脑益康对阿尔茨海默病大鼠中枢胆碱能系统酶的影响

1、脑益康对阿尔茨海默病大鼠中枢胆碱能体系酶的影响耿劲松，周爱玲，胡亚娥，朱燕，茅家慧，施海燕【摘要】目的不雅察中药复方脑益康对阿尔茨海默病AlzhEiersdisease,AD大鼠中枢胆碱能体系的庇护作用。要领接纳脑立体定位仪自双侧基底前脑eynert核nuleusbasalisfeynert,NB注射鹅膏蕈氨酸Ibteniaid,IB创立AD大鼠模子，别离赐与差异剂量脑益康对AD大鼠举行治疗，测定差异组实行大鼠脑构造乙酰胆碱酯酶aetylhlinesterase,AhE、丁酰胆碱酯酶butyrhlinesterase,BuhE活性及胆碱乙酰转移酶hlineaetyltransferase,hA

2、T在基底前脑的表达。效果脑益康能按捺脑构造AhE和BuhE的活性；改进基底前脑hAT阳性神经细胞形态并增长其数量。结论脑益康通过促进hAT表达，增长乙酰胆碱aetylhline,Ah的合成；通过低落脑构造AhE和BuhE的活性，按捺Ah剖析；从而增长脑内Ah含量，改进AD大鼠的学习、影象停滞。【关键词】脑益康；阿尔茨海默病；乙酰胆碱酯酶；丁酰胆碱酯酶；胆碱乙酰转移酶Keyrds：NaYikang;Alzheiersdisease;Aetylhlinesterase;Butyrhlinesterase;hlineaetyltransferase阿尔茨海默病AD是产生在老年前期或老年期，与年事相干

3、的神经体系退行性疾玻AD的发病机制极其庞大，病因学尚不明晰，且无殊效治疗或逆转疾病希望的药物，其病理生理机制及防治研究是比年来神经科学范畴的研究热门之一。故国传统中医药理论对AD有独到的熟悉，以为AD属中医学“呆证“善忘等病的范畴。中药复方脑益康由制首乌、知母、石菖蒲等构成。制首乌是故国医学中一种陈腐的用于延年益寿、益脑调心的药物；中药知母能明显上调脑1-毒蕈碱型乙酰胆碱受体密度，且上调的幅度和改进影象之间存在显着的正相干1；石菖蒲有改进影象、扩张血管、落压等作用。脑益康有用身分多，药理作用普及，可以多条理、多靶点地发挥治疗作用。本实行接纳自负鼠双侧基底前脑eynet核NB注射鹅膏蕈氨酸IB创

4、立AD动物模子，生物化学要领检测皮层乙酰胆碱酯酶AhE和丁酰胆碱酯酶BuhE活性，免疫构造化学要领不雅察基底前脑胆碱乙酰转移酶hAT阳性神经细胞形态，为临床应用脑益康治疗AD，促进中枢胆碱能神经成效的规复提供充实的理论根据。1东西与要领1.1质料实行所用中药复方脑益康(NaYikang，NYK)由南通市中病院制剂室制成颗粒剂，每克颗粒剂含生药1.98g；脑复康吡拉西坦片，南京白敬宇制药厂；IBSiga-Aldrih；山羊抗hAT一抗美国hein，批号：0510012059；AhE及BuhE测定试剂盒南京建成生物工程研究所；二抗免疫组化染色及DAB试剂盒北京中杉金桥生物技能。大鼠脑立体定位仪、注

5、射泵及微量注射器美国Stelting公司；Y-型迷宫刺激器张家港市三兴讲授机器厂；XHF-1高速疏散器上海金达生化仪器厂；754型紫外可见分光光度计上海光谱仪器；冰冻切片机LAIA1900，德国；数码相机annPerShtS60，日本。1.2要领2效果2.1对AD大鼠脑构造AhE，BuhE活性的影响模子组大鼠脑构造AhE活性较假手术组明显升高P0.01；脑益康中、高剂量组大鼠脑构造AhE活性较模子组明显低落P0.01，与假手术组比拟无显着差异P0.05。效果见表1。表1脑益康对AD大鼠脑构造AhE活性的影响略与假手术组比力，模子组BuhE活性明显升高P0.01；与模子组比力，脑益康中剂量组Bu

6、hE活性显着低落P0.05。效果见表2。表2脑益康对AD大鼠脑构造BuhE活性的影响略2.2对AD大鼠基底前脑hAT表达的影响取3组大鼠脑构造，每例一连取AP-0.36AP-2.64的6张切片，在200倍光镜下记数基底前脑hAT阳性细胞数，取其均匀值为每例的阳性细胞数。假手术组可见深染的hAT阳性神经元，数量较多，突触较完备；模子组神经元着色变浅、阳性细胞数量淘汰P0.01、胞体缩孝突触不完备乃至消散，提示模子组hAT表达淘汰；脑益康中、高剂量组比模子组的阳性细胞数量明显增长P0.01，突触完备性增长，hAT表达程度增长。见图1及表3。表3脑益康对AD大鼠基底前脑hAT表达的影响略3讨论正常环

7、境下，BF神经元重要位于基底核、歪角带核和内侧隔核合成大量乙酰胆碱Ah并经胆碱能投射纤维运送至大脑皮层和海马。Ah到场调治大脑的神经元运动，在突触可塑性方面起关键作用。研究表白，当大鼠担当空间及反响性练习时，纹状体和海马Ah开释增长3。Ah是影象形成的必须神经递质和恒久影象的生理底子，Ah通过脑干网状布局上行冲动体系维持大脑觉悟状态，而大脑皮层及海马的Ah缺失引起空间认知和影象停滞。Ah天生及生物学作用的任何环节非常，均可引起胆碱能体系成效停滞。增长Ah合成或淘汰Ah的剖析，可改进学习、影象本领。Ah在突触间隙被胆碱酯酶hlinesterase,hE水解为胆碱和乙酸，开释出的胆碱大部门经胆碱能

8、转运体被胆碱能神经末稍重新摄龋hE按照其水解基质的埋头性和速率差异分真性AhE和假性AhE，前者又称AhE，后者包罗BuhE和丙酰胆碱酯酶prpinylhlinesterase,PrhE。AhE水解中枢神经体系和副交感神经节后纤维和自主神经节前纤维冲动时所开释的Ah，以包管神经快乐与按捺的和谐同一。AhE活性升高与hAT活性落落严密相干，且AhE程度与细胞外Ah含量有关4。AhE通过按捺突触处Ah落解，使Ah浓度增长，进步AD患者的学习、影象本领。BartzkisG.等5研究创造，AhE通过增长少突胶质细胞的胆碱能刺激，促进髓鞘形成及修复。本实行检测脑内AhE活性表现，模子组大鼠胆碱能神经元受

9、损后，脑构造AhE活性较假手术组明显升高P0.01；但脑益康中、高剂量组大鼠脑构造AhE活性较模子组明显低落P0.01，提示中、高剂量脑益康具有较好的AhE按捺作用。脑益康通过按捺AhE，淘汰Ah的剖析，从而改进AD大鼠的学习、影象停滞。在中枢神经体系内，BuhE重要表达于胶质细胞，部门表达于内皮细胞和神经元，BuhE大概协同AhE调治中枢Ah程度。构造化学研究表白，某些胆碱能神经元含有BuhE而非AhE6。只管AD患者脑构造中的AhE含量远高于BuhE，但是研究表现，在担当胆碱能神经纤维支配的皮层及海马，均有活化的BuhE7，在影象、认知和举动等方面发挥作用。随着AD的病情生长，BuhE活性

10、举行性增长8。因此，按捺BuhE也大概有利于改进AD患者病症。临床随访表白，与多奈哌齐加兰他敏比拟，AhE-BuhE的双重按捺剂如利凡斯的明能更好地改进AD患者认知本领9。本实行检测脑内BuhE活性表现，模子组大鼠脑构造BuhE活性明显升高P0.01，而脑益康中剂量组大鼠BuhE活性较模子组显着低落P0.05。提示脑益康对胆碱能体系损伤的AD大鼠脑构造中BuhE活性有影响。效果提示，脑益康通过按捺脑构造AhE和BuhE的活性，使脑内Ah含量增长，从而改进AD大鼠的学习、影象本领。在轴突末稍的轴浆内，hAT催化乙酰辅酶A的乙酰基与胆碱结合天生Ah。乙酰辅酶A泉源于糖酵解，它必须从胆碱能神经元的线

11、粒体转运出来。胆碱能神经元表达一种Na+-依靠性、密胆碱-3heihliniu-3,H-3敏感性的胆碱能转运体，卖力将胆碱摄取到神经元10。当突触前神经元快乐传到其轴突末稍时，突触前膜对a2+通透性增长，a2+的内流使突触囊泡向突触前膜挪动并与之交融，以胞吐方法开释Ah。胆碱能神经元受损引起的脑构造Ah含量淘汰，是学习、影象本领落落的紧张病理学基矗固然Ah是最早被确定的一种神经递质，但是，由于Ah很不不变，故本实行接纳免疫构造化学染色要领不雅察AD大鼠脑构造hAT的表达。关于AD，最早并已经屡次被证明1113：随着患者病程的希望，大脑皮层和海马的hAT表达程度及活性显着落落，低落程度与痴呆的严峻度呈正相干。在AD患者中枢神经体系，出现严峻的胆碱能体系成效退变，hAT非常表达导致Ah合成停滞，使神经传导缺乏需要的胆碱能递质，从而影响学习和影象。本实行创造模子组大鼠基底前脑hAT表达程度显着落落，胆碱能神经元受损，重要表示为神经元着色变浅、阳性细胞数量淘汰P0.01、胞体缩孝突触不完备乃至消散，进一步证明了IB损伤NB与hAT的干系。而脑益康使基底前脑的hAT阳性细胞增多、hAT表达程度增长；尤其是脑益康中、高剂量组的阳性细胞数量比模子组明显增长P0.01，突触完备性增长，hAT表达程度增长。说明脑益康可以通过庇护胆碱能体系，加强胆