医院污水监测方法

1、医院污水监测方法医院污水监测方法第1页内容提要污水采样及常规监测方法排放标准培养基配制 污水余氯量检测 细菌总数及粪大肠菌群计算方法及汇报格式医院污水监测方法第2页 医疗机构污水：指医疗机构门诊、病房、手术室、各类检验室、病了解剖室、放射室、洗衣房、太平间等处排出诊疗、生活及粪便污水。当医疗机构其它污水与上述污水混合排出时一律视为医疗机构污水。 余氯：是指水经加氯消毒，接触一定时间后，余留在水中氯。医院污水监测方法第3页总大肠菌群：是指在3724h培养能分解乳糖产酸产气一群需氧及兼性厌氧革兰阴性无芽胞杆菌。耐热大肠菌群（粪大肠菌群）：是总大肠菌群一个别。将培养温度提升到44，在此条件下仍能生长

2、和发酵乳糖菌群被称为耐热大肠菌群。它们由埃希氏菌属以及克雷伯菌属、肠杆菌属和柠檬酸杆菌属中一些菌种组成。其中大肠埃希菌是最准确和专一粪便污染指示菌。与总大肠菌群相比，耐热大肠菌群在水体中检出，说明水体更为不清洁，存在肠道致病菌和食物中毒菌可能性更大。 医院污水监测方法第4页医院污水常见消毒方法医院污水消毒方法有加热、加氯、臭氧、紫外线及辐射等，较常见方法有氯化消毒法和臭氧消毒法。当前我国医院污水消毒最常见消毒剂是次氯酸钠。 医院污水监测方法第5页医院污水日常监测多以余氯量和粪大肠菌群测定结果来判断消毒效果。污水监测指示菌：大肠菌群、沙门菌、志贺菌监测频率：采取含氯消毒剂消毒时， 接触池出口总余

3、氯每日监测不得少于2次（采取间歇式消毒处理，每次排放前监测）。粪大肠菌群数每个月监测不得少于1次。肠道致病菌主要监测沙门菌、志贺菌。沙门菌监测，每季度不少于1次；志贺菌监测，每年不少于2次。结核病医疗机构依据需要监测结核杆菌 医院污水监测方法第6页（一）污水余氯量检测日常监测普通采取比色法（ 邻联甲苯胺比色法）：在含5ml样品比色管内滴加邻联甲苯胺溶液23滴，混匀，置暗处15min，与永久性余氯标准比色溶液比色测定。 医院污水监测方法第7页（二）细菌总数及粪大肠菌群测定1、采样时间在消毒后1小时、排放前进行采样。 医院污水监测方法第8页2、采样方法1）水样瓶采集前必须进行灭菌，并需确保在运装、

4、保留过程中不受污染。2）在采集水样时，先将出水口消毒，然后将水龙头完全打开，放水5-10min，以排除管道内贮水后再采水样。3）假如是经加氯处理污水，应按每500mL加1.5%硫代硫酸钠2ml中和余氯，终止余氯杀菌作用。4）所采水量为采样瓶容量80%左右，方便在检验时能够充分摇动水样。5）水样从采集到检验普通不应超出2h，如放冰箱保留，也不应超出4h。 医院污水监测方法第9页细菌总数测定： 细菌总数是指1mL水样在营养琼脂培养基中，于37经48h培养后，所生长细菌菌落总数。细菌总数主要作为判定水质被污染程度标志。 医院污水监测方法第10页 操作方法：（1）无菌操作吸收10mL充分混匀水样注入盛

5、有90mL灭菌蒸馏水玻璃瓶中，混匀成1:10稀释液。（2）吸收1:10稀释液1mL注入盛有9mL灭菌水试管中，混匀成1:100稀释液。依据需要可稀释成不一样稀释度。（3）用涂沫法或倾注法接种平皿。（4）置37培养48h后计数菌落数，汇报1mL水样中细菌总数。 医院污水监测方法第11页3、粪大肠菌群检验方法采取发酵法。步骤:（1）初发酵试验（2）平板分离（3）复发酵试验 医院污水监测方法第12页（1）初发酵试验1）将水样作110及1100稀释2）水样接种1100稀释水样（相当于原水样0.01ml）1ml110稀释水样（相当于原水样0.1ml）1ml原水样1ml 以上分别注入10ml普通浓度（单料

6、）乳糖蛋白胨液中（内有倒管）。原水样10ml注入5ml 3倍浓缩（三料）乳糖蛋白胨液中（内有倒管）。 医院污水监测方法第13页如水样较清洁，再取原水样100ml注入50ml 3倍浓缩乳糖蛋白胨液中，上述发酵管置44，24h培养。医院污水监测方法第14页(2)平板分离将产酸产气及只产酸不产气发酵管，分别接种伊红美蓝培养基上，于37 培养18-24小时，挑取深紫黑色、含有金属光泽菌落（或紫黑色，不带或略带金属光泽菌落；淡紫红色、中心色较深菌落），进行涂片、染色、镜检。医院污水监测方法第15页(3)复发酵试验挑取镜检为革兰阴性无芽孢杆菌经典菌落1-3个，接种于一支单料乳糖发酵管内，44培养24h，产

7、酸产气者即证实有大肠菌群存在。医院污水监测方法第16页4、结果汇报依据证实有粪大肠菌群存在阳性管（瓶）数查表1或表2，汇报每升水样中粪大肠菌群数。医院污水监测方法第17页5、污水中沙门菌、志贺菌检验步骤:污水样品过滤、稀释、增菌处理：取200mL污水，用灭菌滤膜进行抽滤；用100mL二倍浓度SF(亚硒酸盐增菌液)把滤膜上截留杂质洗脱到灭菌三角烧瓶内，充分摇匀，置于37恒温培养箱，增菌培养1824h。平板分离：将增菌培养液分别接种于SS和BS(亚硫酸铋琼脂)培养基培养基37培养2448h；挑选可疑菌落接种于双糖37培养1824h。判定：生化、血清学试验， 检验结果汇报，汇报一定体积样品中存在或不

8、存在沙门菌、志贺菌。医院污水监测方法第18页培养基配制医院污水监测方法第19页水样大肠菌群检测培养基：乳糖蛋白胨水蛋白胨10g牛肉膏3g乳糖5g pH7.27.4氯化钠5g1.6%溴甲酚紫溶液1mL蒸馏水1000mL三料乳糖蛋白胨水即除蒸馏水外以上成份均为3倍医院污水监测方法第20页 将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠置于1000mL蒸馏水中加热溶解，调整pH为7.27.4，再加入1mL 1.6%溴甲酚紫溶液，充分混匀，分装于装有倒管长试管中，置高压蒸汽灭菌器中，115 灭菌20分钟，储存于冷暗处备用。1.6%溴甲酚紫乙醇溶液配制：取1.6g溴甲酚紫置乳钵中，加入少许95%乙醇，研磨使之全溶解，然

9、后以乙醇洗入量筒中，再用乙醇配成100ml，盛入棕色玻璃瓶中备用。医院污水监测方法第21页注意事项：倒管必须在灭菌前倒放入试管中，灭菌后倒管中应充满液体。医院污水监测方法第22页检测流程回顾上次试验进行到了哪步？医院污水监测方法第23页大肠菌群检测 -MPN法（四）MPN法计数医院污水监测方法第24页了解大肠菌群计数方法 会进行大肠菌群MPN法计数 会进行大肠菌群检测结果汇报医院污水监测方法第25页工作任务判断发酵管是否产气查MPN表填写汇报单医院污水监测方法第26页操作步骤一、复发酵试验培养管产气观察 提问：怎样判定发酵管是否产气？医院污水监测方法第27页数据统计 发酵管 结果 1：10 产

10、气 阳性 1：100 产气 阳性 1：1000 产气 阳性医院污水监测方法第28页二、查MPN表检索说明：1、采取3 个稀释度0.1 g(mL)、0.01 g(mL)和0.001 g(mL)，每个稀释度接种3 管。2、表内所列检样量如改用1g （mL）、0.1 g(mL)和0.01 g(mL)时，表内数字应对应降低10 倍；如改0.01g(mL)、0.001 g(mL)、0.0001 g(mL)时，则表内数字应对应增高10 倍，其余类推。医院污水监测方法第29页医院污水监测方法第30页数据统计操作人1:101:1001:1000大肠菌群结果医院污水监测方法第31页 格式：ZG-XJ-JL 编号

11、： 细菌总数检测汇报样品名称： 生产日期： 检测日期：稀释度101001000菌落计数（CFU）3503302802603238平均数（CFU）结果（CFU）检测人： 审核人：三、填写汇报单医院污水监测方法第32页 格式：ZG-DC-JL 编号： 大肠杆菌检测汇报样品名称： 生产日期： 检测日期：稀释度101001000初发酵产气管数复发酵产气管数MPN表结果检测人： 审核人：三、填写汇报单医院污水监测方法第33页比较大肠菌群和细菌总数检测差异大肠菌群检测细菌总数检测培养基Lst月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤培养基BGLB煌绿乳糖胆盐肉汤培养基平板计数琼脂培养基接种方法和次数液体接种 2次倾注法接种

12、 一次培养时间和温度36 1度 48 2小时36 1度 48 2小时计数方法MPN检索表30300之间菌落计数和公式计算医院污水监测方法第34页1.小倒管作用是观察样品是否产气，若样品产气则小倒管内积累气泡，使小倒管上浮。2.企业标准比国家标准严格或者与国家标准一致。3.放置冰箱冷藏，一周内计数。医院污水监测方法第35页饮用水总大肠菌群检测医院污水监测方法第36页操作步骤：100ml 饮用水+ 50ml 3 倍浓缩乳糖蛋白胨培养瓶（含倒管）100ml 饮用水+ 50ml 3 倍浓缩乳糖蛋白胨培养瓶（含倒管）10ml 饮用水+ 5ml 3 倍浓缩乳糖蛋白胨培养管（共10管）总接种水量300ml。

13、医院污水监测方法第37页饮用水总大肠菌群检测置 36 培养24 h, 观察产酸产气情况, 如都不产酸产气, 则为未检出, 如有产酸产气或只产酸不产气发酵管, 则在麦康凯培养基分离培养后再进行复发酵试验, 证实为总大肠菌群阳性管数, 查大肠菌群检数表（表3）, 结果除以10，汇报每100 ml 水样MPN 值。医院污水监测方法第38页医院污水粪大肠菌群及沙门菌、志贺菌检测1、粪大肠菌群检测操作步骤（采取发酵法）：（1）初发酵试验1）将水样作110及1100 稀释2）水样接种1100稀释水样（相当于原水样0.01ml）1ml110 稀释水样（相当于原水样0.1ml）1ml原水样1ml以上分别注入10ml普通浓度（单料）乳糖蛋白胨液中（内有倒管）。原水样10ml注入5ml 3 倍浓缩（三料）乳糖蛋白胨液中（内有倒管）。上述发酵管置44，24h培养。医院污水监测方法第39页（2）平板分离将产酸产气及只产酸不产气发酵管，分别接种麦康凯培养基上，于37 培养18-24 小时。医院污水监测方法第40页（3）复发酵试验挑取红色经典菌落1-3 个，接种于一支单料乳糖发酵管内，44培养24h，产酸产气者即证实有大肠菌群存在。医院污水监测方法第41页（4）结果汇报依据证实有粪大肠菌群存在阳性管（瓶）数查表2，汇报每升水样中粪大肠菌群数