技术路线图(国自然)

1、实验万事屋”出品技术路线例子1（蓝色已完成，紫色为实验目的）前期工作（已发表SCI）组织标本证实xx是重要的抑癌因子xx在乳腺癌组织中表达下调/缺失、癌旁高表达XX细胞实验功能验证肿瘤组织和癌旁组织亚细胞定位不同实验万事屋”出品实验万事屋”出品MCF-7细胞低表达MDA-MB-231细胞较高表达,实验万事屋”出品实验万事屋”出品XX-RNAiXX过表达体外功能实验-+/-功能验证，初步分子机制侵袭转移实验实验万事屋”出品实验万事屋”出品XX在乳腺癌中确切的分子调控机制11J深度测序分析XX改变引起PathwayArray检测凋亡、侵收隹临床300例乳癌样未的基因表达谱的改变袭转移相关通路蛋白表

2、达变化J收集临床300例乳癌样本J实验万事屋”出品实验万事屋”出品根据下游靶分子群，利用生物信息软件Genes2Networks、Go-anaslysis建.立XX调控相关的信号通路制备组织芯片，检测分析XX的表达、亚细胞定位，回顾性分析XX和肿瘤预后、分型的相关性实验万事屋”出品实验万事屋”出品GSTpulldown联合Co-IP实验验证与XX直接相互作用的蛋白ChIP联合芯片技术鉴定与XX发生相互作用的基因DNAXX蛋白结构生物信息学分析制备互作蛋白突变体，分析相互作用结合位点DNA结合验证qPCR实验验证XX的结合目的基因RNAi/回复过表达实验验证XX对下游信号通路的调控作用EMSA实

3、验验证XX的结合目的基因总结XX发挥调控作用的精细分子机制实验万事屋”出品“实验万事屋”出品实验万事屋”出品“实验万事屋”出品例子2（细胞水平、组织水平分开画图，如果有动物水平再另外画一个）1、细胞水平：2、组织水平实验万事屋”出品“实验万事屋”出品实验万事屋”出品“实验万事屋”出品例子3实验万事屋”出品“实验万事屋”出品例子4实验万事屋”出品“实验万事屋”出品实验万事屋”出品“实验万事屋”出品DNA蛋白Papnet筛查宫颈癌变蛋白DNA实验万事屋”出品“实验万事屋”出品HPV致病DNA正向示踪分析HPV致病蛋白逆向求源分析实验万事屋”出品“实验万事屋”出品实验万事屋”出品“实验万事屋”出品分

4、离克隆宫颈癌细胞的表达差异DNA核酸印迹杂交分析筛查致病DNA病毒致癌分子调控机理分析致癌相关蛋白一级分析合成相应mRNA生物探针表达谱基因芯片杂交分析鉴定异表达白致癌相关蛋白二维显示分析卑算机距阵分讣芯片融蛋白分解析译致病基因DNA核苷酸序列实验万事屋”出品“实验万事屋”出品实验万事屋”出品“实验万事屋”出品病毒致癌蛋白分子生物特性分析提出干预阻断宫颈癌发生方案及策略实验万事屋”出品“实验万事屋”出品实验万事屋”出品“实验万事屋”出品例子5实验万事屋”出品实验万事屋”出品实验万事屋”出品实验万事屋”出品例子6（可以再改进下，不够美观）实验万事屋”出品实验万事屋”出品例子7研究对象；大鼠研究层

5、次：器官水平细胞水平分子水平动物模型：心肌缺血/苒灌注单个心肌细胞心肌细胞钙敏感受体复制方法：离体心脏灌流离体心脏灌流分子生物学技术（预灌-旷置-复灌）（胶原酶消化）（KT-PCR等）实验分组：对照组C&R激动剂4R激动剂组缺血/再灌注组（正常缺血再灌注）其它因素组正常对照组观察指标：冠脉流出液和组织匀浆中氧自由基和LDH心电图，心功能测定心肌超微结构细胞内游离钙离子电流细胞爛亡（Caspase_3）CaR的mRNA表达CaR蛋白质表达(Noitheiii.Wesrem等)实验万事屋”出品实验万事屋”出品实验万事屋”出品实验万事屋”出品例子8“实验万事屋”出品实验万事屋”出品“实验万事屋”出品

6、实验万事屋”出品例子9“实验万事屋”出品实验万事屋”出品“实验万事屋”出品实验万事屋”出品技术路线“实验万事屋”出品实验万事屋”出品“实验万事屋”出品实验万事屋”出品研究对氯A研究层次1动物模型,复制方法,实验分组观察指标1细胞内游离钙有关离子电流细胞凋亡细胞周期冠脉流出液和组织匀浆中多胺，氧自由基和LDE含量右电图描记心功能测定心肌超徹结构和定检多胺代谢关键酶活性mRNA和蛍白就表达FasFns-LBcl-2BaxaCaspas-3,caspas-8“实验万事屋”出品实验万事屋”出品“实验万事屋”出品实验万事屋”出品研究目的,揭示*噺钿如多黑吹炳昨的“实验万事屋”出品实验万事屋”出品“实验万

7、事屋”出品实验万事屋”出品例子10（图不够清楚，但仍可以看出结构清晰）(aiico牡理NocodazolEir-RL.lfc.l-USAL相工蛋白al-IUKal-la第轟亡掲主雷白用山泌干ML右港狂再业IT低羸足毀粕仁灯離鷹用期相工I：tfTflcSMWWwaiaa舌时們希测.NcZxfi話NiHT同祜于讒性利EIF证踌曲莊启甜31于带域址*平为京朋刎扯卜E*自击平禮旦毗1-翳9中蹶藹SSE3iffffrt；staCBITEfest1ilFatWiflffjft询麻子WKIt*TJH椎黑氏白*平KBHCJHJl惜测经IT爲曰単羸罰迂當3逹廉INi&tt-WJHI-IH白斗平BJlni?响辰施罚农述研ANocodwftKae/un雀仲爪f隣自浚诬并它拥亡相英准臼崔测旳船初芝asl-lLIT*afiftjl揄包左亡胎按匿白HRT曲