还原型谷胱甘肽对培养乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的影响

1、复原型谷胱甘肽对造就乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响王进，王一彪，杨海英，赵丽丽，孔春妍【摘要】目的研究复原型谷胱甘肽对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤的影响。要领创立心肌细胞A/R损伤模子，随机分为组：A组，正常比拟组；B组，单纯缺氧/复氧(A/R低氧2h，复氧1h)组；、D、E组为复原型谷胱甘肽处置惩罚组，参加复原型谷胱甘肽(GSH)别离使其终浓度为40、80、160g/L，后A/R。于复氧后测定各组造就液中乳酸脱氢酶(LDH)变革及细胞内丙二醛(DA)含量和细胞存活率。效果与正常组比拟，单纯低氧/复氧组LDH漏出量、DA程度明显升高(P0.01)，细胞存活率明显低落(P0.01)。与

2、缺氧/复氧组比力，各谷胱甘肽处置惩罚组上述变革显着减轻(P0.05)。结论复原型谷胱甘肽对乳鼠心肌细胞A/R损伤具有庇护作用，并具有浓度依靠性。【关键词】复原型谷胱甘肽心肌细胞缺氧复氧Theeffetsfreduedglutathinesdiunanxia/rexygenatininjuriesfnenatalratardiyytes【Abstrat】bjetiveTstudytheeffetsfreduedglutathinesdiu(GSH)nanxia/rexygenatininjuriesfnenatalratardiyytes.ethdsA/Rdelfyardialellsfnena

3、talratsasestablished.Theellsfnenatalratsererandlydividedintfivegrups:ntrlgrup(A):ithutanytreatent;A/Rgrup(B):2-huranxiaflledby1-hurrexygenatin;GSHnditinedgrup():addingGSHintultureediutillthefinalnentratinf40g/LthenA/R;GSHnditinedgrup(D):addingGSHintultureediutillthefinalnentratinf80g/LthenA/R;GSHndi

4、tinedgrup(E):addingGSHintultureediutillthefinalnentratinf160g/LthenA/R.Theativityflatatedehydrgenase(LDH)，thententsfellularelndadehyde(DA)andtheratefellviabilityfeahgrupereevaluatedafterrexyenatin.ResultsparedithgrupA，theA/RgrupshedagreatinreaseinlevelsfLDH，DAandadereaseintheratefellviability(P0.01)

5、.paredithgrupB，theGSHnditinedgrupssignifiantlyattenuatedthesehanges(P0.05).nlusinGSHuldbeaprtetiveeffetnA/Rinjuryfnenatalratardiyytesinanentratindependentanner.【Keyrds】reduedglutathinesdiuardiyytesanxiarexygenatin1质料与要领1.2乳鼠心肌细胞造就无菌取出生13天大鼠乳鼠心脏，剪碎后用0.25胰酶消化45次，取除第1次以外的上清，用含15胎牛血清的高糖DE中断消化，离心取心肌细胞沉淀，

6、参加造就液，会合混匀制成悬液，应用差速贴壁法分散纯化心肌细胞，以5105/l的造就密度接种于孔造就板中，在造就箱中造就，48h后换液。1.3实行分组及操纵步伐试验分为组，每组重复孔，A组为正常比拟组造就板置造就箱中连续孵育3h竣事实行；B组为单纯缺氧复氧组A/R缺氧2h，复氧1h：将造就板置于充有99.氮气的缺氧孵育器中37密闭造就2h，再以5氧气二氧化碳举行复氧1h；组，D组，E组为古拉定处置惩罚组，参加古拉定使其终浓度别离为40、80、160g/L。各组缺氧前、复氧前均给药。1.4实行检测指标(1)计数细胞搏动：在倒置显微镜不雅察并计数心肌细胞搏动的频率及节律。(2)细胞存活率计数：接纳台

7、盼蓝排挤法检测，各组取少许细胞混悬液，0.4%台盼蓝混匀2in，按白细胞计数法在光镜下计数蓝染细胞。台盼蓝摄取率蓝染细胞蓝染细胞未蓝染细胞100%。(3)LDH及DA活性及含量测定：实行竣事后按试剂盒说明测定。1.5统计学要领数据以均数尺度差(xs)2效果2.1古拉定对缺氧/复氧心肌细胞搏动的影响正常造就比拟组心肌细胞搏动相对恒定，节律规矩；A/R组心肌细胞搏动频率减慢，搏动幅度削弱，节律不齐，有部门停搏，与比拟组比拟，差异有非常明显性P0.01)；各古拉定处置惩罚组显着逆转A/R损伤造成的搏动频率和节律非常，与A/R组比力差异有明显性P0.05)。2.2古拉定对心肌细胞缺氧/复氧损伤LDH及

8、DA的影响效果表白，A/R心肌损伤是十明白显的，而古拉定能显着减轻这种损伤，古拉定处置惩罚组各不雅察指标均差异有明显性，因此提示古拉定对付缺氧复氧心肌细胞损害具有庇护作用，且存在量效干系，见表1。表1复原型谷胱甘肽对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤LDH及DA的影响(xs)注：B组与A组比力，P0.01；与B组比力，*P0.01；与B组比力，*P0.053讨论3.1复原型谷胱甘肽对缺氧复氧心肌细胞损伤的影响大量研究表白，缺血再灌注期间大量氧自由基的产生可造成细胞损伤。氧自由基导致细胞损伤重要环节为作用于细胞外基质，使胶原和透明质酸崩解，使膜磷脂布局的多聚不饱和脂肪酸过氧化而直接损伤细胞膜；肌浆网和线

9、粒体瓦解，心肌细胞在缺氧缺糖条件下，ATP产生淘汰，代谢停滞，代谢产物聚集，使膜不变性低落，溶酶体开释，导致生物损伤、变性，使LDH开释在造就基中，同时再给氧时氧自由基增长，细胞膜受打击，细胞膜损伤。细胞内LDH进一步增长，故LDH开释量是不雅测缺血再灌注损伤紧张指标。脂质过氧化产物丙二醛(DA)，其含量变革可作为评定自由基天生及对膜脂质双层布局粉碎的指标。本实行从造就的未成熟鼠心肌细胞入手，扫除了在体和离体灌注模子中神经、体液因素及其他稠浊细胞因素的影响，直接使用复原型谷胱甘肽处置惩罚造就的未成熟鼠心肌细胞，效果创造复原型谷胱甘肽各浓度组均可低落缺氧复氧损伤造成的心肌细胞殒命率，淘汰细胞内L

10、DH漏出，淘汰细胞内DA天生，且存在量效干系，表白复原型谷胱甘肽对未成熟鼠心肌细胞有庇护作用。3.2复原型谷胱甘肽对缺氧复氧心肌细胞损伤的庇护机制复原型谷胱甘肽(GSH)对扫除自由基有紧张作用，它是机体内一种紧张的抗氧化剂，它能有用扫除氧化产生的自由基，维持细胞内情况的不变，并在使表露于氧化情况的构造免受自由基损害方面起紧张作用4。GSH在谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的作用下对有机过氧化物(RH)和无机过氧化物(H22)起紧张扫除作用，其还可以起维生素复原剂的作用，使维生素成为复原型而不竭扫除超氧自由基。近期有研究表白5，GSH可维持线粒体内膜巯基基团的复原状态。当GSH含量落落，内源性自由基打击线粒体卵白巯基的大概性增大，一方面使酶活性低落，影响线粒体氧化代谢的3个关键酶及电子通报链中酶的活性，NA