百令菌种鉴定

1、杭州中美华东制药百令胶囊菌种鉴定目前世界上已发现同属“虫草属”的虫草已有三百五十种之多，其中在中国已发现过六十余种，包含：冬虫夏草和虫草冬虫夏草（C.sinensis） 北冬虫夏草(C.militaris)大团虫草（C.ophioglossoides） 亚香棒虫草(C.hawkesii) 古尼虫草(C.gunnii) 珊瑚虫草(C.martialis)镰刀状虫草(C.falcata ) 泰山虫草(C.taishanensis）山西虫草(C.shanxiensis) 凉山虫草(C.liangshanensis)新疆虫草(C.gracilis ) 香棒虫草(C.barnesii)等虽然已发现的品种

2、繁多，但其中具有药用价值的品种却并不多；有些还具有毒性，错误服用后可能会直接破坏人体的肌体功能。冬虫夏草和虫草最具有价值的是： 冬虫夏草 （Cordyceps sinensis（Berks.）Sacc.）冬虫夏草的药用价值公元780年，西藏的藏本草首次记载了冬虫夏草的药学功效。作为治病、防病、强身的药物已有一千二百年的历史。与人参、鹿茸一起被誉为国药三大宝。天然冬虫夏草性温、味甘，归经入肺、肾二经。历部 中华人民共和国药典记载其功用为：补肺益肾，化痰、平喘，主治久咳虚喘，劳嗽咯血，阳痿遗精，腰膝酸软，食欲不振，老人畏寒，病后久虚不复，及治诸虚百损等病症。 冬虫夏草的药用价值冬虫夏草什么是冬虫夏

3、草？冬虫夏草是一种昆虫和真菌的复合体。被寄生的虫体是虫草蝙蝠蛾的幼虫。寄生的真菌是冬虫夏草菌（cordyceps sinensis (BerK.)Sacc.），它属于真菌门，子囊菌纲，肉座菌目，麦角菌科，虫草菌属，虫草种。 8月左右雪线以下，阴坡半阴坡5月5-15日8-9月间3-10摄氏度子囊孢子感染蝙蝠蛾幼虫菌核（10月到次年五月,菌丝束）子座7月下旬子囊成熟分生孢子 长出牙管僵虫冬虫夏草生活史形成僵虫过程23天内 长出牙管冬虫夏草主要通过露出地面的子座识别。采摘时通常在子座的周围挖一个坑，将虫体包含在内，连土一起取出，破坏大量的植被，掠夺式采挖生态环境破坏极其严重。国家制定实施了有关虫草资

4、源采集管理的相关法规。冬虫夏草的采集冬虫夏草保护和开发的难题人工培育尚有许多课题亟待解决。全国先后有60多个科研单位参加冬虫夏草研究，但在人工培育的菌种接种、重复批量培育出子座上还有一定困难，要完全实现人工培育还有相当距离。野外大面积半人工培植冬虫夏草虽在几个地区展开，也还有许多技术问题需要解决。Hirsutella hepiali chen et shen,sp.nov 中国被毛孢（百令）Paecelonvyces hepiali 蝙蝠蛾拟青霉（金水宝）Mortierella hapialia 蝙蝠蛾被孢霉（至灵）Cephalosporium dongchongxiacao 虫草头孢菌（宁心

5、宝）等等。市场上冬虫夏草菌种很多，也很混乱人工虫草制剂刘锡琎，真菌学报8（1）确定哪些菌种是真正的冬虫夏草菌种，关键是能将分离出的菌株在产地接种在蝙蝠蛾幼虫体上，或人工离体培养使之能长出含子囊孢子的子座来，才能肯定该菌种是真正的冬虫夏草菌种。目前能达到这个水平的菌种只有一个，是中国被毛孢。 (Hirsutella hepiali chen et shen,sp.nov） 百令菌种是真正冬虫夏草菌种谁是真正的冬虫夏草菌种？专利号: 851019714天然冬虫夏草子座与人工冬虫夏草子座的形态完全一样生活史一致在培养基中长出的人工子座生活史一致百令胶囊所使用的生产菌种是目前能在人工培养基上完成与天然

6、冬虫夏草一致生活史的唯一菌种。结论 中科院微生物研究所开展了冬虫夏草及其相关类群的分子系统学分析的课题（创新经费赞助(编号0110)）。由魏鑫丽博士、印象初院士、郭英兰研究员、沈南英研究员、魏江春院士进行了该课题。分子水平一致研究目标中华束丝孢与冬虫夏草之间的亲缘关系？冬虫夏草菌Cordyceps sinensis中国被毛孢Hirsutella sinensis中华束丝孢Synnematium sinense蝙蝠蛾拟青霉Paecilomyces hepiali亲缘关系？供试材料编号、名称、产地及提供者编号菌株号名 称产地（供者）有性型S4=Cs-Q无冬虫夏草（Cordyceps sinensi

7、s (Berk.) Sac.） 青海（沈南英） G3=Cs-S无冬虫夏草（Cordyceps sinensis (Berk.) Sac.) 四川（郭英兰） 无性型G2=Hs-SGuo-2中国被毛孢（Hirsutella sinensis Liu et al.） 四川（郭英兰） S1=Ss-Q0207中华束丝孢（Synnematium sinenseYin & Shen） 青海（沈南英） S2=Ss-Q上020中华束丝孢 (Synnematium sinense Yin & Shen) 青海（沈南英） S3=SsKD0205 F9中华束丝孢 (Synnematium sinense Yin &

8、Shen) 青海（沈沧） S5=PhCs-4蝙蝠蛾拟青霉（Paecilomyces hepiali Chen et Dai）青海（沈南英）外群G4=Pm-Guo无蛹草拟青霉（Paecilomyces militaris Liang） 吉林（郭英兰） 总DNA提取： 采用改良CTAB法（Rogers & Bendich, 1988）。DNA随机扩增多型性(RAPD)分析扩增反应：955分钟，1个循环，94，1分钟，361分钟，72 2分钟，40个循环；最后722分钟。扩增产物在1.5%琼脂糖凝胶中电泳，80V，2小时。随机引物的选用： 从华美公司试剂盒中选择了6个随机引物： S23（AGTCAG

9、CCAC）， S33（CAGAACCCAC）， S61（TTCGAGCCAG）， S146（AAGACCCCTC）， OPW-06（AGGCCCGATG）， OPV-14（AGATCCCGCC）。RAPD反应体系（25l）含有：25mM MgCl2 1.5l，2.5mM dNTP 1.5l，10M 引物2l，10Buffer 2.5l，3U/l Taq酶0.5l，模板（稀释50倍）0.5l，无菌去离子水16.5l。6个随机引物的图谱分子水平一致利用PAUP分析6条引物的RAPD图谱所得的树型图（Distance method；bootstrap=1000；UPGMA），节间数字代表bootst

10、rap值。PCR扩增、测序及分析：通过PCR从供试菌株总DNA中进行核rDNA ITS区 (ITS1-5.8S-ITS2)碱基序列的扩增；引物选用ITS4和ITS5 (White et al., 1990)；PCR产物由上海博亚和基康公司测序。测序结果利用软件DNAMAN 4.0进行比对；利用Mega 2进行系统学分析（Kumar et al., 2001）；采用Kimura 2-parameter模式，存在缺失时成对删除；构建系统关系树采用NJ 法，重复运算1000次（bootstrap=1000）。nrDNA间隔区(ITS)序列分析中间省略分子水平一致分子水平一致节间数字代表bootstr

11、ap值（低于50因不是同一类群而未标识）。分子水平一致内群1冬虫夏草 Cordyceps sinensis中国被毛孢 Hirsutella sinens 中华束丝孢外群2蝙蝠蛾拟青霉 Paecilomyces hepiali外群3蛹草拟青霉 Paecilomyces militaris2010年版国家药典刊登书籍:记述内容:关键内容:中华人民共和国药典2010年版百令胶囊药典标准百令胶囊成份的更改2010年版国家药典关键内容:详细陈述:具体影响:百令胶囊成份的更改百令胶囊为发酵冬虫夏草菌粉目前市场上，百令胶囊为唯一的发酵冬虫夏草菌粉，区别于其他虫草制剂百令胶囊应用于多个科室药理研究【性味】 甘、温【归经】 入肺、肾二经【功效】 补肺益肾，化痰、平喘