选修1多聚酶链式反应扩增DNA片段 完整版PPT

1、1 PCR概述 PCR原理 PCR实验操作 PCR应用2PCR技术概论聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80 年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA 片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断；可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA 供分析研究和检测鉴定。过去几天几星期才能做到的事情，用PCR 几小时便可完成。PCR 技术是生物医学领域中的一项革命性创举和里程碑。3温故而知新（DNA的结构与复制）一、DNA结

2、构：1、DNA的基本单位：脱氧核苷酸碱基脱氧核糖P42、化学结构：PPPPPPPP3端3端5端5端5DNA结构6二、DNA复制：1、复制方式：72、DNA复制所需条件：模板：_原料：_酶：_能量：_引物：_适宜的温度与酸碱度DNA的两条链四种脱氧核苷酸解旋酶、DNA聚合酶DNA或RNA片段ATP9理论基础1、PCR原理体外模拟DNA复制的过程，对DNA进行扩增的技术。其所需条件（即标准的pcr反应体系）： 10扩增缓冲液 10ul4种dNTP混合物 各200umol/l2种引物 各10100pmol模板DNA 0.12ugTaq DNA聚合酶 2.5umg2+ 1.5mmol/l加蒸馏水至 1

3、00ul9理论基础1、PCR原理体外模拟DNA复制的过程，对DNA进行扩增的技术。DNA的热变性原理10 参加pcr反应的物质主要有五种，即DNA模板、4种脱氧核苷酸（dNTP）、2种引物、TaqDNA聚合酶。1、PCR原理其中引物是pcr特异性反应的关键，pcr 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用pcr就可将模板DNA在体外大量扩增。引物长度：通常为2030个核苷酸。8 DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从引物的3端延伸DNA链。DNA的合成方向总是从子链的5端向3端延伸。引物与模板结合引物与模

4、板结合112、PCR一般过程（变性复性延伸）550C高温低温适温 PCR过程53 第一轮引物253引物13 535引物2互补链53引物1互补链 第二轮变性新引物新延伸35353553第三轮 以第二轮产物为模板，重复第二轮过程。DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。3512实验设计（1） （准备）按配方将所需试剂摆放在实验桌上（2）（移液）用微量移液器按配方往微量离心管中依次加入各组分（3）（混合）盖严离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁（4）（离心）将微量离心管放在离心机上（5） （反应）将微量离心管放入PCR仪中，设置好PCR仪的循环程序14P

5、CR反应（无PCR仪时） 恒温水浴锅13 微量移液器 微量离心管13离心机13PCR仪13PCR仪13实验结果与分析DNA含量 50 （260nm的读数）稀释倍数15PCR技术应用十分广泛，可用于分子生物学、遗传工程、肿瘤学、法医学、预防医学及病毒和病原体的诊断等各个领域。 临床应用举例： 1.遗传病诊断：型、型地中海贫血症，血友病以及苯丙酮尿症的产前胎儿诊断等。 2.病毒感染疾病诊断：肝炎病毒系列(HAV、HBV、HCV、HDV、HEV等)，艾滋病毒(HIV-I)、人乳头瘤病毒(HPV)、人巨细胞病毒(HCMV)、风疹病毒(RV)、单纯疱疹病毒(HSV)、EB病毒(EBV)等。 3.传染性病原体检测：沙眼衣原体、肺炎支原体、立克次