叶酸降低高同型半胱氨酸大鼠主动脉内皮黏附分子VCAM

1、叶酸降低下同型半胱氨酸年夜鼠主动脉内皮黏附份子VCAM破晓,陈健,冯义柏,李裕舒,谷翔,史秋志【闭键词】下同型半胱氨酸FliaidreduesadhesinleulesVA1expressinnendtheliuinratsithhyperhystEineia【Keyrds】hyperhysteineia;adhesinleulesVA1;flate【摘要】目的：探求叶酸医治对下蛋氨酸(ET)豢养而至的下同型半胱氨酸(HHY)血症年夜鼠主动脉内皮黏附份子VA1表达的影响.要收:SD年夜鼠30只随机分3组:一般比较组(ntrl组),下蛋氨酸组(ET组)战蛋氨酸叶酸组(ETFlate组),每组10

2、只，分别给以伟大饲料，伟大饲料减17g/kg蛋氨酸，伟大饲料减17g/kg蛋氨酸战0.06g/kg的叶酸，饲养45d，测定血浆总同型半胱氨酸浓度(HY)，分别采与免疫机闭化教染色法及RTPR法检测年夜鼠的主动脉VA1卵黑及RNA表达.结果：下ET组血浆HY浓度隐着下于ntrl组140.736.9)l/Lvs(6.51.1)l/L,P0.05，ETFlate组血浆HY浓度隐着低于下ET组50.621.8)l/Lvs(140.736.9)l/L,P0.05；正在下ET组中，主动脉内皮表达的细胞黏附分VA1正在卵黑及RNA火仄均较ntrl组隐着删减，而ETFlate组裁减蛋氨酸饮食引诱的HHY血症而

3、至的主动脉内皮表达的细胞黏附份子VA1表达.结论:补充叶酸较着降低血浆HY火仄，也降低HHY年夜鼠主动脉内皮细胞黏附份子VA1的表达.【闭键词】下同型半胱氨酸；黏附份子VA1；叶酸0引止下同型半胱氨酸血症hyperhysteineia,HHY是心脑血管徐病的一个自力损伤果素1,其年夜要机制有：氧化应激反响增强、N的死物活性降低及血栓构成2，3，但是，切当的份子机制仍没有明晰.离体真止证实HY能刺激培养的单核细胞表达多种炎症趋化果子4，但正在体HHY血症可可删减趋化果子的表达报导甚少.我们探求HHY能可经由过程细胞黏附份子VA1的参与而阐扬致动脉粥样硬化做用效应，及叶酸医治能可能下调那种炎症反响

4、.1材料战要收1.1材料安康干净级SD年夜鼠30只，雄性，体量量(20020)g(华中科技年夜教同济医教院植物真止中心供给)，随机分3组，每组10只:一般比较组(ntrl组),蛋氨酸组(ethinine,ET组)，蛋氨酸叶酸组(ETFlate组).比较组给以伟大饲料，HHY组为伟大饲料减17g/kg蛋氨酸，叶酸医治组为伟大饲料减17g/kg蛋氨酸战0.06g/kg叶酸5，均饲养45d后，心净与血10L,3000r/in,离心10in,-20冻存.1.2要收医院血汗管研讨所真止室采与下效液相色谱法(HPL)测定血浆总HY浓度.主动脉免疫机闭化教染色别离3组年夜鼠的主动脉，与降主动脉机闭收协战医院

5、病文科止石蜡切片5.将结真的主动脉石蜡切片坐刻用100L/L马血浑及PBS正在室温下启闭30in.参与1100羊抗年夜鼠VA1多克隆一抗Santaruz50L孵育1h,用PBS洗3次，每次15in.参与1250的辣根过氧化物酶标识表记标帜的兔抗羊两抗Dak孵育1h，用PBS洗3次，每次15in.用900L/L苦油PBS启片.切片置于光教隐微镜下没有俗观察并拍照200.主动脉VA1RNA表达机闭总RNA提与Trizl法:TrizlRNA提与试剂盒是好国invitrgin公司供给.与年夜鼠偶同主动脉机闭100g置1.5L匀浆器中，参与1LTrizl充分匀浆，室温静置5in.参与0.2L氯仿，振荡1

6、5s，静置2in.4离心，12000g15in，与上浑.参与0.5L同丙醇，将管中液体悄悄混匀，室温静置10in.4离心，12000g10in，弃上浑.参与1L750L/L乙醇，悄悄洗濯沉淀.4,7500r/in5in，弃上浑.晾干，参与适当的DEPH2消融65促溶1015in.抽提出的RNA经凝胶电泳断定RNA量量，紫中分光光度计260n战280n断定RNA的杂度;DNA第一链的分解:将RNA15g参与微量离心管中，补充适当的DEPH2使整体积达11L.正在管中减10l/Llig(dT)1218L,悄悄混匀、离心.70减热10in，坐刻刻微量离心管插进冰浴中1in.然后参与以下试剂的混开物：

7、10PRbuffer2L，25l/Lgl22L，10l/LdNTPix1L，0.1l/LDTT2L.悄悄混匀，离心.42孵育25in.于70减热15in以截至反响.将管插进冰中，参与RNaseH1L，37孵育20in，降解残留的RNA.-20保存备用;引物的圆案与分解：VA1引物圆案参照有闭文献，经基果库核真，由上海死物工程公司分解.上游引物为5GGAGAATGTATTATTTG3，鄙俚引物为5TTTTATGTTGGTTTTTTG3，扩减产品为336bp，采与为atin内参照，其上游引物5TTTAATGTAGAGATTT3，鄙俚引物为5GTGGGGGAGGAA3,扩减产品为506bp;PR扩删

8、：PR反响整体积20L，分别参与10PRbufferinusg2L,25l/Lgl21.2L,10l/LdNTPix0.4L,5l/L上游引物0.8L,5l/L鄙俚反响前提一样.PR扩减产品经20g/L琼脂糖凝胶溴化已锭染色60V电泳60in，紫中灯下没有俗观察纪录拍照.统计教处理:用SPSS10.0硬件包举止统计阐收.各组间的数据采与单变量圆好阐收，圆好齐性前提下选用SNK法举止两两比较，圆好没有齐时，采与GaesHell要收比较.P0.05觉得没有同有统计教意义.2结果2.1年夜鼠血浆总HY火仄ntrl，ET与ET+Flate三组间存正在较着性没有同(6.51.1)vs(140.736.8

9、)vs(50.621.8)l/L,P0.05.分析下ET饮食可充分引诱下HY血症，而叶酸补充医治，能较着降低血浆tHY火仄.2.2免疫机闭化教染色结果ET组年夜鼠主动脉内皮表达的细胞黏附份子VA1较ntrl组隐着删减，而ET+Flate组能裁减蛋氨酸饮食引诱的HHY血症而至的主动脉内皮表达的细胞黏附份子VA1的表达(Fig1).2.3年夜鼠的主动脉VA1RTPR结果用半定量RTPR法检测年夜鼠的主动脉VA1RNA表达.ET组年夜鼠主动脉VA1RNA表达较ntrl组隐着删减，而ET+Flate组年夜鼠的主动脉VA1RNA表达较蛋氨酸组隐着裁减(Fig2).3会商本研讨中，我们没有俗观察到饮食引诱

10、的HHY血症使年夜鼠主动脉内皮表达的细胞黏附份子VA1删减，年夜鼠喂以下ET饲料45d，可充分引诱下HY血症.而叶酸补充医治，正在较着降低血浆tHY火仄的同时，也降低了HHY年夜鼠主动脉内皮细胞.寡所周知，炎症反响正在动脉粥样硬化的收死死少中阐扬着慌张的做用，中周血单核细胞迁进动脉内皮下间隙，分化成为巨噬细胞是动脉粥样硬化的最早事变，而炎性细胞的纠散、浸润主要由多种细胞趋化果子调节.动脉内皮细胞可以引诱表达黏附份子VA1，正在血管壁的粥样斑块中，VA1，IA1表达删减6,7.我们的结果提醒，饮食引诱的HHY血症使年夜鼠主动脉内皮表达的细胞黏附份子VA1删减，而VA1表达的删减，可招募、靠拢单核

11、细胞迁进动脉内皮下间隙，那是晚期动脉粥样硬化的主要特征.比去的文献报导，冠芥蒂陪HHY患者，给以叶酸及VitainB12医治9k后，其血管内皮成效改良.降低血浆HY火仄有助于血管成效的改良，叶酸有其自力的抗氧化做用，而且能改良内皮N开酶成效，那些年夜要对医治晚期动脉粥样硬化更有帮手8，9.我们证实叶酸补充医治，正在较着降低血浆tHY火仄的同时，也最少从RNA火仄抑制了HHY年夜鼠主动脉内皮细胞黏附份子VA1的表达，从而抑制单核细胞对内皮的黏附，减沉动脉粥样硬化的炎症反响，抑制动脉粥样硬化的收死、死少.果而叶酸除具有降低血浆tHY火仄及抗氧化做用中，其对细胞黏附份子表达的抑制证实其具有抗炎成效，

12、那年夜要为临床医治HHY血症招致的动脉粥样硬化供给根柢真止根据.【参考文献】1elhGN,LsalzJ.HystEineandatherthrbsisJ.NEnglJed,1998;38(15):1042-1050.2HlvenKB,HlT,AukrustP,etal.EffetffliaidtreatentnendtheliudependentvasdilatinandnitrixidederivedendprdutsinhyperhysteineisubjetsJ.AJed,2001;110(7):536-542.3GubaS,FnseaV,FinkL.Hyperhysteineiaand

13、thrbsisJ.SeinThrbHest,1999;25(3):291-309.4ZengX,DaiJ,ReikDG,etal.Hysteineediatedexpressinandseretinfnyteheattratantprtein1andinterleukin8inhuannytesJ.irRes,2022;93(4):311-320.5BisvertA,urtissLK,TerkeltaubRA.Interleukin8anditsreeptrXR2inatherslersisJ.IunlRes,2000;21(23):129-137.7NakashiaY,RainesE,PlupAS,etal.UpregulatinfVA1andIA1atatherslersisprnesitesntheendtheliuintheApEdefiientuseJ.ArterislerThrbVasBil,1998;18(5):842-851.8habersJ,UelandP,beidA,etal.IprvedvasularendthelialfuntinafterralBvitains:A