同济医院检验科ISO15189体系文件16.高铁血红蛋白还原试验

1、同济大学附属同济医院检验科血液组项目操作指导书TJYYJYKMY/XMZ116第2版标题: 高铁血红蛋白还原试验第1章 第16节第 PAGE 3 页 共 NUMPAGES 3 页 目的：保证高铁血红蛋白还原试验结果准确、可靠。 适用范围：高铁血红蛋白还原试验检测 项目名称：高铁血红蛋白还原试验 检测方法：光电比色法5 原理：亚硝酸钠使血液中的亚铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白。如果红细胞内6-磷酸葡萄糖脱氢酶活力正常，可通过磷酸戊糖旁路形成NADPH，在递氢体美兰的参与下，它作为高铁血红蛋白还原酶的辅酶，使褪色的高铁血红蛋白还原成无色的亚铁血红蛋白。如果G6PD缺乏，NADPH形成障碍，高铁血红蛋

2、白还原成亚铁血红蛋白的速度较正常人慢，通过测定高铁血红蛋白的还原速度间接反映G6PD活性。6 试剂6.1 品牌：亚硝酸钠 上海振兴试剂厂葡萄糖 上海试剂二厂美蓝 上海试剂三厂磷酸二氢钾 上海试剂二厂氢氧化钠 上海试剂二厂氯化钠 南汇化工厂6.2 货号：亚硝酸钠 13-0010801220葡萄糖 13-2010236789II美蓝磷酸二氢钾 13-001-0802-114II氢氧化钠氯化钠 13-0010832218II6.3 包装规格：亚硝酸钠 50g/瓶葡萄糖 500g/瓶美蓝磷酸二氢钾 500g/瓶氢氧化钠氯化钠 500g/瓶6.4 内含物：0.18mol/L亚硝酸钠葡萄糖溶液：新鲜配制，

3、保存在冰箱亚硝酸钠1.25g葡萄糖 5g加至100ml0.15g/L美蓝盐水溶液：1.5g/L美蓝水溶液10ml生理盐水90ml0.02mol/L磷酸盐缓冲液：磷酸二氢钾1.36g0.19M氢氧化钠17.68ml蒸馏水加至500ml生理盐水（.0g/L氯化钠溶液）7 仪器：光电比色计或分光光度计；水温箱。8 操作步骤:8.1 标本：前缀为05真空条码管采集的抗凝血。8.2 以转分离心分钟，调整血细胞与血浆比例约为：相当于红细胞比积，摇匀。8.3 取支.5cm试管，加入.18mol/L亚硝酸钠葡萄糖溶液0.05ml，0.15g/L美蓝盐水溶液0.15ml和被检者血液1ml颠倒混合15次，使之与氧

4、充分接触，用软木塞塞住，37水温箱温育3小时。 8.4 取三支10 x1.5cm试管，一管为测定管，一管为空白对照管，另一管为100%高铁血红蛋白管，按下表操作：ml测定管空白对照管100%高铁血红蛋白管0.02mol/L磷酸缓冲液.0.18mol/L亚硝酸钠葡萄糖溶液.被检者温育后血液.被检者未孵育血液.颠倒混合数次，室温置分钟，以转分离心分钟，用上清液比色。8.5 结果计算：高铁血红蛋白还原率（）测定管值高铁血红蛋白值%9 线性范围：无10. 参考范围：高铁血红蛋白还原率。11 临床意义:高铁血红蛋白还原率75%主要见于红细胞G6PD缺陷症，为纯合子为杂合子。12 病人准备标本要求：无溶血无脂血13 注意事项:13.1 贫血患者的红细胞比积应调整在。13.2 草酸盐具有还原性，故不宜作抗凝剂。13.3 美蓝水溶液配制中美蓝要研磨至完全溶于水才能应用，用前并予以过滤。13.4 孵育后血液要充分混匀，然后再按下步骤操作。13.5 如果溶血液显示浑浊，影响比色，可能是不稳定血红蛋白存在或患者患有地中海贫血，前者可离心后用上清液比色，后者可加入1g/L白皂素1滴，放置1015分钟，待其红细胞溶解后再比色。13.6 血液与反应试剂的比例要严格