麝香保心丸对自发性高血压大鼠心脏保护作用的研究

1、麝香保心丸对自发性高血压大鼠心脏保护作用的研究 胡送友，田登科，陈刚领，刘俊，可燕，卞卡【摘要】目的讨论麝香保心丸HP对自发性高血压大鼠SHR心脏保护作用及其可能的机制。方法将6周龄SHR分为HP治疗组、高血压模型组,将KY大鼠作为正常血压组，每组分3批在3个时间点给药6周、给药14周、停药9周处死大鼠，尾套法测定血压；FRAP法进展心脏组织总抗氧化才能测定；采用RT-PR考察炎症相关因子IA-1、VA-1、IL-1和TNFRNA表达；esternBlt与ELISA法分别考察炎症相关因子IA-1、VA-1及IL-1、TNF蛋白表达。结果HP对SHR无明显降压作用，但能进步SHR心脏组织总抗氧化

2、才能。PR、esternBlt与ELISA显示给予HP6周和14周后，均能显著抑制SHR心脏炎性相关因子IA-1、VA-1RNA表达及IA-1蛋白表达；给药14周后，能显著抑制炎性相关因子IL-1、TNFRNA表达及蛋白表达；停药9周后，仍能抑制炎性相关因子IA-1、TNFRNA表达及IA-1蛋白表达。结论HP具有独立降压以外的对SHR心脏保护作用，其机制可能与抑制心脏组织炎症反响及降低组织氧化应激有关。【关键词】麝香保心丸自发性高血压大鼠炎症心脏原发性高血压Keyrds：Heart-prtetinguskpill;Spntaneuslyhypertensiverats;Inflaatin;H

3、eart;Hypertensin高血压病会引起血流动力学异常变化和血管重塑，导致心、脑、肾等靶器官损害。心肌肥大，心肌间质纤维化及大小冠脉血管构造和功能的改变是高血压靶器官心脏的主要损害，从预后意义来讲，是最严重的并发症。降低并控制血压的同时，逆转或减轻高血压靶器官损害已成为国际上高血压病治疗的主要目的。炎症反响不仅参与了高血压的发生开展，更是与高血压心、脑、肾等多个靶器官损害亲密相关1。我们中心先期研究的结果也说明,自发性高血压大鼠多个靶器官存在着明显的炎病症态存在2。麝香保心丸是最具代表性的治疗冠心病的有效中成药，动物实验和临床研究证明3，4，有抗心肌缺血、保护心肌作用，但其作用机制仍未说

4、明，本实验通过观察麝香保心丸对自发性高血压大鼠SHR心脏炎病症态和氧化应激的影响，讨论麝香保心丸的心肌保护作用及其可能的机制，为其临床应用及二次开发提供新的根据。1器材与方法1.1动物与药物SPF级SHR36只，KY大鼠18只，均为雄性，6周龄，由中科院上海实验动物中心提供，合格证号SXK沪2022-0005。麝香保心丸由上海和黄药业消费(批号G060601)。1.2试剂及仪器TrizlRNA提取试剂均购于Siga公司；RT-PR试剂盒为Bi-Dev-Teh公司产品；引物由上海生物工程技术公司合成；抗体均购于Sataruz公司；IL-1ELISA试剂盒批号：RT110371与TNFELISA试

5、剂盒批号：RT110371均购于美国ADL公司。PR扩增仪，德国Bietra公司；UV-1700紫外分光光度计，日本岛津公司；GIS凝胶图像分析系统，上海天能科技产品；NIBP鼠尾无创血压测量分析系统，上海奥尔科生物科技产品；Spetraax190酶标仪，美国leularDevies公司产品；D-78532高速冷冻离心机，德国Hettih公司产品；超低温冰箱，美国Ther公司产品。1.3动物分组及给药将36只SHR随机分为麝香保心丸HP组和SHR模型SHR组，每组18只，以同周龄的KY大鼠为正常对照KY组，每天上午8：009：00HP组每只大鼠给予麝香保心丸13.5g/kg溶于1l蒸馏水中灌胃

6、；KY组与SHR组给予一样体积的蒸馏水。分别在给药6周、给药14周和停药9周后分3批处理动物。1.4检测指标1.5统计学方法各组结果以s表示,组间差异用单因素方差分析和q检验。P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1HP对SHR血压值的影响由表2可见，模型组SHR收缩压较正常对照KY大鼠明显升高(P0.05)。给药HP6周，14周及停药9周后，SHR的收缩压与模型组大鼠比较无明显差异(P0.05)。表2HP对SHR血压值的影响略2.2HP对SHR心脏IA-1和VA-1表达的影响如图1(a)、1(b)、1()所示，模型组SHR心脏IA-1和VA-1的RNA表达显著高于正常KY组(P0.05)，

7、HP治疗后(给药6周，给药14周)可显著降低SHR心脏IA-1和VA-1的RNA表达程度(P0.05)；停药9周后，仍可显著降低IA-1RNA表达程度(P0.05)，但对VA-1RNA影响无统计学差异。如图2(a)、2(b)、2()所示，与KY大鼠比较，模型组SHR心脏可见IA-1蛋白的高表达(P0.05)。在各处理批次给药6周，给药14周，停药9周HP均可以显著降低IA-1蛋白的表达程度(P0.05),但对VA-1蛋白影响无统计学差异。2.3HP对SHR心脏IL-1和TNF表达的影响如图1(a)、1(d)、1(e)所示，模型组SHR心脏TNF的RNA表达显著高于正常组(P0.05)，HP治疗

8、后(给药6周，给药14周，停药9周)可显著降低SHR心脏TNF的RNA表达程度(P0.05)；但对IL-1而言，仅在HP给药14周后，能显著降低SHR心脏的IL-1RNA表达程度(P0.05)，给药6周后与停药9周后对对SHR心脏IL-1RNA影响均无统计学差异。如表3所示，与KY大鼠比较，模型组SHR心脏可见TNF与IL-1蛋白的高表达(P0.05)。HP给药14周后均可以显著降低IL-1和TNF的蛋白表达程度(P0.05)；给药6周与停药9周对SHR心脏TNF与IL-1蛋白影响均无统计学差异。表3HP对SHR心脏炎性因子TNF及IL-1蛋白表达的影响略2.4HP对SHR心脏总抗氧化才能的影

9、响由表4可见，12，20，29周龄SHR心脏组织总抗氧化程度均明显低于KYP0.05，给予HP6周和14周后，均可以显著进步SHR心脏组织总抗氧化程度P0.05，在停药9周后，心脏组织总抗氧化程度仍明显高于SHR组P0.05。表4HP对SHR心脏总抗氧化才能的影响略转贴于论文联盟.ll.3讨论高血压病对靶器官心脏的主要损害是心肌肥大，心肌间质纤维化以及大小冠脉血管构造和功能的改变。长期的压力负荷会导致心肌细胞肥大、间质胶原增多。心肌胶原基质的聚集和纤维化使心脏的顺应性和舒张功能降低。上述变化的发生是由心脏机械因素或体液因素所激活，并有多种生长因子及血管活性物质所介导，如血管紧张素Ang、醛固酮

10、等。Ang通过其型受体ATR介导胶原生成，使蛋白质合成增加，心肌细胞发生肥大。另一方面，缓激肽、前列腺素、N可以使胶原降解。胶原合成与降解比例失调最终导致心肌肥厚的发生。本实验结果显示SHR7周龄时动脉收缩压明显高于同龄KY，且血压随年龄增加而升高，29周龄时血压已显著高于同龄KY，提示7周龄SHR可能已产生心肌损伤。HP有抗心肌缺血、保护心肌作用，但其作用机制仍未说明。本实验以SHR为高血压心脏损害动物模型，结果发现给予HP6周和14周后，能显著抑制SHR心脏炎性相关因子IA-1、VA-1RNA表达及IA-1蛋白表达；给药14周后，能显著抑制炎性相关因子IL-1、TNFRNA表达及蛋白表达；

11、停药9周后，仍能抑制炎性相关因子IA-1、TNFRNA表达及IA-1蛋白表达。众多证据显示710,炎症反响可能参与了高血压心脏损害。使用免疫抑制剂sA影响NF-B依赖信号通路或者使用NF-B的抑制剂治疗dTGR大鼠，均能减轻炎症细胞浸润和心肌肥厚。IA-1、VA-1可介导白细胞与内皮细胞粘附，白细胞粘附于内皮细胞和组织浸润，导致组织损伤，是炎症反响重要的标记物7。Ykyaa报道8心肌细胞与激活的单核细胞体外培养，心肌细胞蛋白合成增加，在参加抗IA-1单克隆抗体后，心肌细胞蛋白合成受到显著抑制。IL-1可使-肾上腺素受体与腺苷酸环化酶脱耦联，心肌收缩力降低。研究报道9压力负荷刺激巨噬细胞趋化因子

12、表达增加，引起巨噬细胞大量聚集，巨噬细胞产生许多细胞因子，以IL-1分泌尤为显著，其能促进心肌细胞的生长和左室重构。连续给大鼠腹腔注射TNF会使左室功能时间依赖性降低并伴随左室肥厚，机制可能是使心肌细胞外基质金属蛋白水解酶活性增加,导致基质降解,同时刺激成纤维细胞增殖,参与心室重构10。Sun2对SHR高血压靶器官心脏组织炎病症态考察后，发现SHR心脏组织炎症相关因子IA-1,TNF,IL-1，PPAR显著高于KY，提示SHR心脏存在着明显的炎病症态。由此可见炎性相关因子IA-1,VA-1，TNF,IL-1在高血压心脏损害中起着重要作用。本实验研究发现HP对SHR的血压无明显影响，说明HP可能

13、是通过抑制心脏组织炎症反响对SHR心脏起保护作用，且这种作用是独立于降压作用的。已有研究显示11SHR心脏重量与体重之比在高血压前期如34周龄以较KY明显增加，心脏后乳头肌心肌细胞增大。甚至有研究发现，SHR左室重量与体重之比早在刚出生时即较同龄KY明显增加。说明SHR心脏肥大可能并不完全与高血压病有关。炎症损伤多伴随大量RS的产生，如-2、H和H22，导致氧化应激的产生。RS可直接修饰蛋白质、脂质、糖类和DNA，引起组织损伤。RS还可通过激活对氧化复原敏感的核转录因子NF-B，上调粘附分子、细胞因子、趋化因子等促炎因子的表达，如IA-1、IL-1、TNF等，引起血管炎症。过量产生的-2可消耗N生成氧化才能更强的过硝基阴离子N-，使N的生物利用度降低，损伤血管的舒张功能12,13。此外，-2程度的增加，能通过下调可溶性鸟苷酸环化酶sG)表达、抑制sG活性和GP依赖性蛋白激酶GK-1活性而影响平滑肌层的N/GP信号途径从而影响血管功能14。本实验研究发现12，20，29周龄SHR心脏组织总抗氧化程度均明显低于KY，提示S