分析仪器、试剂分析师认证讲座（5）小川 善資

1、生物試料分析Vol. 35, No 5 (2012)資料：分析機器試薬認定講座（）新精度管理法提案（）小川 善資1. 管理図種類管理図作成、正確度理可能新精度管理法提案。管理図一測定値“正確”保持“精密”確保検査技師自身医療関係者（主医師）伝管理図、従来 x -管理図近。新 x -管理図呼。一方検査担当検査技師自身管理図、分析機器試薬管理図。分析機器試薬異常早期見、誤測定値報告管理図。言、種類管理図、広報用管理図検査担当者管理図。管理図書意味、努力精密度対達成度確認試薬分析機器管作成、効果上、充分理解、応用、改善。2. 管理法概念管理表作成正確度、分析機器試薬管理図測定値捉方、考方若干相違点。

2、、新 x -管理図種類分析機器試薬管理図紹介。酵素活性測定酸（AST）活性測定法物質濃度測定法測定法例取、解説。精密度表現管理図酵素活性測定法物質濃度測定法同一図2-1. 酵素活正確度精密度確認新 x -管理図従来 x -管理図近管理図。、正確明確方策加。分析機器試薬管理図同様。方法性測定法管理概念度種管理試料用、管理試料酵素標準物質（ERM）持標示値。値距離明確示方法。一分析機器試薬管理図示、分析理論導反応速度正確度方法。、新 x -管理図、TonksBarnett提案許容範囲日常管理直接導入、許容範囲決超範囲明確。別診療医検査携人意見、検査室許容範囲定。範囲内測定値実際測定値（反応速度）差

3、対比、管理。日常検査考上、干渉反応受測定値提出一番罪深誤差。特原因良分発生干渉補正、正確測定値比較。分析基本様問題発生、試薬検体必測定、差引。、現状臨床検査北里大学医療衛生学部臨床化学研究室252-0373 神奈川県相模原市南区北里1-15-1 431 生物試料分析検体取一般的。経済的問題分析機器上問題、今後検体測定思。、問題対処様試薬上工夫測定操作法上工夫。、機能円滑働。具体的言、AST、ALT活性測定時試料中存在酸（酸限、LD反応物質）生正誤差試薬LD加、第試薬（R-）試料加一定時間反応回避。、性能保、日。他、原因分問題、測定値歪可能性。全問題発見不可能、現状正必要 思。、活第試薬（R-）

4、添加前反応速度測定、測定値吟味。酵素反応直理由様原因、同試薬、同試料用、同曲線。同反応曲線場合分析機器、試薬何異常発生推定。簡単、本来反応速度測定後、一度吸光度化測定、両者比監視方法提案。性測定時反応速度測定、本来測定反応始前、線的進行。、反応時間従緩。変2-2. 物質濃度物質濃度測定酵素活性測定法同様、正確度精密度確認管理図種。一管理試料認定標準物質（CRM）標示値。値距離明記。、分析機器試薬管理図分析理論導数値（吸光度化量）実際測定値（吸光度）対比正確度対距離確認方法。物質定量、干渉反応大問題。、検体取考同。干渉反応確実消去日、R-添加前後吸光、干渉反応有無。、法測定場合、吸光度測定時反応

5、終了。反応終了場合、何問題発生推定1)測定管理概念変度。2-3. 酵素活性測定法準備（AST活性測定例）管理行前、次準備行下。1. 選択2. 管理試料B（分析機器試薬管理用試料）作成3. 管理試料A（新 x -管理図作成用試料）選択4. 、管理試料AB活5. R-添加前反応速度可能6. R-添加後、地点反応速度可能現在使用結構、型酵素使用推奨。管理試料A新 x -管理図作成用試料。臨床医精度求活性試料市販管理血清選下。管理試料AERM標示値表示値差比。大乖離試料避下。管理試料B分析機器試薬異常早期発見試料。AST活性測定試薬異常発生場合、最影響出活性測定上限付近2)。設定測定条件（下記測定操作

6、法、分析機器性能参照下）分析最大反応速度0.25/min、測定上限約1,900 U/L。管理試料上限近1,5001,800 U/L付近適、管理試料B活性1,500 U/L。、検体性確認 432 生物試料分析Vol. 35, No 5 (2012)干渉除去試料作成。分析機器R-添加前速度測定下。今回例測定操作法分析機器性能記。（AST活性測定操作法）反応速度測定下。、AST活性測定後、一度反応測定試薬日本臨床化学会勧告法準拠試薬用、反応2-oxoglutarate、10lR-190l反応管入、37分間加温、R-50l添加撹拌。分後30秒間吸光度変化量測定、変化量AST活性計算。30秒後（反応分後

7、）30秒間吸光度変化量測定。（分析機器性能）分光器干渉用、340 nm測定光半値幅14 nm、光路長3.3 mm、光路長1.0 cm測定値表示、勧告案示分析機器仕様満足。具体的吸光度0.001/時以下、吸光度1.8付近0.0004以下、分注精度問題、1.0以下。吸光度測定340 nm行、使用分析装置NADH吸光係数求、見吸光係数6.0103l/mol/cm。（管理試料B作成法）3.0 g/dl-入PIPES緩衝液（H 7.3）溶液1.0 mmol/l 酸、2.0 mmol/l 2-hydroxy酪酸豚肝臓由来AST1,500 U/L添加。精製酵素活性失活、約倍程度高活性入PIPES緩衝液調整、

8、倍釈活性測定。活性、目的活性希釈倍率計算直、酵素希液添加混和。酵素液標準用3)。管理試料A適切市販品見場合、同様方法作成。2-4. 物質濃度測定法準備（測定例）物質定量、次準備行下。1. 選択2. 管理試料B（分析機器試薬管理用試料）作成3. 管理試料A（新 x -管理図作成用試料）選択4. 、管理試料AB活5. R-添加前後吸光度測定可能6. 吸光度測定時反応速度可能管理試料A新 x -管理図作成用試料。臨床医最精度要 求濃度0.91.1 mg/dl付近。、管理試料A濃度域入市販管理試料選択下。一方、管理試料B分析機器試薬異常早期発見試料。場合、測定試薬次課題克服課。性確認中存在濃度影響。試

9、料中存在還元物質影響受。所定反応時間反応終了。課題日管理求。監視管理試料B作成。具体的、影響出試料（高値、低値試料）測定、影響見高血清R-添加前後吸光度変化量下。、吸光度測定時吸光度変化量測定下。、高酸血清用。、反応測定点監視易、今回例測定操作法分析機器性能記。 433 生物試料分析R-吸光度R-正確度1共役酵素 A/min（B） 機器 A/min（A）（C）（B）検体反応 A/min（C） 時 間図測定点管理目的表AST活性測定管理表管理月平成25年2月管理試料：A社製管理試料 BLot No. 0001Exp. 16. 3. 30分析装置：C社製001型自動分析装置試薬：5 l担当者名月/

10、日 測定値精度管理開始Blank Abs A/min（A） A/min（B） A/min（C）速度比試料A/ A/min（A） A/min（B） A/min（C）（月）速度比試料B A/min（A） A/min（B） A/min（C）速度比（測定操作法）試薬用酵素法、反応分終了。発色用過酸化水素発色法、発色物質極大吸収550 nm、吸光係数6.0410 l/mol/cm（発色物質半値幅80 nm）、分子過酸化水素分子発色体生成。量10l、R-190l、R-50l。（分析機器性能）分光部干渉用、550 nm測定光半値幅8 nm。測定最大吸光度3.0、最小吸光度0.01、分析分解能0.001。装置

11、用見吸光係 434 生物試料分析Vol. 35, No 5 (2012)l/mol/cm。数測定、6.010（管理試料B作成法）43.0 mg/dl- 入PIPES緩衝液（pH7.3）、0.4 mg/dl 、10 mg/dl 、4.0 mg/dl 、20 mg/dl 酸添加、管理試料B。酸安定性良、保存場合80凍結保存、用事溶解使用。2-5. 酵素活管理表精度管理行上雑記帳。分析関様情報記述、全出来事書留下。、酵素活性測定時、測定反応速度図示。性（AST）測定精度管理表作成通常、病院分析患者試料測定始前試料測定行、測定値問題確認後、患者試料測定入思。管理法、同様順 序進下。今相違、管理試料種類

12、増考下。第測定点R-試料混和時生検体（主試料中酸LD反応物質、LDR-中LDNADH発生NADH減少反応）終了測定。測定分析機器上、許最遅 設定下。、時点反応発生。、反応R-添加試薬性能正作動判断、監視物質（2-hydroxy酪酸）管理試料B添加、監視。、精製水、管理次、R-添加後吸光度。A/min(B)A/min(A)引算反応速度求。、管理試料AB既知活性計算求吸光度変化速度測定反応速度比較。計算値一致正測定行推定。例、活性200 U/L、管理試料A60 U/L、管理試料B1,500 U/L、計算上反応速度次計算。、使用分析装置NADH見吸光係数求、6.010 l/mol/cm。変化量測定。

13、通常酵素活性測定点測定3 A/ min200 10見 SVTVA 250 106.0 10443 10A/min 0.0240/min同様、管理試料A0.0072/min管理試料B0.1800/min計算下誤差一致問題、患者検体測定入。精度管理表記入下。一番最初精製水AST活性測定、時A/min(A)表一番上。計算値以記入。次、精製水測定時A/min(B)記入。試薬大。反応次記反応測定。LD (2-hydroxyglutarate dehydrogenase)2-oxoglutarate NADH 2-hydroxyglutarate NADR-添加LD基性、試薬添加LD由来添加量変限、一定活

14、性示。大場合、試薬何異変発生可能性、試薬進質特異性低LD自身持2-hydroxyglutarate dehydrogenase活下。次管理試料A測定測定値（A/min(A)、A/min(B)A/min(C)）測定値記入。A/min(A)0.0001/min以下（計算上、吸光度変化量0.00024/min1.0 U/L。検体測定、差引測定方採用、1.0 U/L以 435 生物試料分析下正確度A/min(B)/A/min(C)比求、記入。比酵素反応直線性。同AST反応実施、比変化発生、MD活性低下測定、以上活性生許）。次比次第大可能性。次管理試料B測定測定値（A/min(A)、A/min(B)A/

15、min(C)）測定値記入。試料A/min(A)反応速度表。理由LD反応、酸反応2-hydroxy 酪酸添加。全反応表時LD添加量過剰。次A/min(B)試薬劣化（MD劣化NADHI-1I-2生成原因）低下。計算上求反応速度低場合、試薬法進、本当問題発生、発生対策立考下。次A/min(B)/A/min(C）比求、記入下。比所定比、変化場合試薬法進下。以上、問題進行、患者検体測定入問題。日測定実施。、一日最後一度、精製水、管理試料A、管理試料B測定行管理表記入下。検体数多、正測定実施心配時管理試料A、管理試料B適時測定下。一度試薬吸光度変化試薬吸光度変化試薬劣化表指標一。NADH各種強阻害剤I-1

16、I-2変化、吸光度変化示。、各点記述。試薬試薬中添加LD、NADH2-oxoglutarate者340 nm減少反応見。、試薬恒小試薬異変示可能性。試料A試薬BR-反応速度（検体）試薬加LD、内因性反応物質除去、AST活性干渉与設計。反応正作動監視、試料B反応性悪2-hydroxybutyrate添加。反応速度（A/min(B)）見、試薬異常監視。一方、試料A正常血清成分存在、生(A/min(A)）。生試薬異常。正確度、試料AB活性分。、測定反応速度（A/min(B)）計算上算出。計算値測定値一致観察。正確度、試薬分析機器。A/min(A)A/min(B)計算試薬常性反応大一定。大、上A/mi

17、n試薬中最安定性悪共役酵素MD、干渉除去用添加LD補酵素NADH点。、共役酵素MD劣化。MD劣化場合、低活管理試料B測定。、MD失活場合、発生、反応直線性考方多、MD失活反応曲線曲。反応直線性、MD劣化発見。試薬性検体測定問題生、高活性検体測定値低下。目的同様LD活性劣化知必要 。管理試料酸多添加、影響有無監視、正誤差発生確認良、影響出不安感 436 生物試料分析Vol. 35, No 5 (2012)可能性、必反応速度監視、2-hydroxy酪酸加、LD持2-hydroxybutyrate dehydrogenase活性測定、試薬監視行。市販試薬中LD過剰添加試薬。場合試薬大、。、NADH劣

18、化場合、見。反対、試薬異常見、NADH問題MD、LD問題区別。以上監視。分析機器管理思、理論一致度加、他全出可能。2-6. 物質定量法（測定）管理表物質濃度下。管理試料A診療医最高精度測定期待濃度血清近管理試料望。、Barnett提唱、独自腎臓機能障害生否境界領 域0.91.2 mg/dl付近濃度選択定量時管理法記述。、管理試料A選択提唱。一方管理試料B目標試薬性能保持試料作成、使用。試薬次約束。性能維持日。内因性影響受。干渉物質影響受。所定時間内反応終了。、反応曲線図示。測定試料中存在、消去、後、発生過酸化水素発色体生成反応導必要 。消去十分、正誤差発生可能性、反応充分停止負誤差引起。、低、高、影響監視易。、酸過酸化水素発色反応前回避極難考4)。、発色反応初期吸光度変化観察。急速発色、発色反応直立上場合、何問題発生消去影響吸光度2 A/min（B）試料R-R- A/min（A）1 干渉 時 間図測定 437 生物試料分析表測定管理表管理月平成25年2月管理試料：A社製管理試料 BLot No. 0001Exp. 16. 3. 30分析装置：C社製001型自動分析装置試薬：D社10 l担当者名月/日 測定値精度管理開始Blank Abs精製水0.002 A/min（A）Abs 1 A/min（B）試料A/ A/m