医院PCR实验室及核酸检测院感防控课件

1、PCR实验室及核酸检测院感防控单击此处添加副标题汇报人：人民医院 医院感染管理科联防联控机制综发2020181号文件要求：“各地要加强三级医院、传染病专科医院、县（区）级及以上疾控机构、海关及有条件的县医院实验室建设，使其具备开展新冠病毒检测能力”感控人员在参与PCR实验室的建设工作，和对使用中实验室的检查中，仍存在一些问题新冠病毒核酸检测是COVID-19确诊的直接证据，也是早期发现新冠病毒感染者的有效手段 背 景医疗机构临床实验室管理办法医疗机构临床基因扩增实验室工作导则医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册（试行第二版）新型冠状病毒肺炎防控方案 （第九版）主要依据PCR实验室院感防控核酸检

2、测及PCR实验室概述01大 纲核第一部份核酸检测及PCR实验室概述PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称。又称为特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法，这种方法可以把极微量的靶DNA特异地扩增上百万倍，是基因扩增技术的一次重大革新。PCR技术凭借特异性强、灵敏度高、对检测样品要求低、方便快捷等优点，广泛应用于各种临床诊断PCR实验，即临床基因扩增实验，是专门用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一种检测手段。它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法，测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。就新冠病毒核酸检测来，RT-PCR

3、是目前使用最广泛和较准确的筛选和确认方法（一）PCR实验原理新冠病毒核酸检测流程核酸提取0第一阶段体系配置第二阶段上机检测第三阶段具备相关专业的大专以上学历或具有中级及以上专业技术职务任职资格，并有2年以上的实验室工作经历基因检验相关培训合格证书按照标本量配备实验室检测，以保证结果的准确性和报告的及时性（二）实验室检测技术人员要求开展核酸检测的实验室，应当符合病原微生物实验室生物安全管理条例（国务院令第424号）和医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法（卫办医政发2010194号）有关规定具备经过卫生健康行政部门审核备案的生物安全二级及以上实验室条件，以及临床基因扩增检验实验室条件独立设置的医

4、学检验实验室还应当符合医学检验实验室基本标准（试行）医学检验实验室管理规范（试行）等要求（三）实验室资质要求新冠核酸检测实验室按功能区布置位置的不同，可分为集中布置形式和分散布置形式开展新冠病毒核酸检测的实验室应当设置以下区域：试剂储存和准备区、标本制备区、扩增和产物分析区根据使用仪器的功能，区域可适当合并。如采用标本加样、核酸提取及扩增检测为一体的自动化分析仪，标本制备区、扩增和产物分析区可合并（四）实验室分区要求集中布置形式的实验室设置应遵循“各区独立，单向流动(注意风向，压力梯度走向)，因地制宜，方便工作”的原则（四）实验室分区要求试剂储存和准备区用于分装、储存试剂、制备扩增反应混合液，

5、以及储存和准备实验耗材该区应配备冰箱或冰柜、离心机、试验台、涡旋振荡器、微量加样器等为防止污染，该区宜保持正压状态（五）实验室各区的功能标本制备区标本转运桶的开启、标本灭活(必要时)、核酸提取及模板加入至扩增反应管等该区应配备冰箱或冰柜、生物安全柜、离心机、试验台、微量加样器，可根据实际工作需要选配自动化核酸提取仪等标本转运桶的开启、分装应在生物安全柜内完成为防止污染，该区宜保持负压状态为操作方便，标本的分装以及核酸提取也可以在独立的生物安全二级(BSL-2)实验室进行，提取的核酸可以转运至该区加至扩增反应液中（五）实验室各区的功能核酸扩增和产物分析区：进行核酸扩增反应和产物分析该区应配备实时

6、荧光定量PCR仪为防止扩增产物污染环境，该区宜保持负压状态，压力等于或低于标本制备区（五）实验室各区的功能02PCR实验室感染防控第二部份实验室核心控制目标实验室生物安全（laboratory biosafety）：实验室的生物安全条件和状态不低于容许水平，可避免实验室人员、来访人员、社区及环境受到不可接受的损害，符合相关法规、标准等对实验室生物安全责任的要求生物安全柜（ biosafety cabinet；BSC ）：具备气流控制及高效空气过滤装置的操作柜，可有效降低病原微生物或生物实验过程中产生的有害气溶胶对操作者和环境的危害生物安全实验室（ biosafety laboratory ）：

7、通过防护屏障和管理措施，达到生物安全要求的病原微生物实验室加强型生物安全二级实验室（ enhanced biosafety level 2 laboratory ）：在普通型生物安全二级实验室的基础上，通过机械通风系统等措施加强实验室生物安全防护要求的实验室相关定义PCR实验室是否等同于生物安全实验室？标本管理个人防护实验过程防控（前、中、后）措施规范处置医疗废物及时处理污染核酸检测院感防控关键点标本种类：上呼吸道标本、下呼吸道标本、便标本/肛拭子、血液标本、血清标本、尿标本、物体表面标本、污水标本、其它标本包装所有标本应当放在大小适合的带螺旋盖内有垫圈、耐冷冻的标本采集管里，拧紧将密闭后的标

8、本装入密封袋，每袋限一份标本标本包装要求要符合危险品航空安全运输技术细则相应的标准涉及外部标本运输的，应根据标本类型，按照A类或B类感染性物质进行三层包装（一）标本管理基本要求标本转运标本包装应符合国际民航组织文件 Doc9284危险品航空安全运输技术细则的 PI602分类包装要求根据当前版本的国际航空运输协会（IATA）危险品规则， SARS-CoV-2 感染疑似和确诊患者标本属于 UN 3373 B 类生物物质，涉及外部标本运输的，应按照 B类感染性物质进行三层包装疑似或确诊患者标本应标示有特殊标识，并进行单独转运。（一）标本管理基本要求注意：标本转运箱封闭前，须使用 75%酒精或 0.2

9、%含氯消毒剂喷洒消毒，再次开盖放入标本前、后也要喷洒消毒。不允许手持采样管或黄袋子装着采样管送检。标本接收标本接收人员的个人防护按采样人员防护装备执行标本运送人员和接收人员对标本进行双签收注意：接到标本后，应当在生物安全柜内对标本进行清点核对日常小规模检测，样本可以直接进入样本制备区，进行清理核对大规模检测，样本量太大，需要先接收，然后送入专门的样本整理区进行清理核对。因此，需要单独设置样本接收区、样本整理区，两区不可混淆、混合！（一）标本管理基本要求标本处理 使用含胍盐等灭活型采样液的标本无需进行灭活处理，可直接进行核酸提取使用非灭活型采样液的标本，按照核酸提取试剂盒的说明，取适量标本加至核

10、酸提取裂解液中充分混匀作用一定的时间则可以有效灭活病毒选用热灭活时可采用95加热15分钟，不推荐采用56孵育30分钟的处理方式灭活病毒，该条件不能保障充分灭活病毒检测完成后的剩余标本，可在结果报告发出到达其保存时限要求后，如为检测前非灭活标本，则装入专用密封废物转运袋中进行压力蒸汽灭菌处理，随后随其他医疗废物一起转运出实验室进行销毁处理；如为检测前已灭活标本，则无需高压灭活，直接按医疗废物一起转运出实验室进行销毁处理扩增完成后反应管不可开盖，直接放于垃圾袋中，封好袋口，不可高压，按一般医疗废物转移出实验室处理（一）标本管理基本要求核酸检测应当在生物安全二级实验室进行，并应在生物安全风险评估的基

11、础上，采取适当的个体防护措施，包括手套、口罩和隔离衣等（二）规范做好个人防护应使用0.2%含氯消毒剂或75%酒精进行桌面、台面及地面消毒消毒液需每天新鲜配制，不超 过24小时转运至实验室的标本转运桶应在生物安全柜内开启转运桶开启后，使用0.2%含氯消毒剂或75%酒精对转运桶内壁和标本采集密封袋进行喷洒消毒取出标本采集管后，应首先检查标本管外壁是否有破损、管口是否泄露或是否有管壁残留物确认无渗漏后，推荐用0.2%含氯消毒剂喷洒、擦拭消毒样品管外表面（此处不建议使用75%酒精，以免破坏标本标识）如发现渗漏应立即用吸水纸覆盖，并喷洒有效氯含量为0.55%的含氯消毒剂进行消毒处理，不得对标本继续检测操

12、作，做好标本不合格记录后需立即进行密封打包，压力蒸汽灭菌处理后销毁（三）实验前标本进行核酸提取和检测时应尽可能在生物安全柜内进行操作如为打开标本管盖或其他有可能产生气溶胶的操作，则必须在生物安全柜内进行（四）实验中需对实验室环境进行清洁，消除可能的核酸污染实验室空气清洁：实验室每次检测完毕后，可采用房间固定和/或可移动紫外灯进行紫外照射2小时以上，必要时可采用核酸清除剂等试剂清除实验室残留核酸工作台面清洁：每天实验后，使用0.2%含氯消毒剂或75%酒精进行台面、地面清洁生物安全柜消毒：实验使用后的耗材废弃物放入医疗废物垃圾袋中，包扎后使用0.2%含有效氯消毒液或75%酒精喷洒消毒其外表面，手消

13、毒后将垃圾袋带出生物安全柜放入实验室废弃物转运袋中；试管架、实验台面、移液器等使用75%酒精进行擦拭；随后关闭生物安全柜，紫外灯照射30分钟转运容器消毒：转运及存放标本的容器使用前后需使用0.2%含氯消毒剂或75%酒精进行擦拭或喷洒消毒塑料或有机玻璃材质物品清洁：使用0.2%含氯消毒剂或过氧乙酸或过氧化氢擦拭或喷洒（五）实验后废液的处理实验室产生的废液可分为普通污水和感染性废液普通污水产生于洗手池等设备，对此类污水应当排入实验室水处理系统，经统一处理达标后进行排放感染性废液即在实验操作过程中产生的废液，需采用化学消毒（0.55%含氯消毒剂处理）或物理消毒（紫外照射30分钟以上）方式处理，确认彻

14、底消毒灭活后方可排入实验室水处理系统，经统一处理达标后进行排放污水消毒处理效果按GB18466医疗机构水污染物排放标准相关规定进行评价（六）实验室医疗废物管理固体废物的处理应当分类收集收集容器应当具有不易破裂、防渗漏、耐湿耐热、可密封等特性实验室内的潜在感染性废物不允许堆积存放，应当及时进行压力蒸汽灭菌处理废物处置之前，应当存放在实验室内指定的安全位置小型固体废物如检测耗材、个人防护装备等均需使用双层防渗漏专用包装袋打包密封后经过压力蒸汽灭菌处理，再转运出实验室体积较大的固体废物如HEPA过滤器，应当由专业人士进行原位消毒后，装入安全容器内进行消毒灭菌。不能进行压力蒸汽灭菌的物品如电子设备可采用环氧乙烷熏蒸消毒处理经消毒灭菌处理后移出实验室的固体废物需集中交由医疗废物处理单位进行处置（六）实验室医疗废物管理PCR实验室是否必须设污物走廊？（六）实验室医疗废物管理标本污染生物安全柜的操作台造成局限污染时：立即用吸水纸覆盖，并使用0.55%含氯消毒剂进行喷洒消毒。消毒液需要现用现配，24小时内使用。标本倾覆造成实验室污染时：保持实验室空间密闭，避免污染物扩散。立即使用润湿有0.55%含氯消毒剂的毛巾覆盖污染区。