孔圣枕中丹对痴呆动物模型抗凋亡作用及机制的研究

1、孔圣枕中丹对痴呆动物模型抗凋亡作用及机制的研究【摘要】目的：研究孔圣枕中丹抗痴呆动物模型海马神经元细胞凋亡的作用及机制。方法：将50只ister大鼠随机分为正常组、模型组、脑复康组、孔圣枕中丹低剂量组、高剂量组，每组10只。除正常组外，将其余大鼠制成血管性痴呆大鼠模型。给大鼠灌胃后，采用流式细胞技术检测神经元凋亡率及bl-2的表达，采用免疫组织化学法观察p53的表达。结果：孔圣枕中丹、脑复康均能降低血管性痴呆大鼠脑海马神经元凋亡率和bl-2表达，进步p53表达，两组比拟无显著性差异。结论：孔圣枕中丹能抑制神经元细胞凋亡，其机制可能与增强p53表达、降低bl-2表达有关。【关键词】孔圣枕中丹；血

2、管性痴呆；细胞凋亡；bl-2；p5Abstratbjetive：TbserveantiappttieffetfKngshengZhenzhngpillnhippapusneurnfratsithvasulardeentia.ethds：50isterratsererandlydividedintnralgrup，delgrup，Nafukangtreatentgrup，KngshengZhenzhngpilltreatentgrup1ldsage，grup2highdsage.Theapptsisratefhippapusneurnandtheexpressinfbl-2ereeasuredb

3、yflytetry,theexpressinfp53asdetetedbyiunhistheialstaining.Results：parediththedelgrup，theapptsisratefhippapusneurnandtheexpressinfbl-2eredereased，theexpressinfp53asinreasedinNafukanggrupandKngshengZhenzhngpillgrup，butthereisnsignifiantdifferenebeteenNafukanggrupandKngshengZhenzhngpillgrup.nlusins：Kng

4、shengZhenzhngpillanalleviateapptsisratefhippapusneurnthrughupregulatingtheexpressinfp53anddereasingtheexpressinfbl-2.KeyrdsKngshengZhenzhngpill;apptsis;bl-2;p53;vasulardeentia血管性痴呆VasularDeentia，VD是由缺血性或出血性及急、慢性缺血缺氧性脑血管疾病引起的认知障碍，以记忆减退、表情冷淡、呆滞或人格改变为主要临床表现，其发病与细胞凋亡有关12。本实验对中药干预后模型大鼠海马神经细胞凋亡与bl-2、p53蛋白

5、表达的关系进展了研究，现报道如下。1材料与方法1.1实验材料25050g，由山东医科大学动物实验中心提供，合格证号：D20221021。将动物分笼饲养，自由饮水进食，标准饲料喂养，饲料由山东省实验动物中心提供。根本溶剂，将龟板、龙骨打碎先煎30in，再参加其他各药煮沸，浓缩制成100浓度相当于生药1g/L，置于冰箱4储存备用。西药对照药品为脑复康Piraetar，由天津金世制药atN51-66211E；Bl-2试剂盒FluresEinFITanti-useandratBl-2，ebisiene，atN.11-6992；p53抗体，santaruz，atN:s-6243。BetnDikinsn，

6、Iagepr-plus医学图像处理系统，lypus显微镜。1.2实验方法改进的四血管夹闭法制备大鼠脑缺血再灌注模型，10%水合氯醛3L/kg体重腹腔麻醉，取仰卧位，颈部正中切口，别离双侧颈总动脉，穿线备用，用微型动脉夹关闭双侧颈总动脉10in，再通10in，反复3次，撤线，缝合3。正常组与模型组用生理盐水灌胃，每日1次；脑复康组灌胃西药脑复康10L/kg，孔圣枕中丹高、低剂量组分别给孔圣枕中丹l3.5g/kg、9.0g/kg，灌胃给药，每日1次，连续14d。第15d用4%多聚甲醛灌注固定后断头取脑备用。参加20LFIT标记的bl-2抗体，避光染色30in，用流式细胞仪检测bl-2蛋白表达的荧光

7、值。1.3统计方法数据统计以SAS软件单因素方差分析进展处理，计量资料数据以均数标准差s表示。2结果2.1孔圣枕中丹对痴呆大鼠神经元细胞凋亡率的影响结果见表1。由表1可见，给药后脑复康组、孔圣枕中丹低剂量组、高剂量组与模型组比拟，海马神经细胞凋亡率明显降低P0.05，但3组之间比拟无显著性差异。2.2孔圣枕中丹对痴呆大鼠神经元细胞bl-2、p53表达的影响结果见表2。由表2可知，与正常组比拟，模型组海马神经细胞bl-2表达明显降低，p53表达明显增高；与模型组比拟，脑复康组、孔圣枕中丹低、高剂量组海马神经bl-2表达明显增高，p53表达明显降低。但3组之间比拟差异无显著性。3讨论细胞凋亡在机体

8、生长发育和维持内环境稳定中起重要作用，凋亡涉及病理性细胞死亡并与多种疾病的发病机制有关4。以往人们认为脑缺血后神经细胞死亡形式是坏死，但近年来越来越多的研究说明，缺血诱导的神经元死亡还包括神经元凋亡5。缺血性脑损伤后产生大量的自由基、兴奋性氨基酸、N聚集，并导致细胞内钙超载、诱导细胞凋亡的发生，是痴呆发生的可能机制6。凋亡在堵塞灶形成、迟发性神经元坏死DND的过程中起着重要作用。因此，对脑缺血后神经元凋亡的研究可进一步理解缺血性脑损伤发活力制，并对其治疗开拓新的途径。近年的研究发现，细胞凋亡的发生与bl-2基因表达有关，其在决定缺血后神经元的生存中起重要作用78。bl-2基因家族是凋亡抑制者，

9、脑缺血时抑制细胞死亡的可能机制与其参与磷酸化依赖性调节、自由基产物的部分抑制、线粒体浸透性转运的调节等有关，提示bl-2表达的增加可能对脑缺血后损伤具有保护作用。过量表达bl-2的转基因动物已证实了bl-2的神经保护作用9。p53作为转录因子调节多种基因的转录，参与细胞周期调控，参与DNA复制与损伤修复，参与诱导细胞凋亡等。已有大量研究说明：缺血性脑血管病存在DNA损伤及细胞凋亡。因此，p53及其相关基因在脑缺血中的表达调控已成为目前缺血神经元死亡机制中的一个关键性环节。虽然不同的缺血模型中，不同时间不同部位可能存在不同的基因表达调控机制，但目前公认p53是最常见的促凋亡基因，通过激活一系列下

10、游基因发挥促凋亡作用10。孔圣枕中丹出自?备急千金要方?，方中龟板为血肉有情之品，善补精血，能滋阴潜阳、补肾健骨、补心安神；石菖蒲为开窍醒神豁痰之良药，远志宁心安神，袪痰开窍，龙骨甘涩收敛，能镇惊安神。四药合用，祛痰开窍，补肾安神，是临床治疗血管性痴呆的常用方药11。本实验结果说明，模型组大鼠脑神经细胞凋亡率明显增强，而脑复康及孔圣枕中丹组大鼠神经细胞凋亡与模型组比拟明显减少，说明孔圣枕中丹有拮抗脑神经细胞凋亡的作用，对痴呆模型大鼠脑内与学习记忆亲密相关的海马区的神经元起到了保护作用。细胞凋亡调控基因p53、bl-2的表达检测结果说明，孔圣枕中丹能降低脑缺血再灌注所致痴呆大鼠海马A1区p53的

11、表达，并增强bl-2的表达，说明孔圣枕中丹通过降低p53、进步bl-2在神经元细胞中的表达而到达抑制神经元细胞凋亡。所以，拮抗缺血性脑病所致痴呆病人神经元细胞的凋亡，可能是孔圣枕中丹改善痴呆病症的主要作用机理，抗凋亡结合其他手段的结合治疗将成为痴呆治疗的主要内容。【参考文献】1赵宪林，李东培.血管性痴呆大鼠海马神经元超微构造的研究J.解剖科学进展，2000，62：161.2RsenbanD，DareJ，LienaJ，etal.Pretreatentithintra-vertriularaurintriarbxryliaiddeseaseinfartsizebyinhibitingapptsis

12、fllingtransientsizebyinhibitingapptsisfllingtransientglbalisheiaingerbilsJ.AnnNeurl，199843：654.3TsutuA，NriT，idriN.TheeffetsfnbrbianenneurnalelldeathinthehippapusaftertransientglbalerebralisheiainratsJ.NeursieneLetters，2022，3573：227-231.4YangE，KrseyerS.leularthanatpsis：adisursenthebl-2failyandelldeat

13、hJ.Bld，1996，882：386-401.5LeqqiG，NeriP，GrazianA，etal.erebellarntributintspatialeventpressing：haraterizatinfpredurallearningJ.ExpBrainRes，1999，1271：1-11.6Nakaura，RaghupathiR，erryDE，etal.verexpressinfbl-2isneurprtetiveafterexperientalbraininjuryintransgeniieJ.JpNeurlgy，1999，4124：681.7高云良，高英茂.脑缺血再灌注后神经元和内皮细胞凋亡与bl-2和Bax表达的时相关系J.解剖学报，2022，332：151-155.8高玉培，顾玲，唐太昆，等.大鼠局灶性脑缺血对大脑皮质Bax、bl-2基因表达的影响J.昆明医学院学报，20023：26-27.9hpp，LiY.ApptsisinfalerebralisheiaJ.AtaNeu-rhirSupp