医学微生物学：第17章 支原体

1、第17章 支原体支原体(Mycoplasma)是一类缺乏细胞壁、形态上呈高度多形性，可以通过一般的除菌滤器，是目前所知能独立生活，自行繁殖的最小原核细胞型微生物。由于它们能形成有分支的长丝，故称之为支原体。概 念支原体（一）呼吸系统感染（二）泌尿生殖道感染（三）新生儿感染（四）全身性感染M.pneumoniae U.urealyticum支原体在自然界中广泛分布，因其缺乏细胞壁归属于柔膜体纲的支原体目支原体科。支原体科又分四个属：支原体属、血虫体属、血巴尔通氏体属和脲原体属。对人致病的主要为肺炎支原体、人型支原体、生殖器支原体、穿通支原体和溶脲脲原体。第一节 分 类第二节 肺炎支原体一、临床意

2、义肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae, MP)，是引起呼吸道感染的一种病原体，所引起的人类支原体肺炎病理变化以间质性肺炎为主，又称之为原发性非典型性肺炎。过去认为肺炎支原体是温和的病原体，现也可引起严重的双侧肺炎和其他系统的肺外并发症。第二节 肺炎支原体一、临床意义肺炎支原体感染呈全球性分布，以温带为主。散在发病，35年出现一次地区性流行。主要经飞沫传染。流行特点为间歇性，长时期缓慢播散，可持续数月至一年。患者以儿童和青年人居多，冬秋季较多见。婴儿有间质性肺炎时须考虑支原体感染的可能性。二、微生物学检验（一）基本特性1.形态与结构短细丝状，长约25m，在近细胞丝状体尖端有一

3、球状的特殊结构；典型的肺炎支原体形态类似酒瓶状，无细胞壁，仅有细胞膜，电镜下其细胞膜由三层结构所组成。革兰染色阴性，Giemsa染色淡紫色。2.抗原结构糖脂抗原：抗原性强，特异性差；蛋白质抗原：P1膜蛋白是支原体的主要型特异性抗原。3.培养特性营养要求高，培养基中必须添加10%20%的人或动物血清，初次分离培养支原体，尚须添加10%的酵母浸膏，并置于5%CO2 的条件下生长较好。生长最适pH为7.88.0，pH7.0以下可致其死亡，最适温度为3637。液体培养基中时有极浅淡的混浊；固体培养基上形成直径10100m的菌落。初次分离时菌落呈细小的草莓状，反复传代后呈典型的“油煎蛋”样菌落；半固体培

4、养基中呈现肉眼可见的细小粒状菌落。（一）基本特性（一）基本特性 肺炎支原体“油煎蛋”菌落 (10)支原体的荷包蛋状菌落4.生化反应（一）基本特性支原体葡萄糖精氨酸尿素吸附细胞致病性肺炎支原体+-红细胞肺炎、支气管炎泌尿生殖道感染泌尿生殖道感染人型支原体-+-生殖器支原体+-穿通支原体+-红细胞、CD4+T细胞、巨噬细胞条件感染、多见于艾滋病溶脲脲原体-+-泌尿生殖道感染人类主要支原体生物学性状5.抵抗力 对热的抵抗力与细菌相似。耐冷，-70或液氮可长期冻存。如在4放置不要超过3d，56很快灭活。对干燥敏感。对青霉素、头孢菌素等作用于细胞壁的抗菌药物不敏感。对作用于其核蛋白体，抑制或影响菌体蛋白

5、合成的抗菌药物敏感，如红霉素、强力霉素、螺旋霉素等。（一）基本特性（二）肺炎支原体的检验程序1.标本采集 患者痰、咽拭子、鼻咽洗液、支气管分泌物、血清标本等2.标本直接检查：1）标本涂片 2）核酸检测 PCR法：快速、敏感和特异3.分离与鉴定分离培养：培养基是以牛心消化液为基础另加20%小牛血清及新鲜酵母浸液制成的液体或固体培养基。加入适当浓度醋酸铊、青霉素。 初次分离生长缓慢，先将标本接种于加有葡萄糖以及酚红、美蓝指示剂的液体培养基中增菌，1周后培养基由紫变绿，液体清晰，此时，可转种于固体培养基上。鉴定：典型“油煎蛋”样菌落，能发酵葡萄糖产酸，不能利用精氨酸与尿素，可还原美蓝，能使无色的氯化

6、三笨基四氮唑（TTC）还原为粉红色的甲臢。4.抗体检测方法有酶联免疫吸附测定、冷凝集试验、补体结合试验、间接血凝试验等。（二）肺炎支原体的检验程序阳性阴性（二）肺炎支原体的检验程序 肺炎支原体固体培养 第三节 溶脲脲原体 溶脲脲原体 (Ureaplasma urealyticum, Uu)也称解脲脲原体，是1954年Shepard首先从非淋球菌尿道炎(NGU)患者的尿道分泌物中分离获得，因其菌落细小，故曾称为T支原体。按其分解尿素的特性命名为溶脲脲原体。在分类学上属人支原体科脲原体属。第三节 溶脲脲原体一、临床意义 Uu寄居于人泌尿生殖道，主要传播途径为性接触传播和母婴传播。Uu所引起的疾病最

7、常见的是非淋菌性尿道炎(NGU)，Uu多寄生在男性尿道、阴茎包皮和女性阴道。若上行感染，可引起男性前列腺炎或附睾炎；女性阴道炎、宫颈炎，并可导致流产。也能引起早产儿及低体重新生儿呼吸道和中枢神经系统感染。二、微生物检验（一）基本特性1.形态结构以球形为主，直径约50300nm，单个或呈双排列，能通过0.45m微孔滤膜。革兰染色阴性，姬姆萨染色呈紫蓝色。无细胞壁，细胞膜由三层薄膜构成。基因组大小为(4.14.8)108，DNA中G+C含量为26.929.8mol%。二、微生物检验2.培养特性营养要求较高，需要供给胆固醇和酵母，常用的基础培养基为牛心消化液或商品PPLO肉汤。生长除胆固醇外，尚需尿

8、素，Uu中的脲酶能水解尿素产氨，不分解葡萄糖和精氨酸。37生长良好，22生长差，42不生长，最适pH为5.56.5。在固体培养基上，置于含95%N2和5% CO2气体环境下培养2d形成1550m，颗粒状，呈“油煎蛋”样小菌落，放大200倍才能观察到。（一）基本特性3.抗原构造脂多糖抗原蛋白质抗原脲酶抗原：是Uu种特异性抗原Uu有16个血清型，其中以第4型引起疾病的频率最高。（一）基本特性4.抵抗力 对渗透作用敏感，易被脂类溶媒、清洁剂、酒精、特异性抗体和补体溶解。对热抵抗力差。对青霉素等作用于细胞壁的抗菌药物不敏感，对影响胞浆蛋白合成的抗菌药物敏感。（二）溶脲脲原体的检验程序1.标本采集 患者

9、中段尿，精液，阴道与宫颈分泌物，羊水和血液等。2.标本直接检查 1）核酸检测:临床快速诊断的重要手段;2）ELISA:可以测定血清型别，较敏感、特异性强，有早期诊断意义3）免疫斑点试验(IDT):较特异。3.分离与鉴定 接种于pH6.00.5含有酚红和尿素的液体培养基中，37孵育，颜色由黄变红者判为阳性。转种于新的固体培养基上，Uu菌落呈黑褐色。此外，可作姬姆萨、革兰染色和细胞壁染色，观察菌体形态。 Uu分解尿素，不分解葡萄糖和精氨酸。进一步鉴定则需要特异抗血清作MIT和GIT。4抗体检测 意义不大。致病机制 （1）定植：肺炎、生殖器、穿透支原体以其顶端结构与宿主细胞上的受体结合； （2）损伤

10、细胞： A：从宿主细胞膜获得脂质和固醇； B：产生有毒代谢产物； C：其他：溶脲脲原体可粘附精子且与精子有共同抗原而致免疫损伤，导致不孕；穿透支原体则可侵犯CD4阳性T细胞而致免疫损伤。免疫斑点试验 冷凝集试验 : M. pneumoniae ELISA: Ab分离与鉴定 1分离培养 2鉴定 抗体检测 1ELISA 2补体结合(CF)试验 3间接血凝试验 4冷凝集试验 商品化的支原体鉴定培养基 解脲脲原体液体培养阳性 解脲脲原体固体培养阳性培养结果阳性阴性 第四节 其他支原体一、人型支原体人型支原体（M. hominis,Mh）主要寄居于生殖道，21% 53%的性成熟女性子宫颈或阴道内可分离出

11、Mh，男性尿道携带率低。通过性接触传播，可引起盆腔炎、输卵管炎、产后热、阴道炎与宫颈炎、肾盂肾炎等。此外，Mh也能引起新生儿感染，如脑膜炎、脑脓肿、硬脑膜下脓肿。形态结构与溶脲脲原体相似，Mh能分解精氨酸，不分解尿素和葡萄糖。培养最适pH为7.27.4，液体培养基中因分解精氨酸产氨，pH增至7.8以上易死亡。在固体培养基上呈典型的“油煎蛋”样。微生物学检验与溶脲脲原体相似。第四节 其他支原体二、穿通支原体 1990年Lo从AIDS患者尿中分离到新的支原体，命名为穿通支原体(M. Penetrans, Mpe)，也称穿透支原体。研究认为Mpe、发酵支原体、梨支原体三种新支原体是加速AIDS进程的

12、一个协同因子。（一） 临床意义 Mpe的尖形结构具有粘附和穿入作用，导致宿主细胞受损和死亡。研究表明Mpe对HIV感染者T细胞的作用，可能促进HIV的复制和病程的发展。因而提出Mpe感染是艾滋病的辅助致病因素。它对诱导TNF-的表达可能也是造成细胞损伤的主要因素。 （二）微生物学检验 Mpe杆状或长烧瓶状。培养营养要求高，培养基中需加血清，在改良的SP-4培养基生长，菌落呈“油煎蛋”样，生长较慢，发酵葡萄糖，水解精氨酸，但不分解尿素。 1. 标本采集 取AIDS患者或HIV感染者咽部黏液，血清、尿液等 2.分离培养与鉴定分离培养：SP-4培养基，置37温箱培养。鉴定生化反应：发酵葡萄糖试验，水解精氨酸试验代谢抑制试验(MIT) PCR：套式PCR(nPCR) 3. 抗体检测 小 结支原体是一群缺乏细胞壁，介于细菌与病毒之间，能在人工培养基中生长繁殖的最小的原核细胞型微生物，形态上呈高度多形性，可通过滤菌器。肺炎支原体是引起呼吸道感染的一种病原体，其P1蛋白在致病中起了重要的作用。所引起的人类支原体肺炎病理变化以间质性肺炎为主