医学药物分析第十五章甾体激素类药物分析

1、医学药物分析第十五章甾体激素类药物分析激素（Hormone，荷尔蒙） 是人体内各种内分泌腺所分泌的一种生物活性物质。激素作用于特定的称为靶器官的组织、细胞上而发挥作用。如果激素分泌出现平衡失调，可使人体发生病变，如甲亢、糖尿病等。 概 述甾体激素类药物均具有环戊烷骈多氢菲母核。第一节 基本结构与性质按照C10,C13,C17取代基不同分类按药理作用分类第一节 基本结构与性质43酮基（紫外吸收）天然皮质激素：氢化可的松孕甾烷母核有21个碳原子C17醇酮基（还原性）孕甾烷母核第一节 基本结构与性质311172021氢化可的松(hydrocortisone)醋酸地塞米松(dexamethasone

2、acetate)16-甲基21-酯化17-羟基9-氟3-酮1,2-双键11-羟基20-酮第一节 基本结构与性质第一节 基本结构与性质A环4-3-酮基,为共轭体系,在波长240nm附近有紫外吸收,部分药物在C1-C2之间有双键,也有紫外吸收肾上腺皮质激素类药物结构特征ABDC1234第一节 基本结构与性质C17位上为-醇酮基,具有还原性.多数药物有C17-羟基,部分药物-醇羟基与酸成酯.第一节 基本结构与性质部分药物的C6或C9位由卤素取代,呈相应的卤化物反应第一节 基本结构与性质部分药物C11位上有羟基或酮基取代第一节 基本结构与性质甲睾酮(methyltestosterone)丙酸睾酮(te

3、stosterone propionate)苯丙酸诺龙(nandrolone phenylpropionate)17-羟基第一节 基本结构与性质甲睾酮(methyltestosterone)A环4-3-酮基C17位上为羟基,部分药物的羟基被酯化雄性激素上的母核为19个碳原子,蛋白同化激素在C10位上一般无角甲基,母核只有18个碳原子第一节 基本结构与性质A环4-3-酮基C17位上有甲酮基或乙炔基. 孕甾烷母核有21个碳原子 口服被迅速破坏失效，只能肌注43酮基第一节 基本结构与性质黄体酮(progesterone)醋酸甲地孕酮(megestrol acetate )米非司酮(mifeprist

4、one)第一节 基本结构与性质天然的雌性激素：雌二醇 雌甾烷母核有18个碳原子 A环为苯环，C3位上有酚羟基，C17位上有羟基 结构不稳定，口服无效第一节 基本结构与性质结构修饰 炔雌醇 戊酸雌二醇 苯甲酸雌二醇乙炔基引入，使仲醇变叔醇，增加空间位阻，阻碍酶对药物的氧化代谢，可口服17位羟基酯化，酯在体内缓慢水解，延效3位羟基酯化，酯在体内缓慢水解，延效可口服高效长效人工合成代用品：非甾体化合物己烯雌二酚高效、长效第一节 基本结构与性质43酮C17醇酮基C17羟基C17甲酮基A环为3OH苯环肾上腺皮质激素+雄性与蛋白同化激素+雌性激素+孕激素+鉴别反应UV、羰基试剂、氨基脲反应还原性（碱性酒石

5、酸酮、氨制AgNO3）可成酯与亚硝基铁氰化钠、间二硝基苯反应UV、与重氮苯磺酸盐反应特殊官能团与分析方法第二节 理化性质与鉴别试验白色至微黄色粉末或结晶性粉末。三氯甲烷中微溶至易溶；甲醇或乙醇中微溶乙醚或植物油极微溶水中不溶1. 性状与溶解度第二节 理化性质与鉴别试验2、熔点一具有鉴定的意义；二则可以反映药物的纯度。炔诺酮：熔点2022083.比旋度甾体激素多具有手型碳原子，具有旋光性。4.吸收系数第二节 鉴别试验（一）强酸的呈色反应强酸： H2SO4、H3PO4、HClO4、HCl原理：酮基先质子化，形成正碳离子，再与HSO4-作用呈色。甾体激素类药物硫酸、磷酸、高氯酸、盐酸呈色显 色荧光加

6、水稀释氢化可的松棕黄色至红色 绿色黄色至橙黄色炔雌醇橙红黄绿玫红絮状炔雌醚橙红黄绿红色泼尼松黄橙黄色渐变蓝绿色泼尼松龙深红灰色絮状地塞米松淡红棕色颜色消失苯甲酸雌二醇黄绿色蓝色淡橙色与硫酸显色反应1. C17-醇酮基还原性A. 呈色反应C17-醇酮基四氮唑盐OH-呈色B. 沉淀反应C17-醇酮基氨制硝酸银银镜反应C17-醇酮基碱性酒石酸铜Cu2O（多伦试液）（斐林试液）2.C3酮基和C20酮基甾酮类2,4-二硝基苯肼呈色异烟肼、硫酸苯肼异烟腙（黄色）睾酮异烟双腙（黄色）黄体酮成腙反应中 C20酮基受C18甲基的空间位阻影响，反应较慢，需加热或较长时间放置，才完成反应。 C3酮基空间位阻最小，最

7、易起反应，室温下生成单腙。3.甲酮基或活泼亚甲基蓝紫色黄体酮 适用：具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物。 能与亚硝基铁氰化钠、间二硝基酚、芳香醛反应呈色。黄体酮专属性反应。黄体酮其他甾体亚硝基铁氰化钠蓝紫色淡橙色或不显色又称为碱性硝普钠反应。碱性甲酮基：有机氟F有机破坏有机氯4、卤元素的呈色反应茜素氟蓝硝酸亚铈硝酸硝酸银呈蓝紫色 ClAgCl氯原子结合在母核环上 适用：雌激素类药物。5.酚羟基的呈色反应 能与重氮苯磺酸发生偶合反应，生成红色偶氮染料。JP利用此反应鉴别苯甲酸雌二醇6. 乙炔基炔雌醇白含炔基的甾体激素，炔诺酮，炔雌醇等 原理：一些甾体激素类药物具有醋酸酯、戊酸酯及已酸酯的结构

8、，可先行水解，根据水解产物来鉴别。7、酯的水解产物的反应 适用： 本类药物C3、C17或C21位上羟基的酯 结果： 醋酸酯水解后生成的醋酸可与乙醇反应，生成有香气醋酸乙酯。 戊酸或己酸酯类水解后可生成有特臭的戊酸或己酸，进行鉴别。-3-酮240nm左右280nm左右苯环其他共轭结构200-760nm有特征吸收。可规定最大吸收波长、A、吸收系数、A大/A小。原 理方 法 曲安息龙丙酸倍氯米松溶剂甲醇乙醇浓度20g/ml20g/ml结果判断在238nm处有最大吸收在239nm处有最大吸收，A为 0.570.60，在239nm与263nm 处的吸收度比值为2.252.45示 例结构特征： 酚羟基 C

9、17 OH C17 乙炔基例:炔雌醇1505cm-13505cm-13300cm-11590cm-13610cm-1酚羟基醇羟基1615cm-1苯环的骨架振动eg2：黄体酮结构特征： -3-酮 C17-酮基1700cm-1C=O20位酮基1665cm-13位酮基1615cm-1870cm-1C-H双键TLC法HPLC应用甾体激素类药物原料与制剂的鉴别甾体激素类药物原料与制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）方法对照品法对照品法结果判断要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致第三节 特殊杂质检查

10、杂质来源：原料、中间体、异构体、降解产物以及试剂和溶剂。 其他甾体：有些杂质与该甾体激素药物结构类似，也具有一定的药理作用而又互不相同，因此在甾体激素类药物的质量控制中，“其他甾体”的限度检查显得很重要。检查方法：判定方法：规定杂质斑点数目 规定杂质斑点颜色1、TLC法（自身对照法）eg：氢化可的松中其他甾体的检查 供试液：本品+氯仿-甲醇（9：1） 浓度：3.0mg/ml 对照液：供试液（3.0mg/ml）+氯仿-甲醇（9：1） 60g/ml 层析：供试液 对照液 点样、展开、斑点检出。 判断：供试液如显杂质斑点，不得多于3个，其颜色与对照液的主斑点比较，不得更深。氢化可的松中其他甾体检查对

11、照品60g/ml供试品3.0mg/ml图A中峰1面积的四分之三判定方法： 规定杂质峰数目 规定杂质峰面积2、HPLC法（自身对照法） 杂质来源：地塞米松、氟轻松和曲安奈得等甾体激素类药物，在生产中使用二氧化硒(SeO2)脱氢工艺，药物可能引入杂质硒。 方法： 结果判断：供试品溶液的吸光度不得大于硒对照溶液的吸光度（0.0050.01） 。eg：地塞米松磷酸钠 方法：GC色谱法 杂质来源：地塞米松磷酸钠生产中，使用大量甲醇和丙酮。 结果判断：不得出现甲醇峰，甲醇含量0.3 丙酮规定不得过5.0% 方法：对照品（KH2PO4），磷钼酸比色法 杂质来源：地塞米松磷酸钠生产过程中，由磷酸酯化时残存的过

12、量磷酸盐。 结果判断：供试品溶液的吸光度不得大于对照溶液的吸光度。740nm 原理：供试液+钼酸铵+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸 钼蓝第四节 含量测定有色甲瓒四氮唑盐醇酮基-a-17COH -（一）四氮唑盐比色法（1）原理：肾上腺皮质激素类C17-醇酮基强还原性。氯化三苯四氮唑（TTC）三苯甲瓒深红25氢氧化四甲基铵对照液供试液ATTC4045暗（2）方法：对照品法（3）影响因素A. 基团对反应速度的影响C11= OC17OHC21OH未酯化C21-OH酯化B、溶剂和水分的影响 以无水无醛的乙醇为溶剂，水含量大时，呈色减慢，不超过5对结果没有影响。C、O2与光线的影响避光、隔绝空气、快速、充N

13、2除去O2D、碱的种类及加入顺序以氢氧化四甲基铵的结果最佳加入顺序：皮质激素溶液四氮唑盐碱试液皮质激素与碱接触会部分分解E. 温度与时间室温（25）反应4045 minF. 干扰物的影响 选择性的测定C17位未被氧化和降解的药物氧化物和水解产物不发生反应1.原理异烟腙（黄）HCl420nm（二）异烟肼比色法C3-酮基+异烟肼H2O肾上腺皮质激素 雄性激素蛋白同化激素孕激素2.方法：对照品法60异烟肼无水甲醇对照液供试液A暗60酸性3.影响因素A.反应速度（反应专属性） C3=OC17= O 、C20= O C11= O 不反应B. 溶剂的选择异烟肼盐酸盐受溶解度的影响无水甲醇无水乙醇甲醇对试剂

14、的稳定性好甲醇呈色强度较无水乙醇中高乙醇对植物油的溶解度小C.水分、温度、O2与光线的影响 含水量腙水解A% O2与光线对反应的影响不大 t D.酸的种类和浓度及异烟肼的浓度 酸:异烟肼 = 2:1 吸光度最大4-3-酮基的甾体激素在室温不到1h即可定量地与酸性异烟肼反应；其他长时间放置或加热后方可反应完全，因此在反应条件下，本法对4-3-酮基甾体具有一定的专属性。E:反应的专属性原理max=465桃红黄色雌激素2OH乙醇-42SOHmax=515又称为铁-酚试剂法（三）Kober反应比色法：雌二醇-3-甲醚max=465max=515要求：专属性强、灵敏度高；甾体激素给药量少；血药浓度在ng/mL；-灵敏性生物体内有内源性甾体激素，甾体激素药物在体内有多种代谢产物；-专属性本章小结1.结构：三种母核（雄甾烷，雌甾烷，孕甾烷） 各类激素的结构特点2.性质和鉴别与强酸呈色；官能