芪苈强心对慢性心力衰竭大鼠肾脏AQP-2及心脏功能的影响-基础研究课件

1、芪苈强心对慢性心力衰竭大鼠肾脏AQP-2及心脏功能的影响Effects of qiliqiangxin on the renal expression of aquaporin-2 gene in rats with chronic heart failure南方医科大学南方医院心血管内科许顶立 邬真力 黄鹏心力衰竭时全身总水量、总Na+量、细胞外容量、血浆容量明显增加Anand IS. Heart Failure, 1997心力衰竭时水钠潴留的机理血Na+与心力衰竭的预后充血性心力衰竭时低Na+血症的发生机制 6. aquaporin-2 肾脏AQP2水通道蛋白Aquaporin(AQP)是

2、具有高度选择性水通道的同源蛋白质家族，在维持机体的水平衡中起着重要作用，并且与水平衡紊乱所致疾病有密切关系。 AQP2是肾脏在生理条件下最主要的受AVP调节的水通道，是目前唯一发现的其基因突变可导致肾性尿崩症的Aquaporin水通道蛋白，被认为是维持体内水平衡调节的必须物质。Nielsen S, Physiol Rev. 2002; 82: 205244.充血性心力衰竭大鼠肾脏AQP2水通道mRNA表达的改变C C HF1 HF1 HF2 HF2AQP2GAPDHXu DL. J Chin Invest, 1997; 99: 1500-1505.研 究 背 景CHF大鼠血浆AVP较对照组升高

3、，同时上调肾脏AQP-2的基因和蛋白表达。CHF时水潴留的重要途径: 心输出量下降 垂体分泌血管加压素（AVP ） 肾集合管主细胞V2-R AQP-2表达上调 集合管水重吸收 水潴留。下调肾脏AQP-2的表达，是否可以成为纠正CHF患者水潴留、缓解临床症状、改善心脏功能的靶点之一？Xu DL. J Chin Invest, 1997; 99: 1500-1505.许顶立等, 中华医学杂志,1998;78(2):118-120 V2拮抗剂(OPC-31260)对充血性心力衰竭大鼠肾脏AQP2水通道蛋白mRNA表达的影响 C HF2 HF+V C HF2 HF+V C HF2 HF+V 肾皮质 肾

4、外髓质 肾内髓质AQP2GAPDHXu DL. J Chin Invest, 1997; 99: 1500-1505.V2拮抗剂(OPC-31260)对充血性心力衰竭大鼠肾脏内髓质AQP2水通道蛋白表达的影响 C C HF2 HF2 HF+V HF+V MXu DL. J Chin Invest, 1997; 99: 1500-1505. 实 验 方 法模型组（CHF）：分为CHF-1组（n=9）和 CHF-4组（n=9） 给予生理盐水注入胃内。芪苈大剂量治疗组（QH）：分为QH-1组（n=8）和QH-4组（n=9） 给予芪苈强心1.0 gkg-1d-1注入胃内。芪苈中剂量治疗组（QM）：分为

5、QM-1组（n=8）和QM-4组（n=9） 给予芪苈强心0.5gkg-1d-1注入胃内。芪苈小剂量治疗组（QL）：分为QL-1组（n=9）和QL-4组（n=9） 给予芪苈强心0.25 gkg-1d-1注入胃内。另设对照组（CTL）：分为CTL-1组（n=10）和CTL-4组（n=10） 给予生理盐水注入胃内。结 果 芪苈强心治疗CHF大鼠1周后血液生化的变化Biochemical data in different groups after 1 week treatment with qiliqiangxingroup K+(mmol/L) Na+（mmol/L) Cr(mol/L) Osm(

6、mosmol/kg) AVP(pg/ml) BNP(pg/ml) CTL-1 5.60.3 148.22.7 28.52.7 303.44.5 3.00.4 90.518.7 CHF-1 5.70.3 142.72.6 29.62.1 297.87.7 7.91.8 375.160.4 QH-1 5.40.4 144.73.7 29.02.9 298.24.7 8.11.1 348.165.1QM-1 5.20.3 144.04.3 30.53.1 301.65.1 7.31.7 361.053.3QL-1 5.50.4 145.23.8 28.23.4 297.44.1 7.51.5 370

7、.955.7F值 1.346 3.487 0.427 2.946 32.730 50.642P值 0.277 0.037 0.735 0.048 0.001 0.001Compared to CTL-1, : P 0.01.结 果 The changes of urinary volume in different groups rats during 1 week treatment QH-1组、QM-1组、QL-1组大鼠随着用药时间的延长尿量显著增加实时荧光定量PCR检测各组V2-RmRNA变化Comparison of relative mRNA quantity level in di

8、fferent groups结 果 CHF-1组V2-R mRNA表达较CTL-1组显著增加（P0.01）经过1周芪苈强心治疗后，QH-1组、QM-1组、QL-1组V2-R mRNA表达与CHF-1组相比均比无显著性差异（P0.05）Compared to CTL-1,: P 0.01.治疗1周后各组大鼠肾脏AQP-2蛋白的表达The renal AQP-2 expression in different groups after 1 week treatment.结 果 29KD3645KD 1 2 3 4 5.注：1为CTL-1组; 2为CHF-1组; 3、4、5分别为QH-1、QM-1、

9、QL-1组Compared to CTL-1,: P 0.01.结 果 芪苈强心治疗CHF大鼠4周后血液生化的变化Biochemical data in different groups after 4 week treatment with qiliqiangxingroup K+(mmol/L) Na+（mmol/L) Cr(mol/L) Osm(mosmol/kg) AVP(pg/ml) BNP(pg/ml) CTL-4 5.70.2 148.42.4 27.32.0 303.24.8 3.00.4 97.116.9 CHF-4 5.40.3 143.32.5 29.82.1 297.8

10、7.5 7.90.5 387.271.0QH-4 5.60.3 147.83.0 30.63.4 299.34.4 6.10.5 275.063.8QM-4 5.50.4 146.33.5 29.73.6 298.75.1 6.50.4 298.257.6 QL-4 5.40.3 147.03.4 30.12.0 297.94.5 6.60.7 306.465.1 F值 1.832 7.794 1.518 2.535 144.214 41.627 P值 0.161 0.001 0.228 0.074 0.001 0.001: P 0.01, Compared to CTL-4; : P 0.0

11、1, Compared to CHF-4 group; : P 0.05, Compared to QH-4.结 果 The changes of urinary volume in different groups rats during 4 week treatment 芪苈强心治疗4周后，QH-4组、QM-4组、QL-4组尿量较治疗前显著升高，差异有统计学意义。实时荧光定量PCR检测各组V2-RmRNA变化Comparison of relative mRNA quantity level in different groups结 果 经过4周芪苈强心治疗后，QH-4组、QM-4组、QL

12、-4组V2-R mRNA表达显著降低，与CHF-4组相比均有显著性差异，而且QH-4组较QM-4组、QL-4组下降更显著。 Compared to CTL-4, : P 0.01; Compared to CHF-4 group, : P 0.05, : P 0.01;Compared to QH-4,: P 0.05.00.511.522.53CTL-4CHF-4QH-4QM-4QL-4V2-R mRNA(% of control)实时荧光定量PCR检测各组AQP-2mRNA变化Comparison of relative mRNA quantity level in different g

13、roups结 果 芪苈强心治疗4周后，QH-4组、QM-4组、QL-4组显著降低AQP-2 mRNA表达，与CHF-4组相比均有显著性差异，而且QH-4组较QM-4组、QL-4组下降更显著。 Compared to CTL-4, : P 0.01; Compared to CHF-4 group, : P 0.05, : P 0.01;Compared to QH-4,: P 0.05.00.511.522.533.5CTL-4CHF-4QH-4QM-4QL-4AQP2 mRNA(% of control)治疗4周后各组大鼠肾脏AQP-2蛋白的表达The renal AQP-2 express

14、ion in different groups after 4 week treatment结 果 29KD3645KD 1 2 3 4 5 Compared to CTL-4, : P 0.01; Compared to CHF-4 group, : P 0.01;Compared to QH-4,: P 0.05.注：1为CTL-4组; 2为CHF-4组; 3、4、5分别为QH-4、QM-4、QL-4组 00.511.522.53CTL-4CHF-4QH-4QM-4QL-4AQP2 protein expression(% of control)芪苈强心降低肾脏水通道蛋白2（AQP2）的表

15、达肾脏水通道蛋白2（AQP2）增加集合管对水的重吸收，对CHF时水潴留起着重要的作用各组大鼠肾脏髓质AQP2免疫荧光表达，假手术组肾脏表达很少，CHF组表达明显增加；芪苈强心组较心衰组表达减少，但速尿组表达增加。 QL中剂量组 QL小剂量组 速尿组假手术组 心衰组 QL大剂量组讨 论本研究发现，QH-1组、QM-1组、QL-1组大鼠随着用药时间的延长，大鼠尿量逐渐增多，说明芪苈强心具有利尿作用。QH-1组、QM-1组、QL-1组大鼠的血浆AVP和肾脏AQP-2表达未发生显著改变，提示芪苈强心可以显著增加CHF大鼠尿量，但是其利尿作用并非直接改变肾脏AQP-2表达所致。 在经过4周芪苈强心治疗后，QH-4组、QM-4组、QL-4组大鼠血浆BNP较CHF-4组显著降低，提示经过4周芪苈强心治疗，CHF大鼠心脏功能明显改善。随着心脏功能恢复