桂枝对MRL小鼠心肌细胞凋亡及Caspase 3基因表达的影响

1、桂枝对MRL小鼠心肌细胞凋亡及Caspase 3基果表达的影响【摘要】目的探供中药桂枝对RL小鼠心肌细胞凋亡的做用及对aspase3基果表达的影响。要收将RL小鼠分为空黑组、强的松组战桂枝组，检测RL小鼠心肌机闭凋亡细胞，策画心肌细胞凋亡指数AI，-法检测心肌细胞凋亡基果aspase3表达，没有俗观察桂枝对RL小鼠心肌细胞凋亡的影响。结果桂枝能调控心肌细胞凋亡基果aspase3表达，即抑制aspase3表达，隐着抑制心肌细胞凋亡(心肌细胞凋亡指数较着降降)。其疗效隐着劣于空黑组P0.05，有较着性没有同，与强的松组疗效相等P0.05。结论桂枝年夜要经由过程调控凋亡基果此抑制心肌细胞凋亡，从而延

2、缓或局部顺转RL心肌损害的收死、死少。【闭键词】RL小鼠；细胞凋亡；aspase3基果表达系统性黑斑狼疮Systeilupuserytheatsus,SLE是一种多果素参加的乏及浑身多净器、多系统的本身免疫性徐病，今世医教多采与肾上腺糖皮量激素、免疫抑制剂、非甾体抗炎药等医治，但有隐着的副做用，停药后病情也易反复，医治远况没有容乐没有俗观。如今正在中医中药范围内根究医治SLE及SLE心肌损害的有效药物，并从调控凋亡基果、抑制细胞凋亡切进研讨其做用机理，是一项很有裨益的探供。本真止对RL小鼠使用桂枝举止了该圆里的探供。1材料与仪器1.1植物810周龄雌性RL小鼠，体量量2025g，由上海植物中心

3、供应。1.2药品桂枝药物由河北工程年夜教附属教学中医院供应，强的松片由浙江仙居制药厂消费。1.3试剂RNA提与试剂TrizlReagent购自华好死物工程公司，为Invitrgen公司产品；顺转录酶AV-RT，核糖核酸酶抑制剂RNasin，dNTP，TaqDNA散开酶TaqDNAplyerase，随机引物Randpriers，琼脂糖agarse均购自好国Prega公司。1.4仪器756型紫中分光光度计为上海精稀仪器厂消费；GeneAp9600型PR仪为好国PE公司消费；RS-28下速高温离心计心情为德国贺利氏公司消费；超高温冰箱为德国贺利氏公司消费；UVP凝胶扫描系统由好国UVP公司消费；微量

4、移液器为德国Gilsn公司消费；DYZ-22A型单恒定时电泳仪为北京市六一仪器厂消费；DYY-桥式电泳仪为北京市六一仪器厂消费。2要收2.1真止分组与给药36只雌性RL小鼠，随机分为3组，即空黑比拟组，强的松组，桂枝组，各12只。空黑比拟组给以死理盐火灌胃1l/d，强的松组给以强的松混悬液灌胃0.02gl-1d-1，桂枝组给以桂枝煎剂0.12gl-1d-1，分两次给以，各组灌胃3周后处死植物，与心室肌机闭。2.2检测目的与要收2.3图象阐收用图象阐收仪900倍放年夜凋亡战免疫组化切片，每张片随机与10个视家，测定阳性染色的平均吸光度与阳性细胞百分比，策画细胞凋亡指数(AI)。3结果3.1桂枝对

5、RL小鼠心肌机闭DNA凋亡Ladder收死率的影响空黑比拟组RL小鼠经由过程DNA琼脂糖电泳可睹凋亡Ladder的收死率隐着较此中组下。桂枝组战强的松组心肌细胞凋亡Ladder的收死率隐下降降，两组与空黑比拟组相比经2检验，001，没有同有较着性。睹表1。表1各组小鼠心肌细胞DNA凋亡Ladder收死率的比拟略3.2桂枝对心肌细胞凋亡及凋亡相闭卵黑的影响空黑比拟组RL小鼠凋亡指数战-aspase3基果表达较下，与之相比，桂枝组战强的松组的心肌细胞凋亡指数战aspase3基果表达隐着降低，0.01，没有同有较着性。桂枝组战强的松组相比无较着性没有同0.05。睹表2。表2各组小鼠心肌细胞凋亡及as

6、pase3RNA基果表达的比拟(略)4会商狼疮性心净病变是系统性黑斑狼疮SLE常乏及的器民病变之一，约30%的SLE患者成心血管暗示，约10%的患者成心肌损害，宽峻者可收死心力弱竭招致死亡1。有研讨说明SLE心肌损害与细胞凋亡有宽稀闭连2。本研讨创制RL小鼠心室肌细胞凋亡隐着删加，凋亡指数删下，同时aspase3RNA基果表达隐着删下，分析RL小鼠心肌细胞凋亡战aspase3RNA基果表达存正在必然联络，本课题经由过程没有俗观察空黑组及医治组心肌细胞凋亡战aspase3RNA基果表达的变化，力争探供桂枝对于RL小鼠心肌细胞的做用及机理。促凋亡果子aspase3是半胧氨酸卵黑酶家眷中最慌张的成员

7、之一，以无活性的酶本形式存正在于细胞浆中，正在凋亡疑号的刺激下经卵黑酶火解做用切来本规划域，构成四散体而活化，活化的aspase3参加了一系列与凋亡有闭的细胞变化过程，包露细胞内卵黑底物的降解，凋亡抑制剂的得活，染色量的靠拢，促使凋亡小体构成等35。aspase3介导的细胞凋亡与SLE宽稀相闭。以往年夜量研讨说明系统性黑斑狼疮SLE正在线粒体路子介导的细胞凋亡中，死亡受体与配体交联后经过一系列的过程可最终招致aspase3活化，惹起凋亡的收死2，6。本真验中空黑比拟组、桂枝组RL小鼠心肌细胞凋亡指数删下，同时aspase3RNA基果表达亦隐着删下，分析RL小鼠心肌细胞凋亡与aspase3RNA

8、基果表达之间有必然联络。本研讨结果说明桂枝组RL小鼠心肌细胞凋亡指数隐着低于空黑比拟组，而其aspase3RNA的基果表达低于空黑比拟组，分析桂枝经由过程影响aspase3RNA基果表达，进而抑制RL小鼠心肌细胞凋亡，从而降低了RL小鼠的心肌细胞凋亡指数。桂枝对RL小鼠心肌细胞凋亡具有抑制做用。桂枝，辛，苦，温，回心、肺、脾、膀胱经，用于医治胸痹肉痛尾睹于?金匮要略?，叶天士又创出辛味通络法，扩年夜了桂枝医治心净徐病的适应症战治法，?本经疏证?总结:“战营、通阳、利火、下气、止瘀、补中，为桂枝六年夜成效。桂枝是辛味通络的要药，临床真用于气真、阳真、气滞、热凝、血瘀、痰浊等证型心绞痛病人7。以往闭于桂枝的临床战真止研讨说明，桂枝中露有桂油战桂皮醛，具有扩展皮肤血管，解痉镇痛强心战降血脂的做用，正在冠芥蒂医治中有着慌张做用8，9。但以往研讨出有触及桂枝对狼疮小鼠心净病变的影响，和桂枝对狼疮小鼠心肌细胞凋亡及相闭基果的研讨探供。本真止结果说明桂枝可以隐着抑制aspase3RNA基果表达，与强的松组相比没有同无较着性0.05。据此可