银杏叶提取物对大鼠慢性高眼压视网膜损伤的保护作用

1、银杏叶提取物对大鼠慢性高眼压视网膜损伤的保护作用【摘要】目的：讨论银杏叶提取物EGb对实验性高眼压大鼠视网膜神经节细胞层RGL神经元损伤的保护作用。方法：取安康SD大鼠60只，正常对照组和正常银杏叶治疗组各6只，其余48只采用烧烙法，烙闭大鼠左眼2条浅层巩膜静脉，制作大鼠持续性高眼压模型，从中选出眼压稳定在实验要求程度的大鼠30只，随机分为生理盐水组，治疗A组每日EGb50g/kg、治疗B组每日EGb100g/kg、治疗组每日EGb150g/kg、治疗D组每日EGb200g/kg，治疗时间为1，处死大鼠后做视网膜全层铺片，对RGL神经元做特异性染色后行神经元计数分析来评估神经元的情况。结果：正

2、常对照组双眼RGL神经元计数比拟无显著性差异P0.05，正常对照组与正常EGb治疗组RGL神经元计数比拟无显著性差异P0.05，各浓度EGb治疗组实验眼与正常对照组RGL计数比拟均有显著性差异P0.05，各浓度EGb治疗组实验眼与其自身对照眼RGL神经元计数均有显著性差异P0.05，各浓度EGb治疗组实验眼与生理盐水组实验眼RGL神经元计数均有显著性差异P0.05，治疗A，B，D4组实验眼RGL神经元计数两两比拟均有显著性差异P0.05。结论：单独使用EGb对正常大鼠RGL神经元计数无影响，EGb可对持续慢性高眼压导致的大鼠RGL神经元损伤提供部分保护作用，且在一定范围内保护作用大小与用药剂量

3、呈正相关。【关键词】银杏叶提取物大鼠高眼压神经保护PrtetiveeffetfextratfginkgbilbaleavesnretinalneurninjuryinhrnihighintraularpressureratsKEYRDS:extratfginkgbilba;rats;highintraularpressure;neurprtetin0引言青光眼是一组由许多因素引起的以视神经凹陷性萎缩和视野缺损为共同特征的疾病，其中病理性眼压升高是最主要的危险因素。所以临床上的治疗方法大都以降低眼压为主，但是眼压降低以后，很多时候视神经仍就进展性损害，视网膜神经节细胞层神经元最终仍将凋亡，因此找

4、到一种能保护RGL神经元的药物，延缓和减少神经元的凋亡，有效保护视神经，已经成为了当今青光眼研究的焦点和热点。银杏叶提取物extratfginkgbilbaleaves，EGb是从植物银杏叶中提取精制而成的纯天然药物。其主要成份为黄酮类和萜内酯化合物，还含有有机酸、多糖、酚类、氨基酸、聚戊烯醇、甾类和微量元素等。近年来许多研究都已证明EGb具有去除自由基、抑制血小板活化因子、抑制一氧化氮合酶、保护线粒体、抑制谷氨酸毒性等多种生理作用1,2，在此根底上我们研究EGb能否延缓或减少持续慢性高眼压对大鼠视网膜神经节细胞层RGL神经元的损伤。1材料和方法1.1材料由南华大学实验动物学部提供安康Spra

5、gue-Dalay大鼠60只，雌性，体质量200240g，812k龄，经检查无明显歪颈，角膜透明，虹膜血管明晰，瞳孔等大等圆，对光反响灵敏。实验性饲养3d后，连续测量3d眼压，剔除平均眼压高于或者低于大鼠正常眼压波动范围820Hg者3，挑出合格者纳入实验。银杏叶胶囊三九药业黄石制药厂，0.15g/粒，含银杏叶提取物40g/粒。1.2方法随机挑选6只大鼠为正常对照组，6只为EGb治疗正常组，其余均采用烧烙法3，烙闭大鼠左眼2条浅层巩膜静脉，制作大鼠持续性高眼压模型，右眼不做手术，作为自身对照，观察1k，在左眼眼压稳定在26Hg以上者中随机挑选出30只纳入实验，然后随机分为生理盐水组，治疗A组每日

6、Egb50g/kg、治疗B组每日EGb100g/kg、治疗组每日EGb150g/kg、治疗D组每日EGb200g/kg，每组6只，进展灌胃治疗1，每日上午一次性给全部药量。每周监测眼压1次。各组实验期满后取视网膜作全层铺片，甲酚固紫染色后行RGL神经元计数。每张待测视网膜铺片通过视乳头对称画线，将其分为颞上、颞下、鼻上、鼻下4个象限，并将每一象限视网膜分为3等份，即中央、中间和周边3区，各分区随机取3个点，每点面积为325002，然后对每点的视网膜神经元细胞进展计数,然后换算成每平方毫米的细胞数(细胞数/2),将每区3点细胞密度的均数作为该区的神经元密度。通过形态学图1易于识别RGL中的血管内

7、皮细胞，具有浓染的核并且无尼氏物质的细胞为胶质细胞，这两种细胞均不纳入RGL神经元计数。统计学处理：所有数据均在indsXP环境下运用SPSS11.0统计软件处理。统计学方法采用单因素方差分析ne-ayANVA和t检验,显著性程度为P0.05。图1大鼠视网膜铺片颞上象限甲酚固紫400A：治疗A组；B：治疗B组；：治疗组；D：治疗D组2结果正常SD大鼠右眼和左眼的RGL神经元计数分别为(3483.321.5)个/2和(3491.211.9)个/2,双眼比拟差异无显著性(P0.05)。且从中央区到周边区神经元计数逐渐减少。正常EGb治疗组与正常对照组比拟差异无显著性P0.05，各浓度EGb治疗组实

8、验眼与正常对照组RGL神经元计数均有显著性差异(P0.05)，各浓度EGb治疗组实验眼与其自身对照眼RGL神经元计数均有显著性差异P0.05，各浓度EGb治疗组实验眼与生理盐水组实验眼RGL神经元计数均有显著性差异(P0.05)。治疗A，B，D4组实验眼RGL神经元计数两两比拟均有显著性差异P0.05，表1。3讨论青光眼是一种临床常见眼病，也是主要的致盲眼病之一。青光眼导致的视功能损伤是不可逆，后果极其严重。关于青光眼的神经损伤机制主要包括机械学说和缺血学说，眼压升高和视神经供血缺乏是两大主要原发危险因素，另外兴奋性氨基酸的毒性、氧自由的损害、一氧化氮的增加、自身免疫攻击和生长因子的损耗等都加

9、剧着视神经的变性和凋亡4。所以近年来对于青光眼的治疗在加强眼压控制的同时，非常注重在低眼压的情况下对视神经的保护。谷氨酸受体阻滞剂和钙通道阻滞效果好但副作用也大，神经营养因子价格昂贵且又不易通过血脑屏障，为了找到一种价格更廉价、副作用更孝有效保护视神经的药物，我们选择了一种已广泛运用于临床的传统中药EGb，观察其对高眼压所致的大鼠视神经节细胞的保护作用。我们采用的尼氏染色法是一种碱性染料染色神经组织的方法。神经元的胞体中含有大量的核糖核酸，主要以尼氏小体的形式存在，它能与碱性染料结合。尼氏小体在神经节细胞中与一般细胞中的不同之处是其发育良好，我们可以方便的借助染色了的尼氏小体来识别和鉴定神经细

10、胞的存在与分布。本实验选用甲酚固紫染色后行RGL神经元计数5，操作比拟容易，计数准确。克制了经上丘逆行标记RG的某些缺点6，如上丘注射或包埋的部位不能完全准确一致，标记RG不够均匀，造成RG计数误差较大，且实验周期长，实验动物可能不能耐受麻醉或手术操作和死亡7。本研究结果显示，正常大鼠右眼RGL神经元密度是3483.321.5细胞数/2，左眼是3491.211.9细胞数/2。单独使用EGb对正常大鼠RGL神经元密度无影响，也没有见大鼠全身其他不良反响，说明全身使用EGb对正常大鼠是平安的。各浓度EGb治疗组实验眼与生理盐水组实验眼RGL神经元计数均有显著性差异P0.05说明EGb起到了RGL神经元的部分保护作用。治疗A、B、D4组实验眼RGL神经元计数两两比拟均有显著性差异P0.05,说明在一定范围内EGb保护作用的大小与用