医学微生物学：第28章 登革热病毒

1、 第28章 登革热病毒病原学黄病毒科黄病毒属。登革病毒颗粒呈球形，直径4555nm。形态结构：球形、3750nm脂质包膜、包膜外有表面蛋白等突起物病毒核心由病毒基因组RNA和结构蛋白组成病毒基因组：RNA病毒基因组大小为11Kb左右4个结构基因和7个非结构基因登革病毒对热敏感，56 30分钟可灭活，但在4条件下其感染性可保持数周之久。超声波、紫外线、0.05%甲醛溶液、乳酸、高锰酸钾、龙胆紫等均可灭活病毒。病毒在pH 79时最为稳定，在-70或冷冻干燥状态下可长期存活。登革病毒的血清型4种血清型（serotype）：DENV14每种血清型又可分24种基因型（genotype ）4种血清型均可感

2、染人，其中2型重症率及病死率均高于其他型。流行病学（一）传染源。登革热患者、隐性感染者和登革病毒感染的非人灵长类动物以及带毒的媒介伊蚊。（二）传播途径。主要通过伊蚊叮咬传播。传播媒介主要为埃及伊蚊和白纹伊蚊。（三）易感人群。人群普遍易感，但感染后仅有部分人发病。登革病毒感染后，人体可对同型病毒产生持久免疫力，但对异型病毒感染不能形成有效保护，若再次感染异型或多个不同血清型病毒，机体可能发生免疫反应，从而导致严重的临床表现。微生物学检验登革病毒的分离和鉴定血凝抑制试验（HI）补体结合试验（CF）中和试验（NT）间接免疫荧光试验（IFA）酶联免疫吸附试验（ELISA）胶体金免疫层析快速诊断试验 免

3、疫斑点试验 (DIBA )RT-PCR荧光PCR标本的采集与保存采集对象 主要为登革热疑似病例、临床诊断病例等，必要时采集疑似病例的密切接触者标本。根据采样时间确定检测目的病原学检测 初次感染： 出现登革热症状的前12和发病后的35天 再次感染： 出现登革热症状的前后12天血清学检测初次感染：出现登革热症状1周后可检测到IgM;2周后可检测到IgG 再次感染：出现登革热症状后12天可检测到IgM和IgG 感染登革病毒后的免疫反应采集第二份血的重要性17天，7080核酸阳性，晚恢复期血清（1430天）抗体检测可进一步确认可分辨初次和二次感染对于初次感染，晚恢复期血清可用以型别鉴定检测方法的选择初

4、次感染患者，发病后35天可检出IgM抗体，发病2周后达到高峰，可维持23月发病1周后可检出IgG抗体，IgG抗体可维持数年甚至终生发病1周内，在患者血清中检出高水平特异性IgG抗体提示二次感染，也可结合捕获法检测的IgM/IgG抗体比值进行综合判断。病毒分离 7天 抗体检测 3小时病毒核酸检验 2-3小时快速检测试剂全血、血清、血浆含所有检测所需物品储存温度 (2 - 30C) 90% 敏感性和特异性15 分钟出结果可鉴别初次和二次感染25 tests 酶联免疫吸附试验酶标记登革病毒单抗与登革病毒复合物人IgM抗体抗人IgM单克隆抗体捕捉法（检测登革病毒抗体IgM）IgM抗体出现的比IgG早一

5、点,约5天后可以查到。初次感染的IgM比二次感染高的多，IgM可持续23个月诊断意义：IgM阳性不表明现感染，有可能是23个月前感染，在登革尚未地方性流行地区，可用于临床检测和人群监测登革病毒的核酸检测：PCR检测与鉴定登革病毒处理流程 血清（细胞上清或组织研磨液）病毒RNA提取cDNA的合成登革病毒型特异引物PCR扩增凝胶电泳，结果判断用QIAamp Viral RNA Kit或者Roche Viral RNA Kit提取病毒RNA 根据PCR特异性产物片段大小进行判断 RT-PCR检测登革病毒基因与分型登革热诊断标准（WS216-2008）型别引物名称引物序列（53）扩增片段通用引物D1T

6、GAATATGCTGAAACGCGCGAGAAACCGD2TTGCACCAACAGTCAATGTCTTCAGGTTC511bp1型登革病毒D1TGAATATGCTGAAACGCGCGAGAAACCG482 bpTS1CGTCTCAGTGATCCGGGGG2型登革病毒D1TGAATATGCTGAAACGCGCGAGAAACCG119bpTS2CGCCAGAAGGGCCATGAACAG3型登革病毒D1TGAATATGCTGAAACGCGCGAGAAACCG290bpTS3TAACATCATCATGAGACAGAGC4型登革病毒D1TGAATATGCTGAAACGCGCGAGAAACCG392bpT

7、S4CTCTGTTGTCTTAAACAAGAGA500bp500bp通用引物PCR结果分型引物PCR结果 M I M I 通用产物：511bp 分型产物： ：482bp， ：119bp， ：290bp， ：392bp 疑似登革热病人发病内血清接种C6/36细胞IgM、IgG ELISAReal time RT-PCR快速测登革病毒（可选）IgM和IgG ELISA阴性IgM或IgG ELISA阳性Real time RT-PCR或RT-PCR鉴定阴性盲传3代仍为阴性判定登革病毒型别登革病毒培养阴性判定为阴性IgG阳性，IgM很低或阴性IgM很高，IgG很低或阴性IgM和IgG阳性，但较低二次感染初次感染IgM和IgG仍保持较低水平甚至降低IgM升高或IgG4倍升