临床本科-第九章-常用病原体检测

1、第九章常用病原体检测第一节 标本采集运送原则：无菌操作、防止污染。不接触消毒剂和抗菌药、立即送检。 1、血液标本在病人发热初期、高峰期间采集，且在应用抗菌药前。怀疑败血症、毒血症、脓毒血症，在发热期间24小时内多部位多量采血双部位采血培养两瓶阴性两瓶均阳性单瓶阳性阴性报告细菌鉴定/药敏实验阳性报告重新双部位采血培养两瓶阴性单瓶阳性两瓶均阳性两次培养为不同细菌污染两次培养为相同细菌细菌鉴定/药敏实验重新双部位采血培养阳性报告2、尿液标本 杂菌多，要求晨起中段尿或导尿管无菌操作。 3、呼吸道标本 痰液和鼻咽拭子均要求晨起清水漱口后采集4、粪便标本 取粘液脓血部位送检，怀疑2号病用碱性蛋白胨保养送检

2、。5、脑脊液应及时送检或床边接种，同时做血培养。体腔积液，采量多，做血培养。6、泌尿生殖系标本 在无菌操作下采样7、创伤、组织、脓肿标本 注意防止皮肤表面污染菌混入，脓肿可穿刺采样。二、常用检查方法1、直接显微镜检查 标本直接或离心浓缩沉淀后涂片染色用显微镜观察形态 2、抗原抗体检测 见免疫学检查3、核酸检查（PCR、基因芯片）4、细菌分离培养 依据可疑细菌培养特性，在一定的温度、湿度、PH、需氧或厌氧等环境下用合适的培养基进行 培养或分离培养，根据菌落形态、生化反应、染色作出鉴定，有时进一步做药物敏感试验第二节 病原体耐药性检测耐药机制（略）药敏试验 药敏试验是测定抗生素在体外抑制细菌生长能

3、力的试验，目的是选择最佳抗生素便于治疗 将含有定量药物的几张纸片贴在接种测试菌的琼脂平板上孵育，根据抑菌圈大小判定是否敏感或耐药。1、KB纸片琼脂扩散法 注意事项 ：药敏结果为临床提供参考意见， “敏感”或“中度敏感” 、“耐药” 选择？药敏试验须先进行细菌培养、分离纯化，时间长。医生可先试用一些药，二、耐药菌监测试验 耐甲氧西林金葡菌MRSA、耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌MRSCoN是目前院内感染的重要病原菌。早期进行细菌培养。PCR检测耐药基因 第四节 病毒性肝炎血清学标志检测 病毒性肝炎有7型：HAV HBV HCV HDV HEV HGV TTV甲、丙、丁、戊四型肝炎均会产生特异抗体，

4、IgM型抗体阳性示急性感染或病毒在复制；IgG型抗体阳性示继往感染，传染性降低。抗HAVIgG属保护性抗体，可终生阳性。抗HCV：输血后肝炎抗HDV检测须依赖乙肝病毒存在戊肝抗体检查乙肝血清学标志 HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb HBcAb即“二对半” HBsAg（+）示急慢性乙肝或携带者，具有传染性（但仅为病毒衣壳引起则无传染性）。HBsAb（+）示继往感染，现已恢复。HBsAb属保护性抗体 有中和作用。HBeAg（+）示病毒在复制，有强传染性。且可胎传。HBeAb（+）示病毒复制减少，传染性降低。一般认为HBeAb无保护性。HBcAb（+）示病毒感染且复制，具有传染性（特别

5、是IgM阳性）。HBcAb无保护性。 “大三阳”即HBsAg（+）HBeAg（+）HBcAb（+），“小三阳”即HBsAg（+）HBeAb（+）HBcAb（+）。乙肝标志在不同病程中呈现不同的变化。抗原阴转、表面抗体阳性示为好现象。 HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-Hbe 抗-HBc 临床意义 过去和现在均未感染HBV + 曾感染HBV，急性感染恢复期 + + 同上 + HBV感染已康复 + + + 既往感染，急性HBV感染恢复期 + 同上 + + 急性HBV感染，慢性携带者 + + + 急性HBV感染，趋向恢复 + + + 急性或慢性乙肝，传染性强 + 急性HBV感染早期 + 急性H

6、BV感染早期 + + 同上 + + + 急性感染中期 + + + + 急性感染趋向恢复 + + 同上 + 同上 + + HBV感染已恢复第五节 STD病原体检测 P437/458病原体：衣原体、支原体、梅毒螺旋体、 淋球菌、HIV、HPV、真菌、原虫WHO列入20余种（含病毒性肝炎）我国列入的STD有8种：梅毒、淋病、艾滋病、生殖器疱疹、非淋菌性尿道炎、尖锐湿疣、软下疳、性病性肉芽肿、1、艾滋病 AIDS定义：病死率高目前无特效药，无预防疫苗 25HIV检测：病毒标志检测：分离病毒组分免疫标志检测：抗HIV-1.2、P24非特异性检测：CD4、T细胞亚群2627初筛（ELISA、IFA、RIA

7、） 确证：免疫印迹试验,至少同时测两种抗体(P24、gp120)阳性,方可判断HIV感染HIV抗体确认实验结果 强阳 弱阳 阴性gp160gp120 p66 p55 p51 gp41p39 p31P24p17 血清对照HIV-2特异带典型的HIV-2血清阳性反应 初筛检测阳性标本两种初筛试剂阴性报告阴性报告阴性反应一阴一阳阳性反应免疫印迹法WB-1/2混合型复核报告HIV-2血清学阳性反应,必要时测核酸阴性反应可疑反应HIV-2 阳性反应免疫印迹法WB-2阴性报告出现gp36阴性反应可疑反应HIV-1 阳性报告HIV-1 阳性反应每三个月随访一次，共两次，仍属可疑，判为阴性HIV抗体确认实验流程图2、梅毒 病原体为螺旋体，传播途径也是性接触、血液、母婴。血清学检查 有RPR、USR、TRUST、TPPA等。阳性为梅毒感染，须用TPPA或暗视野螺旋体检查进行确定 3、淋病 病原体为G-双球菌，传播途径为性接触和胎传。直接涂片或厌氧分离培养找到G- 双球菌可确诊为淋病PCR快速特异 第十章 其它检测包括基因诊断、流式细胞术、染色体检查基因诊断定义 以DNA、RNA为原料，检查目标基因的存在、缺陷或表达异常，对人体状态和疾病作出诊断 常用技术有： 核酸分子杂交、PCR、限制性片段长度多肽性分析、DNA测序等 应用范