分子生物学技术在中医药研究中的应用

1、分子生物学技术在中研究中的应用教学大纲Teaching Outline of Application of Molecular biologicaltechniqueCM study第一部分 大纲说明课程代码：S0102开间：第二学期总学时数：48开课部门：基础医学院授课对象：生考核方式：实验占 80；实验态度与动手能力占 20。预修课程：生化，分子遗传学主讲教师：，管冬元本课程的学时分配表及教学参考资料：. 分子生物学技术在中参考资料：研究中的应用.科技.2008 年 9 月.第二版（1）主编分子生物学技术在中研究中的应用，科学技术，2002年 6 月，第 1 版（2）等译分子克隆实验指南，

2、科学技术，2002 年 8 月，第 3 版。（3）颜子颖等译精编分子生物学实验指南，科学技术，1998 年 6 月，第 1 版，1998 年 6 月，第 1 版（4）等著实用分子生物学方法手册，科学技术第二部分教学内容和教学要求当前，分子生物学技术已经成为医学各个学科的，发挥着愈来愈重要的作用。及时开设这一课程，使学员了解并初步掌握分子生物学的最常用、最基本的技术与方法，将有助于学员对医学新进展、新方法、新理论的理解，有助于学员对当前生命学科研究最前沿技术的认识，从而使中医院校培养的学员医、教、研能力得到进一步的加强。本课程集中在实验技能方面给予培训，属于基本技能培训范畴。主要内容包括：质粒，

3、重组质粒，质粒转化大肠杆菌，鉴定，阳性克隆扩增，少量质粒。酶切质粒，电泳鉴定，从凝胶中回收DNA。真核细胞 RNA 提取。RTPCR。以及部分示教和理论课介绍组DNA 提取、Southernblot、PCR、点突变 PCR、DNA 双脱氧链终止法；组织总 RNA 提取、mRNA 的分离、Northern blot、RTPCR、原位杂交、cDNA Array 和 Micro Array、DDPCR、cDNA 库建立、全序列cDNA 库筛选、RACE PCR；Western bloISA、免疫组织化学、单克隆抗体、功能检测、Footpr、凝胶阻滞分析等。技术、双向等电聚焦凝胶电泳；序号教学内容课堂

4、讲课学时实验课时课堂讨论学时总学时总论、重组质粒质粒转化大肠杆菌阳性单菌落扩增，小量 DNA16074酶切 DNA，DNA 电泳、凝胶中回收DNA25075组织总 RNA 提取、RTPCR16076Northern Blot2577cDNA Array、RNAi 等新技术的介绍4026合计1630248一、绪论1主要内容（1）中实验研究为什么要采用分子生物学技术（2）分子生物学技术在中研究中的实例（3）中研究经常使用的分子生物学技术（4）本课程的教学安排（5）的参考书籍实验桌安排的介绍移液器的使用介绍2教学要求要求了解分子生物学常用技术的沿革、任务和在中个问题：学中的地位和作用。要解决 3分子

5、生物学技术能不能用来研究中医，即 能否用？如何用分子生物学技术来研究中医，即如何用？分子生物学技术用来研究中医的目的，即为何用？二、重组质粒主要内容分子生物学的常用载体质粒及其特征。重组质粒方法及操作。教学要求掌握分子生物学技术中基本的实验操作方法，包括试剂的取样与加样、保存方法等。了解分子生物学的常用载体质粒及其特征。掌握重组质粒方法。三、质粒转化大肠杆菌主要内容质粒转化大肠杆菌、涂皿鉴定、阳性克隆扩增方法及操作。教学要求了解质粒转化大肠杆菌、阳性克隆扩增方法与原理。掌握常用质粒转化的方法及注意事项。四、小量质粒主要内容小量质粒的方法及实验操作。教学要求了解小量质粒掌握小量质粒方法与原理。方

6、法及注意事项。五、酶切 DNA，DNA 电泳，凝胶中回收 DNA1主要内容限制性内切酶及其生物学特性。限制性内切酶切割质粒。灌制凝胶。电泳鉴定酶切结果。从凝胶中回收DNA。2 教学要求了解限制性内切酶及其生物学特性。掌握选用内切酶切割质粒、电泳鉴定酶切结果、从凝胶中回收 DNA 的实验操作方法。六、组织总 RNA 提取主要内容真核细胞 RNA 的特性。一步法提取总 RNA 的技术。教学要求了解真核细胞 RNA 的特性。掌握应用 TRIZOL 试剂盒从肝组织中提取总 RNA 的实验技术。掌握 RNA 提取实验中的注意事项。七、RTPCR1主要内容PCR 原理。PCR 引物设计方法。RTPCR 实

7、验操作。2教学要求了解 PCR、RTPCR 原理和技术。掌握 RTPCR 的操作。（3）掌握核酸序列的查询与引物设计方法。八、Northern Blot 部分操作和示教1主要内容Northern Blot 方法的原理。灌制 RNA 电泳用凝胶。RNA 电泳。（4）RNA 转移至硝酸膜及膜处理。（5）介绍随机引物法标记DNA 探针，Northern Blot 的预杂交和杂交，介绍放射自显影。（6）和讲解 Northern Blot 实验全过程。（7）同位素安全技术介绍。2教学要求（1）了解Northern Blot 方法的原理。（2）通过转移 RNA 至硝酸教学，掌握随机引物法标记 DNA 探针

8、，RNA 电泳，真空印迹法膜及膜处理，以及 Northern Blot 的方法。（3）了解同位素安全技术。九、理论课总结和介绍1主要内容（1）中对组作用的研究技术和应用。主要介绍：组 DNA 提取、Southernblot、PCR、点突变 PCR、DNA 双脱氧链终止法。（2）中对 mRNA 转录作用的研究技术和应用。主要介绍：组织总 RNA 提取、mRNA 的分离、Northern blot、RTPCR、原位杂交、cDNA Array 和 Micro Array、DDPCR、cDNA 库建立、（3）中全序列cDNA 库筛选、RACE PCR。对表达产物蛋白作用的研究技术和应用。主要介绍：Western blot、ELISA、免疫组织化学、单克隆抗体技术、双向等电聚焦凝胶电泳。（4）中对转录调控的研究技术和应用。主要介绍：、功能检测、Footpr、