新冠病毒感染的实验室检查（新冠肺炎核酸检测学习专家课堂）

1、新冠病毒感染的实验室检查一二新型冠状病毒及其肺炎新冠核酸检测技术及其进展三新冠特异性抗体检测四新冠其他实验室检查项目一新型冠状病毒及其肺炎新型冠状病毒肺炎（中国）截至7月14日 21：00, 全国累计 确诊85,671,死亡4649例;广东省 累计确诊1650例，死亡8例。截至7月14日 21：30, 累计确诊 13220,013,死亡572,849例。新型冠状病毒肺炎（海外）冠状病毒(Coronaviruses)单股正链RNA病毒，巢病毒目（Nidovrales)冠状病毒科(Coronaviridae)正冠状 病毒亚科(Orthocoronavirinae).分为、四个属可感染包括人类在内的

2、许多动物物种人类冠状病毒主要经飞沫、气溶胶传播或通过直接接触分泌物。也有证据表明可经 粪口途径传播。对热敏感 ，56 30分钟、75%乙醇、含氯消毒剂、过氧乙酸、乙醚和氯仿等脂 溶剂均可有效灭活病毒。Yu Chen.et al.Emerging coronaviruses: Genome structure, replication, and pathogenesis. J Med Virol. 2020;16.常见具有致病性的冠状病毒冠状病毒的基因组结构与功能Yu Chen.et al.Emerging coronaviruses: Genome structure, replication

3、, and pathogenesis. J Med Virol. 2020;16.2019新冠病毒的系统进化分析Roujian Lu,et al.Genomic characterisation and epidemiology of 2019 novel coronavirus. Lancet,2020 /10.1016/S0140-6736(20)30251-8感染疾病精准诊断，说易行难肺炎15-25% 病因不明发热待查/脓毒血症20% 病因不明脑炎/脑膜炎 40-60% 病因不明无法及时精准诊断感染病因导致治疗延误或治疗不当，加重病情甚至致死1. Ewig, et al, Eur Res

4、pir J; 2002； 2. Louie, et al, Clin Infect Dis; 2005；3. Glaser, et al, Clin Infect Dis; 2006；4. Vora, et al, Neurology; 2010； 5. Eber, et al, Arch Intern Med; 2010病原体培养与鉴定阳性可作为确诊依据；是发现新病毒的重要技术手段 特异性良好，成本低，对实验室硬件要求低但耗时耗力，难以应用于临床早期诊断和指导治疗；一些病毒条件苛刻，难以培养分子诊断技术特异、敏感、快速病原体抗原的检测七项呼吸道病毒检测试剂盒(免疫荧光法, DFA)（腺病毒，

5、呼吸道合胞病毒，甲型、乙型流感病毒，I、II、III型副流感病毒）病原体血清抗体的检测可出现假阳性和假阴性血清特异性抗体检测对早期诊断意义有限。九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒(免疫荧光法, IFA)目前临床常见呼吸道感染病原体检测手段新冠病毒实验室检测的方法学Roshan J,et al.Laboratory Testing Methods for Novel Severe Acute Respiratory Syndrome-Coronavirus-2 (SARS-CoV-2). Front. Cell Dev. Bio,2020,8新冠病毒检测项目的应用价值Stephanie w

6、ard, et al.Clinical testing for COVID-19.J Allergy Clin Immunol.2020,146(1):23-34.二新冠核酸检测技术及其进展诊断及出院标准均需要进行核酸检测新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案（试行第七版）国家食药局已批准的新型冠状病毒核酸诊断产品编号产品名称方法学公司123456789101112131415161718192019-nCoV核酸检测试剂盒2019-nCoV核酸检测试剂盒2019-nCoV核酸检测试剂盒2019-nCoV核酸检测试剂盒2019-nCoV核酸检测试剂盒2019-nCoV核酸检测试剂盒2019-nCoV核

7、酸检测试剂盒2019-nCoV核酸检测试剂盒2019-nCoV核酸检测试剂盒2019-nCoV核酸检测试剂盒2019-nCoV核酸检测试剂盒2019-nCoV核酸检测试剂盒2019-nCoV核酸检测试剂盒2019-nCoV核酸检测试剂盒2019-nCoV核酸检测试剂盒2019-nCoV核酸检测试剂盒2019-nCoV核酸检测试剂盒2019-nCoV核酸检测试剂盒2019-nCoV核酸分析软件中山大学达安基因股份有限公司 华大生物科技（武汉）有限公司 上海捷诺生物科技有限公司上海之江生物科技股份有限公司 迈克生物股份有限公司江苏硕世生物科技股份有限公司 武汉明德生物科技股份有限公司北京卓诚惠生生

8、物科技股份有限公司上海伯杰医疗科技有限公司 北京金豪制药股份有限公司 圣湘生物科技股份有限公司上海复星长征医学科学有限公司 上海仁度生物科技有限公司武汉中帜生物科技股份有限公司武汉中帜生物科技股份有限公司 杭州优思达生物技术有限公司 安邦（厦门）生物科技有限公司 华大生物科技（武汉）有限公司 华大生物科技（武汉）有限公司202019-nCoV核酸检测试剂盒荧光PCR法深圳联合医学科技有限公司212019-nCoV核酸检测试剂盒荧光PCR法北京纳捷诊断试剂有限公司222019-nCoV核酸检测试剂盒杂交捕获免疫荧光法安邦（厦门）生物科技有限公司232019-nCoV核酸检测试剂盒荧光PCR法浙江

9、东方基因生物制品股份有限公司24六项呼吸道病毒核检测试剂盒恒温扩增芯片法成都博奥晶芯生物科技有限公司源自国家食品药品管理局网站（2020-7-14）荧光PCR法 荧光PCR法 荧光PCR法 荧光PCR法 荧光PCR法 荧光PCR法 荧光PCR法 荧光PCR法 荧光PCR法 荧光PCR法 荧光PCR法荧光PCR法 RNA捕获探针法RNA恒温扩增-金探针层析法双扩增法恒温扩增-实时荧光法 杂交捕获免疫荧光法联合探针锚定聚合测序法国家食药局已批准的新型冠状病毒抗体诊断产品编号产品名称方法学公司12019-nCoV抗体检测试剂盒胶体金法广州万孚生物技术股份有限公司22019-nCoV 抗体检测试剂盒胶

10、体金法上海芯超生物科技有限公司32019-nCoV IgM抗体检测试剂盒胶体金法广东和信健康科技有限公司42019-nCoV IgM/IgG抗体检测试剂盒胶体金法珠海丽珠试剂股份有限公司52019-nCoV IgM/IgG抗体检测试剂盒胶体金法英诺特（唐山）生物技术有限公司62019-nCoV IgM/IgG抗体检测试剂盒胶体金法南京诺唯赞医疗科技有限公司2019-nCoV抗体检测试剂盒磁微粒化学发光法厦门万泰凯瑞生物技术有限公司82019-nCoV IgM抗体检测试剂盒磁微粒化学发光法博奥赛斯（重庆）生物科技技有限公司*92019-nCoV IgG抗体检测试剂盒磁微粒化学发光法博奥赛斯（重庆

11、）生物科技技有限公司*102019-nCoV IgM抗体检测试剂盒磁微粒化学发光法丹娜（天津）生物科技有限公司112019-nCoV IgG抗体检测试剂盒磁微粒化学发光法丹娜（天津）生物科技有限公司122019-nCoV 抗体检测试剂盒胶体金法上海芯超生物科技有限公司132019-nCoV IgM抗体检测试剂盒胶体金法北京新兴四寰生物技术有限公司142019-nCoV IgM/IgG抗体检测试剂盒酶联免疫法北京华大吉比爱生物技术有限公司152019-nCoV IgM/IgG抗体检测试剂盒量子点荧光免疫层析法北京金豪制药股份有限公司162019-nCoV IgM抗体检测试剂盒磁微粒化学发光法郑州

12、安图生物工程股份有限公司172019-nCoV IgG抗体检测试剂盒磁微粒化学发光法郑州安图生物工程股份有限公司182019-nCoV IgM抗体检测试剂盒直接化学发光法迈克生物股份有限公司192019-nCoV IgG抗体检测试剂盒直接化学发光法迈克生物股份有限公司202019-nCoV抗体检测试剂盒上转发光免疫层析法北京热景生物技术股份有限公司源自国家食品药品管理局网站（2020-7-14）TypeTargetAssay timeProcess typeFDA-EUAExamplesPCRViral RNA28 hours; 12Plate56#Roche, #LabCorp,#BioMe

13、rieux,#Qiagen,#Perkin-Elmer,#BectonhoursDickinson,#Luminex, #ThermoFisher, othersPCR-POCViral RNA=15d)Total SensitivityEuroimmun (ELISA)IgA86.1%65.5%87.09%93.93%83.65IgG98.6%17.2%66.12%90.9%61.7%IgA or IgG87.5%65.5%88.7%93.93584.4%Maglumi (CLIA)IgM100.0%14.3%64.51%87.5%58.7%IgG100.0%7.1%54.8%87.5%53

14、.2%IgM or IgG100.0%17.9%69.4%93.8%64.3%Alltest (LFA)IgM100.0%21.1%19.0%60.0%28.9%IgG100.0%21.1%33.3%86.7%60.0%IgM or IgG100.0%26.3%42.9%93.3%64.4%Clungene (LFA)IgM91.3%16.2%42.3%55.3%39.2%IgG98.1%29.7%60.3%97.4%62.1%IgM or IgG90.3%35.1%64.1%97.4%65.4%IgM and IgG99.0%10.8%38.5%55.3%35.9%OrientGene (L

15、FA)IgM95.1%40.5%75.6%97.4%72.5%IgG93.2%40.5%69.2%92.1%68.0%IgM or IgG91.3%46.0%80.8%97.4%76.5%IgM and IgG97.1%35.1%64.1%92.1%64.1%VivaDiag (LFA)IgM100.0%35.1%64.1%97.4%65.4%IgG99.0%35.1%60.3%94.7%62.8%IgM or IgG99.0%35.1%64.1%97.4%65.4%IgM and IgG100.0%35.1%60.3%94.7%62.8% 新冠抗体检测的性能比较表Laboratory dia

16、gnosis of coronavirus disease-2019 (COVID-19). Clin Chim Acta. 2020 510: 3546.新冠抗体确认阳性*-新冠抗体 筛查+PPV = 9999/(9999 + 9900)= 50.25 %-+9999 (TP) 1 (FN)9900 (FP)980100 (TN)NPV = 989,010/(1 + 989,010) = 99.99 %感染者10,000未感染990,000灵敏度 = 99.99 %特异性 =99 %prevalence = 1 %在低感染率人群，假阳性不可忽略1%的感染率，如特异性99%，PPV只有50%I

17、gM(-)/IgG(+)IgG假阳性或为急性感染， 可继续观察IgG滴度，如 出现增加且达4倍以上， 则为急性或近期感染IgM(+)/IgG(+)疑为急性感染，间隔一周 左右再次检测IgM(+)/IgG(-)疑为急性感染，但需间隔 一周左右再次检测IgM(-)/IgG(-)阴性病毒核酸检测阴性，但患者 疑似，同时检测特异 IgM/IgGIgM(+)/IgG(-)，IgM(+)可能为假阳性，后续可能 继续检测观察，如患者直 至康复，结果不变，则 IgM可确认为假阳性IgM(+)/IgG(+)，可判断 为急性感染IgM(-)/IgG(+)或IgM(+)/IgG(+)，但IgG滴度 持续增高，达4倍

18、以上，则可 判断为急性或近期感染可按图所示流程进行检测以判断患者 是否为急性或近期感染。张瑞，李金明. 也谈新型冠状病毒核酸检测“假阴性”新冠抗体结果的解读新冠抗体检测阳性不能像病毒核酸检测阳性一样作为病毒感染的“金标准”，不能作为新冠 肺炎确诊和排除的唯一依据。不适用于一般人群的筛查，仅可作为已有病毒核酸检测的补充。抗 体检测必须IgM和IgG同时检测通常需多次动态检测来确认。各种常见新冠病毒检测方法的特点Roshan J,et al.Laboratory Testing Methods for Novel Severe Acute Respiratory Syndrome-Coronavi

19、rus-2 (SARS-CoV-2). Front. Cell Dev. Bio,2020,8四新冠其他实验室检查项目新冠病毒肺炎的实验室检查发病早期白细胞总数正常或减低，淋巴细胞计数减少部分患者出现肝酶、LDH、肌酶和肌红蛋白增高;部分危重者可见肌钙蛋 白增高多数患者CRP和血沉升高，降钙素原正常。严重者D-二聚体升高、外周血 淋巴细胞进行性减少。重型、危重型患者常有炎症因子升高。在鼻咽拭子、痰、下呼吸道分泌物、血液、粪便 等标本中可检测出新型冠 状病毒核酸。为提高核酸检测阳性率，建议尽可能留取痰液，实施气管插管患者采集下 呼吸道分泌物。ParameterAbnormalityUtility

20、 for prognosticationBiochemistryInflammatory biomarkersInterleukin 6+ VelocityHyperinflammatory syndromeProcalcitonin+ VelocityBacterial (Super) infectionAcute phase proteinsC-reactive proteinInflammation/sepsisAlbuminResponse to severe inflammationFerritinLungpHAssessment of pulmonary functionCheck

21、 blood gases regularly (every 30 minutes if patient deteriorating)Partial pressure of oxygen (pO2)Partial pressure of carbon dioxide (pCO2)Bicarbonate (HCO3)N/ Fraction of inspired oxygen (FIO2)LactateRenal+Electrolytes (Na /K /CL )+NaInsensible losses and diuretic therapy May portend acute kidney i

22、njuryUreaAcute kidney injury (AKI)Cr increase 26 mol/L/48 h; or 1.5 baseline/7 daysCreatinine (Cr)LiverTotal bilirubinLiver injuryAlanine transaminase (ALT)Aspartate aminotransferase (AST)Lactate dehydrogenase (LDH)Tissue damage/multiple organ failureHeartHigh-sensitivity cardiac troponinCardiac myo

23、sitis/increased oxygen demand/inflammationB-type natriuretic peptideSeverity of inflammation/ventricular dysfunction常见检验项目在新冠肺炎诊疗中的应用ParameterAbnormalityUtility for prognosticationOtherCreatine phosphokinase (CPK)Muscle injuryTriglyceridesIncreased lipolysisGlucoseN/Increased stress responseIonized

24、calciumRI/impaired PTH action/chelation precipitationPhosphateRequired for multiple enzyme functionMagnesiumVitamin D (25(OH)D)Inflammatory response/decreased synthesisHaematologyFull blood countWhite cell count (WCC)Response to bacterial infectionNeutrophilsLeucocytesLymphocytesImmunological respon

25、se to COVID-19PlateletsN/Counts fall consequent to consumption/DICCoagulation profileD-dimersActivation of blood coagulationFibrinogen concentration falls in DIC or consumptive coagulopathyFibrinogenProthrombin time (PT)ImmunologyCytokine panelIL-1, IL6, IL8, TNF-Disease severity/cytokine storm syndrome常见检验项目在新冠肺炎诊疗中的应用DIC disseminated intravascular coagulopathy, N normal, RI renal impairment, PTH parathyroid hormonePaula M. O shea, et al. COVID-19 in adults: test menu for hospital blood science laboratories . J M