临床酶学检验技术

1、临床酶学检验技术第1页，共29页，2022年，5月20日，6点36分，星期日第一节 酶学基本知识 酶的本质-绝大部分的酶是蛋白质，有些酶是核酸 和酶蛋白组成的复合体，极少数酶的本质是核酸。 酶的特性-极高的催化效率、高度的特异性 (specificity)以及催化作用的可调节性 酶的结构与功能 单纯酶 酶蛋白(apoenzyme) 结合酶 辅酶(coenzyme) 辅因子(cofactor) 辅基(prosthetic group)第2页，共29页，2022年，5月20日，6点36分，星期日 酶是蛋白质，具有一、二、三级结构，有些酶还具 有四级结构。 单体酶(monomeric enzyme)

2、-只由一条多肽链构成 寡聚酶 (oligomeric enzyme)-由多个相同或不同 亚基以非共价键连接的酶 多酶体系(multienzyme system)-由几种不同功能 的酶彼此聚合而成的多酶复合物 酶的必需基团(essential group)-与酶的活性密 切相关的基团 酶的活性中心(active center)-组成具有能与底 物结合并起催化反应的特定空间结构区域第3页，共29页，2022年，5月20日，6点36分，星期日酶的命名、分类与编号 酶的命名-习惯命名法、系统命名法 酶的分类-可分为六大类 氧化还原酶(oxido-reductases)、转移酶(transferases

3、)、水解酶(hydrolases)、裂解酶(或裂合酶)(lyases)、异构酶(isomerases)、合成酶(或连接酶)(synthetases或ligases) 酶的编号-用4个数字加以系统编号 第一个数字表示酶的类别，第二个表示亚类， 第三个表示亚-亚类，第四个表示酶的编号序数。第4页，共29页，2022年，5月20日，6点36分，星期日 习惯用名 英文缩写 EC编号 系统名乳酸脱氢酶 LD（LDH） 1.1.1.27 L乳酸：NAD+氧化还原酶单胺氧化酶 MAO 1.4.3.4 单胺：氧化还原酶-谷氨酰转移酶 -GT/GGT 2.3.2.2 -谷氨酰肽：氨基酸-谷氨酰转移酶门冬氨酸氨基

4、转移酶 AST 2.6.1.1 L-门冬氨酸：-酮戊二酸氨基转移酶（谷草转氨酶） (GOT)丙氨酸氨基转移酶 ALT 2.6.1.2 L-丙氨酸：-酮戊二酸氨基转移酶（谷丙转氨酶） (GPT)肌酸激酶 CK 2.7.3.2 三磷酸腺苷：肌酸转磷酸酶碱性磷酸酶 ALP(AKP) 3.1.3.1 正磷酸单酯磷酸水解酶临床酶学分析中常用酶的名称与编号第5页，共29页，2022年，5月20日，6点36分，星期日第6页，共29页，2022年，5月20日，6点36分，星期日三、酶促反应动力学（一）酶促反应 方程第7页，共29页，2022年，5月20日，6点36分，星期日（二）酶促反应进程第8页，共29页，

5、2022年，5月20日，6点36分，星期日（三）酶动力学参数 1反应速度2米氏常数 (1)初速度指在反应最初阶段底物的消耗量很小 （一般在50%以内）时的反应速度 (2)最大反应速度 指当酶的结合位点与底物结合饱和时的反应速度 第9页，共29页，2022年，5月20日，6点36分，星期日(四)酶偶联反应 A B C D 酶学分析中作为试剂用于测定化合物浓度或酶活性浓度的酶 Ei指示酶Ea辅助酶ExEiEa工具酶第10页，共29页，2022年，5月20日，6点36分，星期日第11页，共29页，2022年，5月20日，6点36分，星期日第二节 血清酶变化的生理病理机制 一、血清酶的来源与去路 （一

6、）血清酶的来源 1血浆固有酶 2非血浆固有酶 外分泌酶 细胞酶 （二）血清酶的去路 1肾小球滤过从尿液中排出 2网状内皮系统清除 3血管内失活或灭活 第12页，共29页，2022年，5月20日，6点36分，星期日二、血清酶变化的生理病理机制 （一）血清酶的生理差异 1性别 2年龄 3饮食 4运动 5妊娠（二）血清酶变化的病理机制 1酶合成异常 2细胞内酶的渗漏 3酶进入血液的方式 4其他血管内的抑制作用、清除速度 第13页，共29页，2022年，5月20日，6点36分，星期日 (一)酶活性单位 1惯用单位 2国际单位-在特定的条件下，一分钟内使底 物转变一微摩尔的酶量为一个国际单位。 3Kat

7、al单位-在规定条件下，每秒钟催化转化 一摩尔底物的酶量。1katal60106U 第三节 酶含量的表示方法 一、酶活性浓度表示法 第14页，共29页，2022年，5月20日，6点36分，星期日（二）酶活性浓度 指单位体积样品中的酶活性单位 （三）正常上限升高倍数（ULN) 是指用测得的酶活性结果除以参考范围上限 第15页，共29页，2022年，5月20日，6点36分，星期日第16页，共29页，2022年，5月20日，6点36分，星期日二、酶蛋白质量浓度表示法 测定酶蛋白质量浓度优点 ： 灵敏度高特异性高 可测定无活性的酶 与酶活性测定一起，计算免疫比活性 在同工酶测定中更有价值 第17页，共

8、29页，2022年，5月20日，6点36分，星期日第四节 酶催化活性浓度测定的理论基础一、定时法 二、连续监测法 第18页，共29页，2022年，5月20日，6点36分，星期日（三）连续监测法的方法设计 1以人工合成色素原做底物的连续监测2NAD( P)H的连续监测 3以Trinder反应做指示反应的连续监测 4特殊反应类型的连续监测 第19页，共29页，2022年，5月20日，6点36分，星期日第五节 酶活性测定的影响因素与最适条件的确定一、方法因素的影响（一）正向反应与逆向反应（二）检测底物或检测产物 （三）底物启动模式与样品启动模式 第20页，共29页，2022年，5月20日，6点36分

9、，星期日二、测定条件的影响与最适条件的确定（一）底物种类和浓度（二）缓冲液种类、pH和离子强度 （三）反应温度 （四）辅助因子和激活剂（五）抑制剂 （六）酶偶联法中的辅助酶和指示酶 （七）延滞期与线性期的确定 （八）样品与试剂比例 第21页，共29页，2022年，5月20日，6点36分，星期日三、其他因素对测定结果的影响（一）仪器（二）校准物 （三）实验参数 （四）副反应 第22页，共29页，2022年，5月20日，6点36分，星期日第六节 同工酶检测技术一、电泳法二、抑制法三、其他方法 （一）热变性 （二）亲和层析法 第23页，共29页，2022年，5月20日，6点36分，星期日 免疫抑制法

10、 利用同工酶的一种亚基与相应的抗体结合后，酶活性受到抑制，测定加与不加抗体前后样品中酶活性的变化，可以计算出该型同工酶的活性。 不加抗CK-MM血清时样品的CK活性：CK-MM和CK-MB活性； 加入抗CK-MM血清时样品的CK活性：50CK-MB的活性； 加入抗CK-MM血清时样品的CK活性2：CK-MB活性； 所测CK-MM和CK-MB之总活性CK-MB活性CK-MM活性。第24页，共29页，2022年，5月20日，6点36分，星期日第七节 目前常用诊断酶的酶活性测定一、丙氨酸氨基转移酶与门冬氨酸氨基转移酶的测定 第25页，共29页，2022年，5月20日，6点36分，星期日L-丙氨酸 -酮戊二酸 -丙酮酸 L-谷氨酸丙酮酸 NADH H+ 乳酸 NAD+ALT（样品）LD（试剂）酶耦联法测定ALT340nmA/min-酮酸标本中GLDH标本中试剂1试剂2第26页，共29页