产前诊断中心

1、产前诊断中心第1页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日产前诊断指征夫妇任一方有染色体异常；曾生育过染色体病患者；夫妇任一方为单基因病患者；曾生育过单基因病患者；有不明原因的自然流产史、畸胎史、死产或新生儿死亡史；第2页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日产前诊断指征羊水过多的孕妇；夫妇任一方曾接触致畸因素；孕妇年龄大于35岁；有遗传病家族史的近亲婚配的夫妇。产前筛查高风险的孕妇超声胎儿结构筛查胎儿有结构异常的孕妇第3页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日产前诊断的方法羊膜腔穿刺取样（amniocentesis）绒毛穿刺取样（chorion

2、villus sampling,cvs）脐带血取样（periumbilical cord blood sampling,PUBS）植入前诊断（preimplantaton genetic diagnosis,PGD）第4页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日产前诊断的方法胎儿组织取样（皮肤、肝脏）胎儿镜（fetoscope）胚胎镜（embryoscope）胎儿超声波图象（fetal ultrasound imaging）母体外周血胎儿细胞检测（cell-storing）第5页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日绒毛穿刺取样历史1975年 我国鞍山钢铁公司铁东

3、医院首次问世（经宫颈盲吸法，准确率95%，自然流产率9.3%，出生婴儿未发现异常）莫斯科产科研究所（超声引导下经宫颈吸样）1983您 Ward 和 Brambati 分别于英国和意大利发表文章介绍绒毛取样及核型分析第6页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日绒毛穿刺取样时间妊娠911周第7页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日绒毛穿刺取样抽取量20mg左右 （染色体核型分析约需10mg，DNA分析约需5mg，生化测定约需5-10mg）第8页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日绒毛穿刺取样并发症胎儿丢失胎儿肢体发育缺陷（LRD）第9页，共46页

4、，2022年，5月20日，9点20分，星期日CVS并发症胎儿丢失CVS的流产率不比amniocentesis高经宫颈和经腹取样安全性相同（Jackson,1992）多胎取样高于单胎取样（Pergament,1992）第10页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日CVS并发症LRD1999年WHO发布CVS综合性资料认为CVS与LRD无关（216，381例CVS中115例出现LRD发生率1：1881，总的人群发生率1：1642）世界各地相关资料综合，9周以下CVS出现LRD的机会高，但原因尚不清楚CVS不应在小于孕10周的条件下进行第11页，共46页，2022年，5月20日，9点

5、20分，星期日绒毛穿刺取样方法经宫颈（transcervical）经腹（transabdorminal）第12页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日CVS方法经宫颈取样B超采用高分辨的扇扫式或凸阵式实时超声诊断仪，经腹探头频率3.5MHz,经阴道探头频率5 - 7MHz。采用特制较细的滋养层活检导管（多聚乙烯导管），其塑料导管外径1.4 1.6 mm,长20cm,带有导管芯，导管前端稍弯，外形似宫腔探子。导管另一端连接10-20ml含有2-4ml生理盐水的注射器第13页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日CVS方法经腹取样双针活检系统由1根长15cm、外径1

6、.2mm的18号引导套针，及1根长20cm、外径0.8mm的22号活检针组成。在超声引导下，先将引导套针经腹壁及子宫穿刺入胎盘绒毛边缘部分，拔出针芯，然后将活检针经引导套针内送入胎盘绒毛组织,连接含2-4ml生理盐水的20ml注射器，以5ml的负压上下移动活检针吸取绒毛组织第14页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日CVS注意事项动作要轻柔穿刺部位在胎盘绒毛叶抽吸次数不宜过多第15页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日羊膜腔穿刺历史1956年 Fucks进行羊膜腔穿刺行胎儿性别鉴定及胎儿Rh溶血诊断1966年 Mark steele和Roy Breg从羊水中

7、分离出羊水细胞培养成功并行胎儿核型分析第16页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日羊膜腔穿刺时间1620周第17页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日羊膜腔穿刺抽取量2030ml第18页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日抽取的羊水用途核型分析诊断染色体病DNA分析诊断单基因病生化测定诊断NTD、代谢性疾病第19页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日羊水穿刺穿刺前孕妇俯卧位摇动腹部超声波定位引 导采用22号或21号带芯长腰穿刺针头垂直、快速进针抽取羊水2ml弃置，换空针抽取羊水第20页，共46页，2022年，5月20日，9

8、点20分，星期日羊膜腔穿刺并发症胎儿丢失羊膜腔感染羊水渗漏穿刺部位的出血、血肿第21页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日羊穿并发症-胎儿丢失1976年，Nihd Registry 报道流产率3.5%1986年，Tabor et al 报道流产率1.7%1995年，Bombard et al 报道流产率1.3%2000年, Antsaklis 报道流产率2.1%第22页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日脐带血穿刺历史1972年，Valenti用儿科膀胱镜在中期妊娠孕妇行子宫切开术插入羊膜腔，获取脐血标本。1979年，Rodeck和Campell应用胎儿镜行

9、脐带血管穿刺，但由于并发症高，应用受到限制。1983年，Ternand Daffos超声引导下经皮脐血管穿刺取血（Cordocentesis）第23页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日脐带血穿刺时间16周分娩（最佳2428周）第24页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日脐带血穿刺取血量35ml20周后抽取68ml对胎儿循环无不良影响第25页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日脐带血穿刺适应症胎儿核型分析或基因检测（胎儿畸形、严重的FGR、羊水或绒毛细胞培养失败、羊水或绒毛培养结果为嵌合体、非免疫性胎儿水肿、脆性X综合症等）胎儿血液疾病分析

10、（血型、血小板计数等）胎儿感染（弓形虫、病毒感染等）胎儿情况评估（酸碱平衡、甲功等）遗传性疾病（单基因病、凝血障碍、血红蛋白病、代谢性疾病等）胎儿治疗（宫内输血、宫内药物治疗等）第26页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日脐带血穿刺并发症穿刺部位的出血脐带血肿短暂性胎心减慢宫内感染胎儿丢失（流产、早产）大多数并发症为短暂性和非致命性第27页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日脐带血穿刺并发症胎儿丢失Maxwell 1991年报道胎儿超声结构筛查示正常超声者脐穿的流产率为1%（1/76）；异常超声者流产率为7%（5/76）；胎儿结构明显异常者流产率为25%（9

11、/36）Antsaklis 1998年报道胎儿超声结构筛查示正常超声者脐穿的流产率1%（2/191）；异常超声者流产率为13%（11/84）第28页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日脐带穿刺部位第29页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日脐血穿刺确定胎儿血样血红蛋白电泳Kleihauer-Betke试验：胎儿红细胞在酸中稳定APT试验：NaOH中胎儿血为粉红色有核红细胞的出现第30页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日脐血穿刺排除脐血中母血污染X染色体DMD基因内部5对CA重复序列的连锁分析第31页，共46页，2022年，5月20日，9点

12、20分，星期日绒毛组织、羊水细胞、脐血细胞培养第32页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日绒毛组织的培养直接法培养法（悬浮培养、贴壁培养）第33页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日绒毛组织的染色体检查直接法孕早期Langhans细胞有较高的有丝分裂活性，能提供足以分析的良好有丝分裂相，较绒毛培养简易可靠、操作简单快速第34页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日绒毛组织的染色体检查直接法绒毛组织的分离洗脱加秋水仙素（终浓度2ug/ml，可一次加，也可分次少量加）37OC 5%CO2培养箱培养45分钟低渗（1%枸橼酸钠低渗10分钟或1%枸橼酸

13、钠和0.075mol/l 1：1低渗40分钟）预固定（甲醇：冰醋酸 3：1）10分钟固定（甲醇：冰醋酸 3：1）10-20分钟冰醋酸解离绒毛细胞（轻吹打）制片第35页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日绒毛组织的染色体检查悬浮培养法绒毛挑选洗脱绒毛组织剪成小块入培养瓶（25ml培养瓶每瓶10mg）加特定培养液3ml培养3-6天收获（加秋素、低渗、固定、制片）第36页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日绒毛组织的染色体检查贴壁培养法绒毛组织挑选洗脱绒毛组织剪成小块加0.25%+0.02%EDTA 5ml 37OC 摇床中20分钟加培养基终止消化，离心后弃上清加

14、培养基接种培养5-10天收获第37页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日羊水细胞培养细胞类型成纤维样细胞（F细胞）上皮样细胞（密集型上皮样细胞-E细胞、镰刀样上皮细胞、圆形上皮细胞）羊水样细胞（AF细胞）第38页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日羊水细胞培养收获方法原位法消化法刮取法第39页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日羊水细胞培养中存在的问题 污染细菌真菌支原体病毒其他细胞第40页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日羊水细胞培养中存在的问题 母体细胞污染若胎儿为男性，由于母体细胞污染误将胎儿诊断为嵌合体母体细胞在培养中占优势第41页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日羊水细胞培养中存在的问题 母体细胞污染的预防羊水穿刺时，把最先抽得的1-2ml羊水弃掉染色体多态现象的测试羊水细胞、母体细胞 的HLA组织定型鉴别第42页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日羊水细胞培养中存在的问题 细胞不生长、不贴壁最常见的原因是支原体污染培养基PH不适当，偏酸（6.4或偏碱7.4均不利最合适的穿刺时间16-20周第43页，共46页，2022年，5月20日，9点20分，星期日羊水细胞培养中存在的问题 细胞及染色体收获少每天观察细胞生长（梭形