乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证课件医学-2

1、乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证PPT课件-医学资料乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证PPT课件-医学课程要求掌握： 乙肝表面抗原的ELISA法定量检测方法； ELISA法方法学评价的方法。熟悉： 定量检测的酶标仪操作要领； 各种缓冲液的配制。了解： ELISA检测中的影响因素和注意事项。课程要求掌握：试验目的 进行乙肝表面抗原ELISA法定量分析的方法学验证。试验目的 进行乙肝表面抗原ELISA法定量分析的方法学验证。 试验材料 1 试剂盒乙肝表面抗原ELISA法定量分析试剂盒，福州蓝图生物工程有限公司出品。2 仪器及酶标板酶标仪：Bio-Rad 680 ；洗板机：Bi

2、o-Rad 1575；超纯水系统：Millipore Elix ；电热恒温培养箱(DNP-9052):上海精宏实验设备有限公司。 试验材料 1 试剂盒3 溶液配制0.01M pH7.4的PBS缓冲液： 称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。质控品： 用PBS缓冲液将标准品配制成6、3、1.5ng/ml三个质控品，每质控品1ml。3 溶液配制试验方法 1 标准曲线各浓度的配制用PBS缓冲液将标准品配制成8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.062

3、5ng/ml。试验方法 1 标准曲线各浓度的配制2 测定方法 设计标准品、质控品及空白分配方案；取出试剂盒中已包被酶标板，取出板条，按需要重新配制；在相应孔中加入系列标准品、质控品及空白对照，每孔50ul；37温育30min，洗板4次；加入酶标抗体，生物素二抗，50 ul/孔；37温育30min，洗板4次；加入A、B液,50 ul/孔，37温育15分钟。加入终止液，50 ul/孔。2 测定方法 3 标准曲线制作及结果计算酶标板放入酶标仪，盖上盖子；在电脑上打开Microplate Manager 5.2软件选择450nm波长（参照波长630nm），设置LAYOUT和报告模式，测定各孔吸收值；输

4、入标准品各浓度值，以双对数法制备标准曲线，获取各孔的浓度值，打印标准曲线图和计算结果。3 标准曲线制作及结果计算ELISA法标准曲线示意图ELISA法标准曲线示意图4 准确度（回收率）计算 按示例表1样式列表并计算回收率。4 准确度（回收率）计算 乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证PPT课件-医学资料5 按示例表列表并计算精密度 。5 按示例表列表并计算精密度 。板内精密度板内精密度板间精密度板间精密度6 检测限（LOD）计算：取空白孔的OD值的均数加2倍标准差。6 检测限（LOD）计算：注意事项标准品和质控品配制要准确。实验各个环节都很重要，每步操作都要认真。注意事项标准品和质控品配制要准确。讨 论1.实验背景介绍（目的、采用的方法、检测原理、方法学验证的基本知识介绍）2.本实验的设计及实施特点3.实验结果分析4.临床应用及分析讨 论1.实验背景介绍（目的、采用的方法、检测原理、方法学验本实验报