乳猪料用原料检测方法

1、PAGE PAGE 16第一部分分:乳猪猪料用原原料检测测方法山东六和和集团技技术部编编辑20066-011-055目 录1: 饲饲用玉米米脂肪酸酸值的测测定2: 油油脂碘价价的测定定3: 油油脂的酸酸价及过过氧化值值的测定定4: 鱼鱼粉中酸酸价的测测定55: 乳乳清粉中中乳糖的的测定.6: 油油脂TBBA值的的测定方方法.7: 呕呕吐毒素素(DOON)的的检测EELISSA法.8: 黄黄曲霉毒毒素的测测定ELLISAA法.9: 鱼鱼粉中组组胺的测测定.10:挥挥发性盐盐基氮的的测定(VBNN).11:饲饲料中免免疫球蛋蛋白lggG的测测定.12:玉玉米副产产品中二二氧化硫硫残留量量的测定定.

2、13:鱼鱼粉中脲脲醛聚合合物的鉴鉴别.14:谷谷物中淀淀粉含量量的测定定.15:次次粉中泥泥沙及矿矿物质的的测定.16:镜镜检过程程中的定定性实验验(鱼粉粉、肉骨骨粉、玉玉米蛋白白粉、豆豆类蛋白白粉、大大米蛋白白粉)17:淀淀粉糊化化度分析析方法.18:大大豆制品品中尿素素酶活性性分析方方法(PPH增值值法).19:油油脂定性性试验.20:乳乳糖测定定附表.一.饲用用玉米脂脂肪酸值值的测定定1.试剂剂：1.1 KOHH乙醇标标准溶液液C(KKOH)=0.01mmol/L取KOHH溶液C(KKOH)=0.1mool/LL 1100mml，用用乙醇（95%）稀释释到1 升，然然后按GGB6001标

3、定定。1.2 酚酞指指示剂：2g/ll乙醇溶溶液1.3 无水乙乙醇2 步骤骤：将平均样样品按四四分法制制得约880g样样品粉碎碎，过00.455mm孔孔径筛（40目目），立立即称取取10gg样品（精确到到0.001g），于1150mml具塞塞三角瓶瓶内，加加50mml无水水乙醇，加塞振振动100分钟，过滤，并用无无水乙醇醇洗3次次，每次次15mml，然然后加酚酚酞3滴滴，用00.011moll/lKKOH乙乙醇标准准溶液滴滴定到溶溶液呈微微红色，同时取取90mml乙醇醇作空白白。3计算：脂肪酸值值(mggKOHH/1000g)按下式式计算（V-VV0）C56.1脂肪酸值值= 1000 m 式中

4、：VV-样样品耗碱碱标准溶溶液的体体积，mmlV0空白耗耗碱标准准溶液的的体积，mlC-KOHH标准滴滴定溶液液的浓度度，mool/llm-样品质质量,gg二、油脂脂碘价的的测定1 试剂剂与溶液液1.1 韦氏液液的配制制：称取取三氯化化碘7.9g和和纯碘88.7gg分别溶溶于冰乙乙酸中，合并两两液，再再用冰乙乙酸稀释释至1LL，贮于于棕色瓶瓶内。1.2 KI溶溶液 1150gg/L1.3硫硫代硫酸酸钠标液液滴定溶溶液C（NaSS2O3）=00.1mmol/L）1.4 三氯甲甲烷CHHCl33 AAR2.步骤骤：按附表称称取试样样（准确确至0.00002g）于干燥燥的碘量量瓶中，加200ml C

5、HCCl3溶解试试样，加加25.00mml韦氏氏液立即即加塞，以KII溶液封封口，摇摇匀后，在2005条件下下，置黑黑暗处330miin（碘碘价在1130以以上时放放置1hh），到到时立即即加入KKI溶液液20mml和水水1000ml,用C（NaSS2O3）=00.1mmol/L）硫硫代硫酸酸钠标液液滴定至至浅黄色色时，加加入1mml 55g/LL淀粉指指示剂，滴定至至兰色消消失。同同样条件件做空白白两个，取平均均值。结果的表表示和计计算：碘价按下下式计算算碘价= EQ F(（V00-V1）C0.112699,m) 1000 式中：VV1试样样消耗硫硫代硫酸酸钠标准准溶液的的体积；mlV2空白

6、消消耗硫代代硫酸钠钠标准溶溶液的体体积；mmlC-硫代硫硫酸钠标标准溶液液的浓度度；mool/LLm-试样的的质量；g0.12269与1.00mml硫代代硫酸钠钠标准溶溶液(CC（NaaS2O3）=11.0000mool/LL)的相当的的以克表表示的碘碘的质量量。附表：碘碘价数值值与试样样用量碘价试样用量量范围（g）碘价试样用量量范围（g）200.844611.5586551200.211150.226444400.633460.7793551400.188130.222666600.422310.5528881600.155870.119833800.311730.3396661800.14

7、4100.1176221000.255380.3317332000.122690.115866三、油脂脂的酸价价及过氧氧化值的的测定一.油脂脂的酸价价的测定定：1 试剂剂与溶液液1.1乙乙醚-乙乙醇溶液液（2+1）配配制时加加入酚酞酞，并用用碱调至至中性1.2 NaOOH标准准滴定溶溶液C（NaOOH）=0.11moll/L1.3酚酚酞指示示剂 11g/LL2 步骤骤将需用的的锥形瓶瓶烘干；分别移移取油脂脂上层、中层、下层液液各12mll置于烘烘干的锥锥形瓶中中精密称称量。加加入500ml乙乙醚-乙乙醇溶液液使其溶溶解，可可以微热热，加入入酚酞指指示剂33-5滴滴,然后后用NaaOH标标准溶液

8、液进行滴滴定至粉粉红色，且1分分钟不褪褪色为终终点。同同时做空空白计算：酸价(mmgKOOH/gg)按下下式计算算酸价=CC(V-V0 )56.1/mm式中： CNaaOH标标准溶液液的浓度度；mool/LLV消消耗标准准溶液的的体积；mlm样样品的重重量；gg 566.1与11.000mlCC（NaaOH）=1.0000moll/L相相当的以以mg表表示的KKOH的的质量。说明： 酸价是指指中和11.0gg油脂所所含游离离脂肪酸酸所需KKOH的的毫克数数,同一一种油若若酸价高高，表明明油脂因因水解而而产生更更多的游游离脂肪肪酸。二.油油脂的过过氧化值值的测定定1.原理理：油脂氧化化过程产产生

9、过氧氧化物，与KII作用，生成游游离碘，以淀粉粉作指示示剂，用用硫代硫硫酸钠标标准溶液液滴定。2试剂与与溶液2.1三三氯甲烷烷冰乙酸酸的混合合液（44+6）2.2硫硫代硫酸酸钠标准准滴定溶溶液C（Na22S2O3）=00.011moll/L2.3淀淀粉指示示液100g/LL2.4碘碘化钾KKI AR3 步骤骤：称取2 33g(准准确到00.00002gg)混匀匀的样品品，置于于2500ml烘烘干的碘碘量瓶中中，加入入30mml三氯氯甲烷冰乙酸酸（4+6）的的混合液液，使样样品完全全溶解，加入约约2g的碘碘化钾，紧密塞塞好瓶塞塞，并轻轻轻振摇摇30秒秒钟，然然后在暗暗处放置置3分钟钟，取出出加1

10、000mll水，摇摇匀，立立即用的的硫代硫硫酸钠标标准溶(C（NNa2S2O3）=00.011moll/L)液滴定定至淡黄黄色时，加1mml淀粉粉指示液液（100g/LL），继继续滴定定至兰色色消失为为终点，同样条条件做空空白。4计算：过氧化值值（I2%）按按下式计计算过氧化值值（I22%）=（V11V0）C0.1126991000/m式中： V11-样样品消耗耗硫代硫硫酸钠的的体积；mlV0-空白白消耗硫硫代硫酸酸钠的体体积；mmlC硫代代硫酸钠钠标准溶溶液的浓浓度；mmol/Lm样品品的重量量；g 0.12669与1.00mmlC（Na22S2O3）=11.0000mool/LL相当的的以

11、克表表的I22的质量量 gg5 过氧氧化值二二种单位位的换算算:meq/kg = I2 % * 788.9四、鱼粉粉中酸价价的测定定1 试剂剂与溶液液1.1乙乙醚-乙乙醇溶液液（2+1）配配制时加加入酚酞酞，并用用碱调至至中性1.2 NaOOH标准准滴定溶溶液C（NaOOH）=0.005mool/LL1.3酚酚酞指示示剂 11g/LL2.步骤骤 称取23g（准确到到0.000022g）鱼鱼粉于干干燥带塞塞的三角角瓶中，加400ml乙乙醚与乙乙醇（22+1）混合溶溶液，在在振荡器器上振摇摇30mmin，干过滤滤于1550mll三角瓶瓶中，并并用少量量乙醚乙乙醇溶液液洗涤三三角瓶三三次，加加3滴的

12、的酚酞，用氢氧氧化钠标标准溶液液C（NaOOH）=0.005mool/LL滴定定至粉红红色，半半分钟内内不褪色色为终点点，同样样条件做做空白。3.结果果的表示示和计算算：酸价（mmgKOOH/gg）按下下式计算算酸价（mmgKOOH/gg）= EQ F(56.1C（V-V0）,mm) 式中：CNNaOHH标准滴滴定溶液液的浓度度；mool/LLV鱼鱼粉消耗耗标准溶溶液的体体积；mmlV0空白消消耗标准准溶液的的体积；mlm鱼鱼粉样品品的质量量；g56.11与11.000mlNNaOHH标准滴滴定溶液液C（NaOOH）=1.0000mmol/L相相当的以以mg表表示的KKOH的的质量。mg五、乳

13、清清粉中乳乳糖的测测定1 试剂剂与溶液液1.1酒酒石酸铜铜甲液：34.6399gCuuSO44溶于水水，加入入0.55ml浓浓H2SO4，稀释释到5000mll。 酒石酸铜铜乙液：1733g酒石石酸钾钠钠，加550gNNaOHH，稀释释到5000mll。1.2 氢氢氧化钠钠溶液cc(NaaOH)= 11moll/L1.3硫硫酸铁溶溶液 50gg/L1.4高高锰酸钾钾标准滴滴定溶液液c（11/5 KMnnO4）=00.1mmol/L2 步骤骤：称2g样样品（准准确到00.00002gg）于2200mml烧杯杯中，加加50mml水，电炉加加热到880，加酒酒石酸铜铜甲液110mll，加NNaOHH

14、（1mmol/L）55ml，搅拌后后放置到到室温，用水定定容于2250mml容量量瓶中，摇匀，静止11h后干干过滤。吸取滤滤液255.000ml于于三角瓶瓶中，加加25mml酒石石酸铜甲甲液，再再加255ml酒酒石酸铜铜乙液，在电炉炉上加热热并煮沸沸2miin（要要保证在在3miin内煮煮沸），取下过过滤，并并用水洗洗涤沉淀淀455次，之之后将滤滤纸及沉沉淀物（Cu22O）一一起放入入三角瓶瓶中，加加入硫酸酸铁（550g/L）225mll，再加加25mml水，用玻璃璃棒搅拌拌并微热热到看不不到Cuu2O的红红色为止止，然后后用高锰锰酸钾标标准滴定定溶液(c（11/5 KMnnO4）=00.1m

15、mol/L)的的标准溶溶液滴定定到呈微微红色为为终点。同样条条件做空空白3.结果果的表示示和计算算：乳糖含量量按下式式计算Cu2OO=（VV-V00）C71.54由Cu22O的质质量查表表求乳糖糖的质量量m乳：样品中乳乳糖的含含量:乳乳糖%=m乳/m样1000式中： m乳样品品中乳糖糖的质量量；gm样-样品品的质量量；V-样品消消耗KMMnO44的体积积；mllV0-空白白消耗KKMnOO4的体积积；mll71.554常数；CKMMnO44标准溶溶液的浓浓度，mmol/L六、油脂脂TBAA值的测测定方法法原理：油脂受到到光、热热、空气气中氧的的作用，发生酸酸败反应应，分解解出醛、酸之类类的化合

16、合物。丙丙二醛就就是分解解产物的的一种，它能与与硫代巴巴比妥酸酸(TBBA)作作用生成成粉红色色化合物物，在5532nnm波长长处有吸吸收高峰峰，利用用此性质质即能测测出丙二二醛含量量，从而而推导出出油脂酸酸败的程程度。试剂2.1硫硫代巴比比妥酸(TBAA)水溶溶液：准准确称取取TBAA 0.2888g溶于于水中，并稀释释至1000mll（如TTBA不不易溶解解，可加加热至全全溶澄清清，然后后稀释至至1000ml），相当当于0.02mmol/L；2.2 三氯氯乙酸混混合液：准确称称取三氯氯乙酸（分析纯纯）7.5g及及 0.1g EDTTA，用用水溶解解，稀释释至1000.000mll；2.3

17、氯仿仿（分析析纯）；2.4 丙二二醛标准准溶液：称取00.3115g 1，11，3，3-四四乙氧基基丙烷，溶解后后稀释至至10000.000mll，此溶溶液每mml相当当于丙二二醛1000g，置置于冰箱箱内保存存。准确确吸取110mll，稀释释至1000.000mll，此溶溶液每mml相当当于丙二二醛100微克(g)，备用。操作步骤骤3.1标标准曲线线的绘制制准确吸取取每mll相当于于丙二醛醛10g的标标准溶液液0.00、0.1、00.2、0.33、0.4、00.5、0.66ml置置于纳氏氏比色管管中，加加水至总总体积为为5mll，加入入5mll TBBA溶液液，然后后按样品品测定步步骤进行行

18、，测得得光密度度绘制标标准曲线线。3.2样样品测定定：准确称取取融化均均匀的油油脂样品品5.0gg，置于于1000ml具具塞三角角瓶内，加入550.00ml三三氯乙酸酸混合液液，振摇摇半小时时（保持持油脂融融溶状态态，如冷冷结可在在70水浴上上略微加加热使之之融化后后继续振振摇）用用双层滤滤纸过滤滤，除去去油脂。滤液重重复用双双层滤纸纸过滤一一次。准确移取取上述滤滤液5.0mll置于225mll比色管管内，加加入5.0 mmlTBBA溶液液，混匀匀，加塞塞，置于于90水浴内内保温440miin，取取出，冷冷却1hh，移入入小试管管内，离离心5mmin，上清液液倾入225mll纳氏比比色管中中，

19、加入入5.00ml氯氯仿，摇摇匀，静静置，分分层，吸吸出上清清液于5532nnm波长长比色，对照标标准曲线线得到微微克数（同时作作空白试试验）。计算丙二醛含含量（mmg/kkg）按按下式计计算 丙二醛醛含量（mg/kg）=式中:CC-从标标准曲线线查得丙丙二醛的的微克数数(ugg) m样样品质量量（g）七、呕吐吐毒素(DONN)的检检测ELLISAA法测试前请请仔细阅阅读本说说明在288冷藏不要冻冻结1.简介介 DOON毒素素脱氧瓜萎萎镰菌醇醇（DOON，）是单端端孢菌素素烯烃中中的一种种，它通通常是由由生长在在谷类物物品（如如小麦、玉米、大麦和和秣草）霉菌镰镰红菌素素生成的的。脱氧氧瓜萎镰镰

20、菌醇的的毒性效效应包括括：呕吐吐、不想想进食、胃肠炎炎、腹泻泻、免疫疫抑制和和血液病病。研究表明明猪对脱脱氧瓜萎萎镰菌醇醇很敏感感。当脱脱氧瓜萎萎镰菌醇醇含量1pppm时，它们就就拒绝进进食。其其毒性也也会对其其他物种种产生毒毒性效应应，各种种物种对对脱氧瓜瓜萎镰菌菌醇的敏敏感性各各不相同同。研究究表明脱脱氧瓜萎萎镰菌醇醇会使已已加工食食物发生生问题，包括使使可吃的的谷类制制品产生生臭味、对生面面团质量量产生负负面影响响。因此此，精确确测定可可能含有有脱氧瓜瓜萎镰菌菌醇的食食物和食食品就现现得十分分重要。FDAA（美国国食品和和药品管管理局）已经制制定了脱脱氧瓜萎萎镰菌醇醇含量的的强制标标准。

21、美国食品品药物管管理局已已经颁布布的DOON毒素素建议限限量如下下：适用对象象限量物质人1 pppm麦制品(面粉、麸和胚胚芽)反刍动物物牛肉饲养的牛牛和鸡10 pppm 在550%的的食入量量(全食入入量时为为5pppm)所有谷物物及其副副产品猪5 pppm 在在200%的食食入量(全食入入量时为为1pppm)所有谷物物及其副副产品所有其它它动物5 pppm 在在400%的食食入量(全食入入量时为为2pppm)所有谷物物及其副副产品2.方法法原理本测试盒盒的测试试原理是是一种竞竞争性的的直接酶酶联免疫疫吸附剂剂测试方方法（EELISSA），可准确确检测出出样品中中ppmm级的DDON毒毒素。样

22、样品和标标准控制制液中游游离的DDON毒毒素与轭轭合物中中的DOON毒素素竞争抗抗体结合合位置。清洗后后，加入入底物，底物与与轭合物物反应出出现兰色色，兰色色越深表表明DOON毒素素越少。将其置置于微型型孔阅读读器中可可读出透透光度，以控制制标准液液的透光光度作标标准曲线线，将样样品的透透光度与与标准曲曲线比较较计算出出样品中中DONN毒素的的准确浓浓度。 3.贮存存要求本试剂盒盒存放在在288时，可可以一直直使用到到标签上上注明的的到期日日期。4.试剂剂与仪器器4.1已已提供的的材料48个包包被了抗抗体的孔孔。48个红红色标记记的混合合孔。5瓶1.5mll浓度为为0、00.255、0.5、1

23、1、3 ppmmDONN毒素控控制标准准液(黄黄色标签签) 。1瓶DOON毒素素-HRRP轭合合物溶液液(兰色色标签)。1瓶244ml底底物溶液液(绿色色标签)。4.2需需要但未未提供的的材料1 提取取材料：蒸馏水或或去离子子水。100mml量筒筒150mml的具具塞三角角瓶滤纸样品收集集具塞试试管漏斗粉碎机称量为55255克的秤秤带4500nm滤滤光片的的微型孔孔阅读器器200l移液液器200l吸咀咀纸巾或等等效的吸吸水材料料计时器防水记号号笔洗瓶移液器用用的试剂剂槽蒸馏水或或去离子子水C（1/2H2SO4）=11moll/L的的硫酸终终止液5.注意意事项本测试盒盒不使用用时应在在288下存

24、放放。不要使用用过期的的测试盒盒。不要把不不同测试试盒中的的试剂混混合使用用。遵守正确确的移液液技术，包括取取液前先先用该液液润洗一一次。放置时间间与本说说明不一一致时，可能会会出现错错误的结结果。测试盒应应先恢复复到室温温状态(1830)后才才开始使使用。避免测试试盒在室室温下长长时间放放置。不要使测测试盒冻冻结。待测样品品的pHH值应为为688。酸碱碱过大的的样品应应进行调调整。应应将包括括样品提提取液在在内的所所有废液液和实验验器皿进进行处理理（如同同已被DDON毒毒素污染染一样）。应始始终穿戴戴手套和和其它防防护服。为了避免免交叉污污染，每每个样品品应使用用清洁的的吸咀和和玻璃器器皿，

25、并并在样品品之间彻彻底清洗洗所有的的玻璃器器皿。6.程序序性的提提示底物：底底物随时时可用，底物为为清亮的的浅兰色色，如果果变成了了深兰，则弃去去。使用用时，只只倒出所所需量到到试剂槽槽中，未未用完的的不要再再倒回试试剂瓶中中。不使使用时应应盖住试试剂槽，以避免免光的照照射。7.操作作步骤7.1样样品制备备和提取取1.待测测样品应应按公认认的采样样技术采采集。样样品应磨磨碎并充充分混合合后再提提取。测测试前，将样品品在28存放。2.将330mll硫酸缓缓缓注入入10000mll水中，冷却摇摇匀，配配成的硫硫酸(CC（1/2H22SO4）=11moll/L)终止液液。3.取11份代表表性样品品。

26、研磨磨样品至至至少有有75%的样品品通过220目的的筛子，颗粒尺尺寸大约约相当于于细的速速溶咖啡啡。4.将110克研研磨过的的样品加加入500ml 水或去去离子水水中，用用手或震震荡器剧剧烈混合合15分分钟。 5.将静静置2-3分钟钟，使一一些物质质沉淀下下来。6.用滤滤纸过滤滤出至少少5mll的提取取液。收收集该滤滤液即为为样品的的待测液液。7.2测测试程序序测试前应应将所有有的试剂剂恢复至至室温（1830）。1.从箔箔包中取取红色标标记的混混合孔，放在孔孔架上。2.取同同样数量量的包被被了抗体体的孔。把暂不不使用的的孔放回回到箔包包中，并并重新密密封，以以保护抗抗体。在在带子的的一端标标上

27、“1”，然后后放到孔孔架上，将有标标记的一一端放在在左边。不要在在孔的里里面和底底部写标标记。3.在使使用之前前摇动试试剂瓶，混合每每种试剂剂。4.从兰兰色标签签的瓶内内吸取1100l轭合合物加到到每个红红色标记记的混合合孔内。 5.每次次使用新新吸咀，吸取1100l控制制标准溶溶液和样样品液按按下列顺顺序加到到红色标标记的混混合孔内内6 用用移液器器吸入、排出33次使孔孔内溶液液彻底混混合，吸吸取1000l加到到相应的的包被了了抗体的的孔内，在平的的表面上上将板前前后滑动动确保充充分混合合1020秒秒钟，不不要溅出出试剂，混合后后于室温温下（118330）放置55分钟。弃去红红色标记记孔。7

28、倒掉掉包被了了抗体孔孔内的溶溶液。在在每个孔孔内加满满蒸馏水水或去离离子水，再倒出出，如此此重复55次，将将板朝下下，在吸吸水材料料上拍击击以去除除所有的的水滴。8从绿绿色标签签试剂瓶瓶中倒出出所需量量的试剂剂到绿色色试剂槽槽中。9用移移液器和和新吸咀咀，吸取取1000l底物物加到每每个孔内内，在平平的表面面上将板板前后滑滑动确保保充分混混合100200秒钟。10混混合后放放置2.5分钟钟。11从从试剂瓶瓶中倒出出所需量量的硫酸酸(C（1/22H2SO4）=11moll/L)终止液液到试剂剂槽中。12吸吸取1000l终止止液加到到每个孔孔内，在在平的表表面上将将板前后后滑动确确保充分分混合。1

29、3用用干净的的布擦净净板底，将板置置于微型型孔阅读读器于4450nnm滤光光片下读读数。由由于气泡泡会影响响结果，应削除除溶液中中气泡。应在加加入红色色终止剂剂后200分钟内内完成读读数。14用用Logg/loogitt软件计计算结果果。8.特性性参数检出限：0.11 pppm(110次阴阴性样品品的平均均值加22倍标准准偏差)。定量检测测限：00.255 pppm(以以标准曲曲线的最最低浓度度点表示示)。定量范围围：0.25-2.55 pppm(大于22.5 ppmm时,见见样品制制备和提提取程序序)八、黄曲曲霉毒素素的测定定ELIISA法法测试前请请仔细阅阅读本说说明在288冷藏不要冻冻结

30、1.简介介 黄曲曲霉毒素素黄曲霉毒毒素是一一种剧毒毒且致癌癌的物质质，它是是由黄曲曲霉菌和和寄生曲曲霉菌AA的某些些菌株产产生的。黄曲霉霉毒素有有四种类类型：BB1，BB2，GG1和GG2。黄黄曲霉毒毒素B11是毒性性最大且且最常有有的。最最容易产产生黄曲曲霉毒素素污染的的物质是是谷物、花生、棉子、高梁和和大多数数的树果果。动物食入入过量黄黄曲霉毒毒素的影影响从慢慢性健康康直到死死亡，已已经证明明黄曲霉霉毒素能能引起肝肝损坏或或癌症、降低奶奶和蛋的的产出、免疫抑抑制和干干扰再生生效率。美国食品品药物管管理局已已经规定定了食品品和饲料料中最大大黄曲霉霉毒素限限量。因因此，准准确测定定黄曲霉霉毒素

31、的的含量，对于监监测可能能发生黄黄曲霉毒毒素污染染的食品品和饲料料的质量量来说，是非常常重要的的。测试试程序包包括仔细细的采样样、化学学提取、卫生学学评价和和定量分分析。美国食品品药物管管理局已已经颁布布的黄曲曲霉毒素素限量如如下：适用对象象限量物质人20pppb除牛奶外外的所有有食品所有动物物20pppb所有饲料料（下列列除外）除外：种牛，种种猪，成成熟的家家禽100pppb谷物育肥期的的猪（1000磅）200pppb谷物育肥期的的菜牛300pppb谷物育肥期的的菜牛、猪、家家禽300pppb棉籽粉2.方法法原理本测试盒盒的测试试原理是是一种竞竞争性的的直接酶酶联免疫疫吸附剂剂测试方方法（E

32、ELISSA），可准确确检测出出样品中中ppbb级的黄黄曲霉毒毒素。样样品和标标准控制制液中游游离的黄黄曲霉毒毒素与轭轭合物中中的黄曲曲霉毒素素竞争抗抗体结合合位置。清洗后后，加入入底物，底物与与轭合物物反应出出现兰色色，兰色色越深表表明黄曲曲霉毒素素越少。将其置置于微型型孔阅读读器中可可读出透透光度，以控制制标准液液的透光光度作标标准曲线线，将样样品的透透光度与与标准曲曲线比较较计算出出样品中中黄曲霉霉毒素的的准确浓浓度。 3.贮存存要求本试剂盒盒存放在在288时，可可以一直直使用到到标签上上注明的的到期日日期。4.试剂剂与仪器器4.1提提供的材材料4.1.1 48个个包被了了抗体的的孔。4

33、.1.2 48个个红色标标记的混混合孔。4.1.3 4瓶11.5mml浓度度为0、5、115、550pppb黄曲曲霉毒素素控制标标准液(黄色标标签)（甲醇溶溶液的处处理，见见注意事事项）。4.1.4 1瓶77ml黄黄曲霉毒毒素-HHRP轭轭合物溶溶液(兰兰色标签签)。4.1.5 1瓶224mllK兰 eq oac(,R)底物溶溶液(绿绿色标签签)。4.1.6 1瓶332mll红色 (红色色标签)。4.2需需要但未未提供的的材料4.2.1 提取取材料：70%甲甲醇溶液液100mml量筒筒150mml的具具塞三角角瓶滤纸样品收集集具塞试试管漏斗 粉碎碎机4.2.3 称量量为525克克的秤4.2.4

34、 带4450nnm滤光光片的微微型孔阅阅读器4.2.5 2000l移液液器4.2.6 2000l吸咀咀4.2.7 纸巾巾或等效效的吸水水材料4.2.8 计时时器4.2.9 防水水记号笔笔4.2.10 洗瓶瓶4.2.11 移液液器用的的试剂槽槽4.2.12 蒸馏馏水或去去离子水水4.2.13 硫酸酸终止液液C（11/2H2SO4）=11moll/L5.注意意事项5.1 甲醇易易燃，其其容器应应密闭并并远离热热、火花花、明火火和烟。如果吞吞下或吸吸入蒸气气，它是是有毒的的。应避避免与皮皮肤接触触。5.2 本测试试盒不使使用时应应在28下存放放。5.3 不要使使用过期期的测试试盒。5.4 不要把把不

35、同测测试盒中中的试剂剂混合使使用。5.5 遵守正正确的移移液技术术，包括括取液前前先用该该液润洗洗一次。5.6 放置时时间与本本说明不不一致时时，可能能会出现现错误的的结果。5.7 测试盒盒应先恢恢复到室室温状态态(188300)后才才开始使使用。5.8 避免测测试盒在在室温下下长时间间放置。5.9 不要使使测试盒盒冻结。5.100应将包包括样品品提取液液在内的的所有废废液和实实验器皿皿进行处处理（如如同已被被黄曲霉霉毒素污污染一样样）。应应始终穿穿戴手套套和其它它防护服服。5.111为了避避免交叉叉污染，每个样样品应使使用清洁洁的吸咀咀和玻璃璃器皿，并在样样品之间间彻底清清洗所有有的玻璃璃器

36、皿。5.122待测样样品的ppH值应应为68。酸酸碱过大大的样品品应进行行调整。关于ppH值的的调整，请与NNeoggen代代表或技技术服务务部门联联系。6.程序序性的提提示K-兰底底物随时时可用，底物为为清亮的的浅兰色色，如果果变成了了深兰，则弃去去。使用用时，只只倒出所所需量到到试剂槽槽中，未未用完的的不要再再倒回试试剂瓶中中。不使使用时应应盖住试试剂槽，以避免免光的照照射。7.操作作步骤7.1样样品制备备和提取取待测样品品应按公公认的采采样技术术采集。样品应应磨碎并并充分混混合后再再提取。测试前前，将样样品在228存放。按以下下程序进进行：1 将将7份分分析级甲甲醇与33份蒸馏馏水或去去

37、离子水水混合配配成700%的甲甲醇溶液液。2 将将30mml硫酸酸缓缓注注入10000mml水中中，冷却却摇匀，配成硫硫酸(CC（1/2H22SO4）=11moll/L) 的终终止液。取1份代代表性样样品。研研磨样品品至至少少有755%的样样品通过过20目目的筛子子，颗粒粒尺寸大大约相当当于细的的速溶咖咖啡。把5克研研磨过的的样品加加入到225mll 700%的甲甲醇中，然后用用力摇动动15分分钟。用滤纸过过滤出至至少5mml的提提取液。该滤液液即为样样品的待待测液。该待测液液即可用用于测试试。7.2测测试程序序测试前应应将所有有的试剂剂恢复至至室温（1830）。1.从箔箔包中取取红色标标记混

38、合合孔，放放在孔架架上。2.取同同样数量量的包被被了抗体体的孔。把暂不不使用的的孔放回回到箔包包中，并并重新密密封，以以保护抗抗体。3.在使使用之前前摇动试试剂瓶，混合每每种试剂剂。4.从兰兰色标签签瓶内吸吸取1000l轭合合物加到到每个红红色标记记的混合合孔内。弃去吸吸咀。5.每次次使用新新吸咀，吸取1100l控制制标准溶溶液和样样品液按按下列顺顺序加到到红色标标记的混混合孔内内 6.用移移液器吸吸入、排排出3次次使孔内内溶液彻彻底混合合，吸取取1000l加到到相应的的包被了了抗体的的孔内，在平的的表面上上将板前前后滑动动确保充充分混合合1020秒秒钟，不不要溅出出试剂，混合后后于室温温下（

39、118330）放置22分钟。7.倒掉掉包被了了抗体孔孔内的溶溶液。在在每个孔孔内加满满蒸馏水水或去离离子水，再倒掉掉，如此此重复55次，将将板朝下下，在吸吸水材料料上拍击击以去除除所有的的水滴。8.从绿绿色试剂剂瓶中倒倒出所需需量的试试剂到试试剂槽中中。9.用移移液器和和新吸咀咀，吸取取1000l底物物加到每每个孔内内，在平平的表面面上将板板前后滑滑动确保保充分混混合100200秒钟。10.混混合后放放置1.5分钟钟。11.从从试剂瓶瓶中倒出出所需量量的硫酸酸(C（1/22H2SO4）=11moll/L)终止液液到试剂剂槽中。12.用用移液器器吸取1100l终止止液加到到每个孔孔内，在在平的表

40、表面上将将板前后后滑动确确保充分分混合。13.用用干净的的布擦净净板底，将板置置于微型型孔阅读读器于4450nnm滤光光片下读读数。由由于气泡泡会影响响结果，应削除除溶液中中气泡。应在加加入终止止液后220分钟钟内完成成读数。14.用用Logg/loogitt软件计计算结果果。8.特性性参数检出限：2pppb(110次阴阴性样品品的平均均值加22倍标准准偏差)。定量检测测限：55ppbb(以标标准曲线线的最低低浓度点点表示)。定量范围围：5-50 ppbb(大于于50 ppbb时应稀稀释)九、鱼粉粉中组胺胺的测定定 原理简简介:鱼鱼粉中组组胺用三三氯乙酸酸提取，之后调调PH=9，将将游离的的组

41、胺用用正戊醇醇提取出出，之后后再用HHCl反反萃取，用偶氮氮试剂显显色。组胺+三三氯乙酸酸盐（溶溶于水）-PPH=99-组组胺（溶溶于正戊戊醇）HCCl正戊醇醇（组胺胺溶于稀稀HCll）1试剂与与溶液1.1偶偶氮试剂剂的配制制甲液：称称取0.5g对对硝基苯苯胺，加加5mll盐酸（1+11）溶解解，再加加水释到到2000ml，置冰箱箱中（228度度）保存存。乙液：亚亚硝酸钠钠溶液55g/ll，临用用现配甲液5mml、乙乙液400ml混混合后立立刻使用用。2三氯乙乙酸 1100 g/LL1.3氢氢氧化钠钠 2250gg/L1.4盐盐酸 1mmol/L1.5正正戊醇 分分析纯6碳酸氢氢钠溶液液 55

42、0g/L1.7磷磷酸组胺胺（Siigmaa公司）2.步骤骤2.1样样品处理理 称称取13克克鱼粉于于具塞三三角瓶内内，加入入25.0mll三氯乙乙酸（1100gg/L）每隔330分钟钟摇动一一次，提提取3小小时，过过滤，取取滤液22.000ml或或1.000mll于155ml试试管内，加氢氧氧化钠（2500g/LL）5滴滴，振荡荡一下，再加55ml正正戊醇振振荡2分分钟，静静止分层层（如出出现乳化化现象可可滴加22-33滴无水水乙醇），用移移液枪小小心吸取取上清液液（正戊戊醇层）于500ml分分液漏斗斗内，下下层沉淀淀再下层层沉淀再再分别用用正戊醇醇5mll、3mml、33ml反反萃取33次。

43、将将正戊醇醇全部收收集到550mll分液漏漏内,分分别用盐盐酸(11moll/L)6 mml、66 mll、3 ml反反萃取33次,收收集水相相（下层层）于220mll刻度试试管内，用水定定容至刻刻度(220.000mll)，摇摇匀，吸吸取1.00mml（或或2.000mll）盐酸酸提取液液于100 mll比色管管中，加加入碳酸酸氢钠溶溶液（550g/L）33.0mml摇匀匀，振荡荡下加入入偶氮试试剂3.0mll，用水水定容到到刻度，室温下下显色110miin，用用1cmm比色皿皿于4880nmm下测定定吸光度度。2.2标标准曲线线称取磷酸酸组胺样样品（SSigmma公司司）2.76771mg

44、g，置于于1000ml容容量瓶内内，用水水溶解并并定容到到刻度，此液组组胺含量量为100ug/ml，分别取取此标液液0.000、11.000、2.00、4.000、66.000ml于于5支110mll比色管管内，各各加盐酸酸（1mmol/L）11.0mml，振振荡，用用水定容容到刻度度，摇匀匀后放置置10mmin（室温下下），用用1cmm比色皿皿于4880nmm下测吸吸光值。参比液：试剂空空白3计算鱼粉中组组胺按下下式计算算公式：组胺（mg/100g）= C*1000 (m/225.00)*(1.000/115.00)*110000实例：鱼鱼粉2.34555，取取三氯乙乙酸提取取液1.00mm

45、l，吸吸光度AA=0.2577标准曲线线:A=0.00123380*C+00.0113100计算: C =(A-0.001311)/00.01123880=119.770ugg组胺=(19.70*1000)/(2.34555/225)*(1.0/115)*10000=3155mg/1000g=331500ppmm应用：进口白鱼鱼粉：组组胺110mgg/1000g(1-55mg/1000g)进口水产产级蒸汽汽鱼粉1000mg/1000g(550mgg/1000g)优质国产产鱼粉1500mg/1000g(550-1150mmg/1100gg)新鲜度差差的鱼粉粉(国产产,进口口)组胺胺2000344

46、0mgg/1000g用于乳猪猪料的鱼鱼粉 组组胺1100mmg/1100gg十、挥发发性盐基基氮的测测定(VVBN)原理简介介:蛋白白质分解解时，氨氨基酸脱脱胺基生生成氨，氨基酸酸脱羧基基生成胺胺，氨与与胺(挥挥发性的的胺)在在碱液(氧化镁镁)中被被蒸发出出来，用用硼酸吸吸收，用用标准盐盐酸反滴滴定，测测出其含含量。1试剂与与溶液1.1氧氧化镁溶溶液 100g/LL2.步 骤称取5-10gg样品于于2500ml具具塞三角角瓶内，加入1100.0mll水，振振荡300minn，过滤滤，取虑虑液100.000ml，按粗蛋蛋白蒸馏馏操作，但加入入的碱为为氧化镁镁溶液（10gg/L）7-110mll。

47、3.计算算：挥发性盐盐基氮（VBNN）（mmg/1100gg）按下下式计算算VBN（mg/1000g）= C（VV-V00）*114/m*（10/1000）*1000实例:鱼鱼粉样品品8.667066g，VVHCll=0.02000mool/LL VV=3.93mml V0=0.15mml VBNN=0.002000*144* (3.993-00.155)/8.667066*(110/1100)*1100=1222.1mmg/1100gg应用：新鲜度好好的鱼粉粉VBNN1150mmg/1100gg（1880-3350 mg/1000g）乳猪料鱼鱼粉VBBN4.11砂 分分%1.001.1-2.

48、02.11赖 氨 酸 %4.884.4-4.884.33蛋 氨 酸 %1.771.5-1.771.55总 钙钙%2.0-5.002.0-5.002.0-5.00总 磷磷%1.0-3.551.0-3.551.0-3.55粗 灰 分 %1818-22020.1镜 检检不得掺假假掺杂及及含有毒毒有害物物不得掺假假掺杂及及含有毒毒有害物物不得掺假假掺杂及及含有毒有有害物3.3新新鲜度指指标挥发性盐盐基氮VVBN mg/1000g801000100-1800组胺（mmg/1100gg）505110001012000油脂酸价价(mggkOHH/g)3.005.005.1-7.00丙二醛（mg/kg油油）2

49、.004.004.1-5.00口感具有新鲜鲜鱼粉香香味，无无臭，无无油哈，无氨味味具有新鲜鲜鱼粉香香味，无无臭，无无油哈，无氨味味具有鱼粉粉香味，但有轻轻度异味味3.3卫卫生指标标：符合合GB1130778-220011的规定定包装、运运输及贮贮存4.1鱼鱼粉中不不得掺入入其它非非鱼粉物物质，若若加入抗抗氧化剂剂应说明明4.2不不得用装装过有害害物质的的废旧包包装袋装装鱼粉4.3包包装应符符合运输输、保质质、保量量的要求求，防止止污染。品质判断断指南5.1鱼鱼粉质量量好坏主主要看二二个方面面：其一一，是否否掺假，掺杂？其二，鱼粉的的新鲜度度如何？特别是是白鱼粉粉鲜度好好坏，价价格相差差几千元元

50、。5.2识识别真假假鱼粉的的主要手手段为镜镜检+化化学定性性检查5.3鱼鱼粉的新新鲜度指指标很多多，不能能仅凭一一个指标标的好坏坏就下结结论，这这些指标标中：油油脂酸价价，丙二二醛含量量或TBBA值反反映的是是鱼粉中中脂肪变变质的情情况（被被氧化、水解），而组组胺、挥挥发性盐盐基氨（VBNN）反映映的是鱼鱼粉蛋白白质变质质的情况况，在实实际中要要具体问问题具体体分析，但不论论指标数数据如何何，口感感是最真真实最有有效的方方法，好好的鱼粉粉口感为为鱼粉的的香味，逐渐地地溶化，最后仅仅剩下很很少的鱼鱼骨头，而差的的鱼粉口口感臭味味，氨味味，油哈哈味及其其它异味味。5.4 鱼粉的的其它指指标，灰灰分

51、的正正常值为为15-20%，钙磷磷比为22：1。若灰分分低于113%，而磷高高（1.5-22.0%），钙钙低（22-3%），说说明掺入入大量的的鱼溶浆浆及生产产过程的的废液，若盐份份太高说说明鱼不不新鲜有有假，若若砂分高高则说明明捕鱼的的船在浅浅海作业业或是捕捕虾的副副产品。三 乳乳猪料用用次粉范围本标准规规定了山山东六和和集团乳乳猪料用用次粉的的质量指指标及分分级标准准 本标标准适用用于山东东六和集集团公司司内部质质量判定定及采购购要求规范用文文件性引引NY/TT2111-19992 饲料用用次粉 山东东六和集集团检测测方法汇汇编要求3.1感感观要求求粉状，粉粉白色至至浅黄色色，具有有小麦的

52、的香味，无发酵酵味，无无霉变味味，无结结块，无无异味，色泽新新鲜一致致3.2理理化指标标项目指 标A级B级水 分 %1212灰 分 %22.55四氯化碳碳浮选物物%0.5513.3卫卫生指标标 符合GBB130078-20001要求求3.4仓仓储时间间夏季（55月-110月）不适超超过100天，如如发现有有发酵、霉变之之现象应应立即停停止作用用。3.5不不得掺入入小麦以以外其它它物质，若加入入抗氧化化剂，防防霉剂时时应做相相应说明明包装、运运输及储储存4.1包包装袋不不得使用用装过有有害有毒毒物质的的旧包装装袋（如如化工产产品）。4.2包包装袋必必须符合合保质、保重、安全运运输的要要求，不不得

53、破损损，防止止污染。品质判断断指南5.1影影响次粉粉质量的的关键因因素是新新鲜度，到货感感观检查查及水分分高低决决定次粉粉用途及及贮存时时间，品品管人员员要每天天巡仓，查看次次粉是否否发热，发酵，发霉，结块。5.2有有发酵，发霉气气味的次次粉不适适宜做乳乳猪料。5.3次次粉掺假假大部分分掺滑石石粉，用用四氯化化碳浮选选法很容容易识别别。5.4若若灰分高高（大于于2%）还应做做镜检，看是否否掺有稻稻谷壳。四 乳乳猪料用用膨化玉玉米范围本标准规规定了乳乳猪料用用膨化玉玉米的质质量指标标及分级级标准本标准适适用于山山东六和和集团乳乳猪料用用膨化玉玉米质量量判定及及采购要要求规范性引引用文件件SB/T

54、T100077-19992 水貂配配合饲料料山东六和和集团检检测方法法汇编要求3.1原原料要求求膨化玉米米所用原原料玉米米应符合合乳猪料料用玉米米B级以以上要求求,自然然干玉米米或双筒筒烘干的的玉米.3.2感感观要求求粉碎前外外观呈条条状，小小块装，内部有有大量气气孔，粉粉碎后的的粉末具具有烤玉玉米的香香味，容容重较轻轻,不应应有烧焦焦及生玉玉米的味味道,不不可见碎碎玉米。3.3理理化指标标准糊化度70%水 分分10%包装与贮贮存玉米膨化化后应尽尽快使用用，未用用完的用用袋装好好，扎紧紧口，防防止受潮潮，防止止污染五 乳乳猪料用用膨化大大豆范围本标准规规定了乳乳猪料用用膨化大大豆的质质量指标标

55、及分级级标准本标准适适用于山山东六和和集团乳乳猪料用用膨化大大豆质量量判定及及采购要要求规范性引引用文件件NY/TT1311-19989 饲料用用大豆粕粕山东六和和集团检检测方法法汇编要求3.1 原料要要求膨化大豆豆所用大大豆应符符合NYY1355-19999饲料用用大豆中二级级品以上上的规定定，水分分小于113%，粗蛋白白大于335%，杂质小小于1%，大豆豆外观圆圆形椭圆圆形黄色色籽粒，无青豆豆，无异异味，无无发霉3.2膨膨化大豆豆的感观观要求外观为油油状黄色色，有气气孔的小小粒，有有很浓的的烤大豆豆的香味味，无生生大豆味味3.3理理化指标标脲酶活性性：PHH增值法法0.005(330)，定

56、定量小于于0.225水 分： 12.5%蛋白溶解解度： 70%包装与贮贮存膨化大豆豆应用编编织袋包包装，生生产的成成品应尽尽快用完完。六 乳乳清粉1 范围围本标准规规定了乳乳猪料用用的乳清清粉质量量指标及及分级标标准本标准适适用于山山东六和和集团乳乳猪料用用乳清粉粉质量判判定及采采购要求求2 规范范性引用用文件GB50009.7855 食品中中还原糖糖的测定定方法山东六和和集团检检测方法法汇编3 要求求3.1感感观要求求色泽呈乳乳白色 ,有乳乳清的香香甜味和和奶香味味,有吸吸潮性,不可有有酸味等等异味.无结块块，色泽泽新鲜一一致3.2理理化指标标项 目指 标A级B级 乳 糖糖 %大于标称称含量

57、996% 粗 蛋蛋 白 %11-11311-113 水 分分 %55 盐 分分 %33 灰 分分 %993.3卫卫生指标标 符合GBB130078-20001要求求4包装与与贮存乳清粉应应防潮保保质，贮贮存期33个月并并应尽快快用完。5 品品质判断断指南5.1乳乳清粉分分甜乳清清粉和酸酸乳清粉粉, 甜甜乳清粉粉质量佳佳,酸乳乳清粉质质量差,乳猪料料宜用甜甜乳清粉粉.5.2乳乳清粉吸吸潮性强强, 贮贮存在干干燥通风风的地方方,在搬搬运和贮贮存时要要小心破破碎,取取样洞要要及时用用不干胶胶封闭.5.3乳乳清粉含含大量的的乳糖并并易和蛋蛋白质发发生美拉拉德反应应引起变变色,在在贮存时时如温度度高或贮

58、贮存时间间长,乳乳清粉发发生结块块变色(黄褐色色),说说明已变变质.5.4乳乳清粉贮贮存时间间3个月月并应尽尽快用完完5.5灰灰分和酸酸度是衡衡量乳清清粉质量量的重要要项目, 甜乳乳清粉灰灰分正常常值在66-8.5%,若灰分分大于111%说说理是经经中和的的酸乳清清粉或乳乳清再制制粉.七 血浆浆蛋白粉粉1 范围围本标准规规定了乳乳猪料用用血浆蛋蛋白粉的的质量指指标及分分级标准准本标准适适用于山山东六和和集团乳乳猪料用用血浆蛋蛋白粉质质量判定定及采购购要求2 规范范性引用用文件GB50009.194420003 保保健食品品中免疫疫球蛋白白IgGG的测定定3 要求求3.1感感观要求求色泽呈灰灰白

59、色、浅黄白白色，具具有肉香香味的粉粉末，无无异味、无结块块、无霉霉变。3.2理理化指标标项 目指 标A级B级水 分 %55蛋 白 %7070盐 分 %57灰 分 %1012赖氨酸 %6.556.00IgG %1715水 溶 性合格合格3.3卫卫生指标标 符合GBB130078-20001要求求4.包装装、运输输及贮存存4.1血血浆蛋白白粉中不不得掺入入其它非非血浆蛋蛋白粉物物质，若若加入抗抗氧化剂剂应说明明4.2不不得用装装过有害害物质的的废旧包包装袋装装血浆粉粉4.3包包装应符符合运输输、保质质、保量量的要求求，防止止污染。5.品质质判断指指南：5.1血血浆蛋白白粉的加加工工艺艺及原血血的鲜

60、度度对质量量影响很很大，不不是采用用喷雾干干燥工艺艺而是卧卧式塔烘烘干的IIgG（免疫球球蛋白）基本失失活。若若原血的的鲜度差差则色泽泽偏红，若加入入过多的的抗凝剂剂，则灰灰份高。5.2生生产乳猪猪料用血血浆蛋白白粉的原原血宜采采用鲜猪猪血。5.3血血浆蛋白白粉应易易溶于水水中，其其水溶液液呈弱凝凝胶状，若反之之，则品品质差或或掺假。5.4血血浆蛋白白粉的掺掺假物为为：大豆豆分离蛋蛋白、大大豆浓缩缩蛋白、大豆组组织蛋白白、大豆豆蛋白粉粉、大豆豆粉、乳乳清粉、奶粉、血粉等等物质，进货检检验时应应注意识识别。5.5血血浆蛋白白粉的评评审十分分必要，需技术术与原料料部门派派人对其其实地考考察。八 乳