毗连和黏附毗连组成的密封的毗连复合体和肌动卵白细胞骨架决定的。钙粘卵白-连环卵白复合体毗连到肌动卵白细胞骨架10和与细胞外基质和细胞质分子包罗细胞骨架和催化信号分子彼此作用的整合卵白介导的黏附毗连给细胞-细胞和细胞-细胞外基质的彼此作用提供强有力的保障11。钙粘卵白-连环卵白复合体不但作为黏附毗连并且作为细胞四周环境的生物传感器按照团体器官的必要促进细胞监视有关相邻细胞的堆积和定位来调控细胞生物学举动的12。钙粘卵白介导的黏附保持的调控是由与钙粘卵白细胞质域彼此作用的连环卵白操纵的。钙粘卵白的细胞质域羧基端毗连到-连环卵白，依次与-连环卵白和肌动卵白细胞骨架相接洽。这些彼此作用对正常的黏附体系的活性至关紧张，由于-连环卵白对钙粘卵白布局的组成和成效方面起关键的作用。因此-连环卵白的表达增长到场早期糖尿病视网膜血视网膜屏蔽的粉碎和视网膜的损伤，大概通过所调控的黏附毗连产生改变，尤其使视网膜微血管内皮细胞和周细胞之间彼此作用及与细胞外基质的彼此作用产生改变，细胞肌动卵白细胞骨架重构，使视网膜血管屏蔽粉碎；大概由于-连环卵白的表达增长与周细胞的成效停滞和