植物样蔗糖,淀粉,可溶性总糖测定

1、蔗糖，淀粉，可溶性总糖测定0.1g 干样100 目筛8ml 80%乙醇8030 min冷却2022rpm 20min残渣假设测定是植株样品，要将上清液中加少量活性碳，过滤后再定容。8ml 80%乙醇8030 min冷却2022rpm 20min残渣合并上清液50ml8ml 80%乙醇8030 min冷却蔗糖测定可溶性总糖测定2022rpm 20min残渣80烘干0.9ml 提取液1.0ml 提取液+1.0ml 水冷却0.1ml2N NaOH2ml 蒸馏水20min，不断搅动冷却10min配制摇匀2ml 9.2N HClO410min 不断振荡6ml冷却15min 沸水浴1ml0.1%间苯二酚3

2、ml 10N HCl2022rpm 25min残渣2ml 4.6N HClO410min 不断振荡6ml合并上清液50ml8060min冷却过滤淀粉测定方法同可溶性总糖0.9ml蒸馏水+0.1ml2N NaOH+1ml 0.1%间笨二酚+3ml 10N HCl 作参比；2ml蒸馏水+4ml 弃去我们也是在使用同样的方法做同样的样品。1：保证每管中参加的 5ml可以使用大肚管0.2%蒽酮硫酸溶液与 3.0ml可以使用 5ml的刻度管，但是必需标定必需准确！2：保证每管的反响时间是完全的6 分钟3 秒人进展协作。340 秒1 分钟。4：从振荡开头计算，到吸取度测定完毕的时间至，必需把握在 30 分

3、钟以内标准规定是20-40 分钟。5：0.2%蒽酮硫酸溶液必需在试验前就配制好，由于硫酸的密度较大，建议在样品配制好以前 1 小时配制好，参加试管时肯定要摇匀。6：为了保证试验的准确度，建议每个样品平行测定 3-4 管，这样的话可以消退由于自己的操作失误造成的试验结果不准确！以上几点时我在试验中觉察并准时留意的几点阅历，期望对楼主有所帮助！葡萄糖标准曲线的制作：准确称取0.1000g在8烘箱中烘2小时1000m0.1mg/ml20ml 具塞刻度试管中0.1mg/ml 葡萄糖母液ml蒸馏水(ml)葡萄糖(ml/管)0.02.00.00.41.60.040.81.20.081.20.80.121.

4、60.40.162.00.00.20以下操作同可溶性糖的测定蔗糖标准曲线的制作：准确称取0.1000g在8烘箱中烘2小时1000m0.1mg/ml10ml 具塞刻度试管中0.1mg/ml 葡萄糖母液ml0.00.10.30.50.70.9以下操作同可蔗糖的测定蒸馏水(ml)0.90.80.60.40.20.0蔗 糖(ml/管)0.00.010.030.050.070.09计算可溶性糖含量mg/g=从标准曲线上算得葡萄糖的mg 数稀释倍数样品重g蔗糖含量mg/g=淀粉含量mg/g=从标准曲线上算得蔗糖的mg 数稀释倍数样品重g从标准曲线上算得葡萄糖的mg 数稀释倍数0.9样品重g试验24 植物组

5、织中可溶性糖与淀粉的测定植物体内的碳素养分状况以及农产品的品质性状指标，本试验学习几种定量测定可溶性糖和淀粉的方法。一、苯酚法测定可溶性糖【原理】植物体内的可溶性糖主要指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖 在10100g 范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm 波长下有最大吸取峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简洁， 灵敏度高，根本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。【仪器与用具】分光光度计；电炉；铝锅；20ml 刻度试管；刻度吸管5ml 1支，1ml 2支；记号笔；吸水纸适量。【试剂】190苯酚溶液 90g苯酚A10ml

6、溶解，在室温下可保存数月；29%苯酚溶液 取3ml 90%苯酚溶液，加蒸馏水至30ml，现配现用；3浓硫酸1.8；41%蔗糖标准液 将分析纯蔗糖在801.000g移入100ml容量瓶中，参加0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度；510g/ml蔗糖标准液 11ml参加100ml【方法】标准曲线的制作取20ml 刻度试管11支，从010分别编号，按表24-1参加溶液和水。表24-1各试管加溶液和水的量管 号12345678910100g/ml蔗糖液(ml)00.20.40.60.81.0水(ml)2.01.81.61.41.21.0蔗糖量(g)020406080100然后按挨次向试管内参加1ml

7、9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面快速参加5ml 浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8ml，在恒温下放置30min，显色。然后以空白为参比，在485nm 波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。可溶性糖的提取取颖植物叶片，擦净外表污物，剪碎混匀，称取0.100.30g，共3份，或干材料。分别放入3支刻度试管中，参加510ml 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min提取2次25ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。测定吸取0.5ml样品液于试管中次1.5m，同制作标准曲线的 按下式计算测试样品中糖含量。可溶性糖含量(mg/g)=式中 C标准方程求得糖

8、量(g)；a吸取样品液体积(ml)； V提取液量(ml)；n 稀释倍数；组织重量。二、蒽酮法测定可溶性糖【原理】糖在浓硫酸作用下，可经脱水反响生成糠醛或羟甲基糠醛,生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反响生成蓝绿色糠醛衍生物，在肯定范围内,颜色深浅与糖含量成正比，故可用于糖的定量。 由于反响液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反响， 此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露 定单一糖类时则可避开此种误差。糖类与蒽酮反响生成的有色物质在可见光区的吸取峰为 630nm，故在此波长下进展比色。【仪器与用具】同方法一。【试剂】1g，溶于50ml 乙酸乙酯中，贮于棕色瓶

9、中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。浓硫酸1.8。【方法】标准曲线的制作0.5ml 蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml 1min出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm 糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。可溶性糖的提取同方法一其次步。显色测定0.5ml于20ml刻度试管中次以下步骤与标准曲线测定一样，测定样品的光密度。计算可溶性糖的含量，计算公式同方法一。三、3,5-二硝基水杨酸比色法测定复原糖【原理】3,5-二硝基水杨酸溶液与复原糖各种单糖和麦芽糖溶液共热后被复原成棕红色的氨540nm 波长下测定棕红色物质的消光度值，查标准曲线，便可求出样品中复原糖的含量。【仪器

10、与用具】25ml 血糖管或刻度试管；大离心管或玻璃漏斗；100ml 烧杯；100ml 三角瓶；100ml 容量瓶；刻度吸管1m2m10m；沸水浴；离心机过滤法不用此设备光光度计。【试剂】11mg/ml 100mg 分析纯葡萄糖8烘至恒重，100ml 摇匀，冰箱中保存备用。23,5-二硝基水杨酸试剂：6.3g 3,5-二硝基水杨酸和262ml 2mol/L NaOH 溶液，加到500ml 含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g 结晶酚和5g 亚硫酸钠，搅拌溶解。冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶中备用。【方法】制作葡萄糖标准曲线取7支具有25ml 刻度的血糖管或刻度试管，编号，

11、按表24-2所示的量，准确参加浓度为1mg/ml 的葡萄糖标准液和3,5-二硝基水杨酸试剂。将各管摇匀，在沸水浴中加热5min，取出后马上放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温， 再以蒸馏水定容至25ml 刻度处，用橡皮塞塞住管口，颠倒混匀如用大试管，则向每管参加21.5ml 蒸馏水，混匀。在540nm 波长下，用0号管调零，分别读取16号管的消光值。以消光值为纵坐标，葡萄糖mg 为横坐标，绘制标准曲线，求得直线方程。表24-2各试管加溶液和试剂的量管 号0123456葡萄糖标准液(ml)00.20.40.60.81.01.22.01.81.61.41.21.00.83,5-二硝基水杨酸试剂ml1.5

12、1.51.51.51.51.51.5相当葡萄糖量(mg)00.20.40.60.81.01.2样品中复原糖的测定样品中复原糖的提取：准确称取3g 食用面粉，放在100ml 的烧杯中，先以少量蒸50ml 50恒温水浴中保温20min，使复原糖浸出。离心或过滤，用20ml 蒸馏水洗残渣，再离心或过滤，将两次离心的上清液或滤液全部收集在100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，作为复原糖待测液。显色和比色：取3支25ml 刻度试管，编号，分别参加复原糖待测液2ml，3,5-二硝基水杨酸试剂1.5ml，其余操作均与制作标准曲线一样，测定各管的消光值。分别在标准曲线上查出相应复原糖mg数，按下式计

13、算复原糖百分含量：复原糖%=式中 C标准曲线方程求得的复原糖mgV提取液的体积ml； 显色时吸取样品液体积ml； 样品重g。四、淀粉含量的测定【原理】 的作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物，利用苯酚或蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反响， 即可进展比色测定。【仪器与用具】100ml4，50ml20.5ml1，2.0ml3，5ml4；分光光度计；记号笔。【试剂】1浓硫酸1.8；429.2mol/L HClO ；432蒽酮试剂：同蒽酮法9苯酚，同方法一；4淀粉标准液：准确称取100mg 纯淀粉，放入100ml 容量瓶中，加6070ml 热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸0.5h，冷却后加蒸馏水稀释至刻度，则每

14、ml 含淀粉1mg，吸取此液5.0ml，加蒸馏水稀释至50mlml含淀粉100g 的标准液。【方法】标准曲线制作取小试管11支从010编号，按表24-3参加溶液和蒸馏水。以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可，见方法一或方法二，绘制相应的标准曲线。表24-3各试管参加标准液和蒸馏水量管 号12345678910淀粉标准液(ml)00.40.81.21.62.0ml2.01.61.20.80.40mg04080120160200样品提取将提取可溶性糖以后的残渣，移入50ml 容量瓶中，加20ml 热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸15min，再参加9.2mol/L 高氯酸2ml 提取15min，冷却后，混匀，用滤纸过滤，并用蒸馏水定容2500r/min10mi。测定 可承受苯酚法或蒽酮显色法测定。按下式计算淀粉的含量。淀粉水解时，在单糖残基上加了1分子水，因而计算时所得的糖量乘以0.9才为扣除参加水量后的实际淀粉含量。