本科生-农药生物测定

1、农药生物测定刘井兰扬州大学园艺与植物保护学院绪 论一、生物测定(biological assay，bioassay)概念通常是指具有生理活性的物质对某种生物产生效应的一项技术。Finney(1952)：指对生物的任何刺激产生效应的测定。包括来自物理、化学、生物、生理、心理等方面的刺激对生物活体产生的反应。研究作用物、靶标生物和反应强度三者关系的一项专门技术。二、农药生物测定技术 是利用有害生物(或靶标生物)对农药的反应来鉴别某种化合物生物活性的基本方法。 靶标生物为了保证测定结果准确可靠，供试生物要有足够的数量与质量。人工饲养，通过对饲养条件的定向控制使靶标生物在生理状态、龄期大小，健康状况以

2、及敏感性等方面达到一致性。因此，饲养靶标生物也是生物测定技术的一项重要内容。三、农药生物测定的意义与应用1、测定农药对昆虫、螨类、病原菌、线虫、杂草及鼠类等靶标生物的毒力与药效。2、筛选农药新品种，筛选是农药检测技术的初步工作，而毒力测定是做进一步精确鉴定。3、研究化合物的化学结构与生物活性关系的规律，为创造新农药提供依据。4、研究农药的理化性质及加工剂型与毒效关系，提高农药的使用效果。5、测定不同农药混合使用的效力及寻找增效剂，为农药合理混用提供依据。6、对有害生物抗药性的监测和研究克服或延缓抗药性发展的有效措施。7、利用敏感生物来测定农药的有效含量及残留量。第一章 生物测定技术的原理和原则

3、 一、基本原理杀虫剂生物测定的基本原理是研究杀虫剂与生物的相关性，利用昆虫、螨类、温血动物等对药剂的反应来鉴别杀虫剂的毒力与药效。二、农药生物测定的原则1控制影响因素(条件控制)在毒力测定中，要求只有两个变数，一个是杀虫剂的剂量（或浓度）作为自变数，另一个是死亡率作为应变数（依变数），而其他因素应尽可能保持一致，使影响因素力求稳定，否则，我们所测得的死亡率（Y）不只是由杀虫剂剂量（浓度）的改变而引起，还会因昆虫的大小龄期性别发育阶段或环境条件以及处理方法等的不一致，使得测得剂量死亡率的关系不是直线回归式，而变成复杂的偏回归式，显然，这样做是不合适的，而且造成了分析上困难，得到的结果不可靠。环境

4、条件、靶标生物、药剂环境条件温度：主果影响试虫的活动性，代谢率，体内生理生化的变化，以及对杀虫剂的穿透性，转化率。也影响微生物与植物的生长和药剂进入植物组织的速率。湿度：影响试虫的成活、植物对药剂的吸收等光照：影响植物的光合作用、生理状态与生长势等，也影响一些真菌孢子的形成与萌发。生物材料的一致，如昆虫的性别、发育阶段、营养，如试虫是成虫，应雌雄一致，最好是雌成虫；幼虫或若虫，应为同一龄期，体重大小一致，成虫的日龄也要一致；室内饲养的试虫，才能达到营养条件一致，野外采集的，也应在室内饲养一段时间后再用于试验；药剂处理的部位尽可能一致点滴部位愈靠近昆虫的中枢神经系统（头、腹神经索）昆虫愈易中毒

5、。植物上茎叶处理要避免根系受到药剂的作用。药剂：一般要求纯度在95%以上，至少是含量较高原药、原粉 作为毒力测定用的杀虫药剂最好是化学纯的化合物，不是制剂，不是工业制品，不是加有其他辅助剂的成品，因为任何杂质的存在都会影响到毒性，增效或减效 溶剂不同溶剂对昆虫表皮的穿透率不同，单位时间内渗入虫体内的虫量也不同，在体内的代谢速率也不同，最后到达靶标部位的药量也不同，测得结果就有明显差异。因此，配制药液的溶剂一致，一般以丙酮为宜。 2、必须设立对照目标昆虫在试验期间由于个体生活力弱，天敌寄生感病等原因，往往有自然死亡情况，因此，药剂处理组的死亡虫数也包括自然死亡数，故应设立对照加以校正，以消除自然

6、因素所造成的死亡对药剂效果的干扰。空白对照：不作任何处理的溶剂处理对照：与药剂处理所用溶剂、乳化剂都一样，只是不含药剂，这种对照是为了消除非有效成分对供试生物的影响：如丙酮配制的药液进行点滴试验，那么对照组也就应点滴丙酮。标准药剂对照：在生产中对某种目标昆虫常用的有效药剂，不仅可以同新农药对比，还可以消除一些偶然因素的影响所造成的误差。上述三种对照可以根据具体情况和试验要求来设立，一般至少设两种对照。 3、必须设重复一般重复3-4次。4、运用生物统计分析试验结果第二章 目标昆虫的饲养第一节：对标准目标昆虫的要求一、标准目标昆虫概念被普遍采用的，具有一定代表性和经济意义以及抗药力稳定均匀的农药杀

7、虫毒力和毒效指示试虫群体。 二、标准目标昆虫的要求 1易饲养，繁殖力强。不互相残杀，不受季节和寄主限制，能保证周年充分供应。2具有一定的代表性和经济意义。如代表重要农业害虫的目、科或不同的取食特性和敏感性，或是在分类上和使用价值上有一定意义。3. 群体的生活力和抗药力要稳定和均匀一致。筛选新农药时，应选择抗药力和生活力较强、自然死亡率低的试虫群体，才不致影响筛选结果。测定农药残留量时，最好选用敏感的群体，才容易得出试验结果。4.选用合适的虫期、龄期、年龄的试虫群体或混合群体供作测试对象。选用原则是试虫群体间的虫期比例、虫龄、年龄用虫体大小比较接近一致，虫龄不宜过大或过小，新羽化的或年龄过大的试

8、虫群体不宜采用。供试的昆虫种类，除了农作物害虫外，害虫、卫生害虫以及其它繁殖力强、易于饲养的昆虫或动物均可采用。如粘虫、家蝇、拟谷盗、米象、蜚蠊、蚜虫等。5.便于进行移取处理。三、人工饲养类型完全饲养：昆虫的整个生活史都是在人为控制条件下完成的。如完全变态的昆虫，从卵幼虫蛹成虫。不完全饲养：昆虫的部分生活史是在人为控制条件下完成的。这一饲养主要是观察昆虫某一个发育阶段的生物学特性，或为临时性的试验需要提供虫源。如蝗虫（渐变态昆虫）的若虫成虫，饲养可以在室外，也可以在室内。1、要有适合昆虫取食和栖息的形状和质地；2、要有刺激取食和助长取食的因子；3、要消除抑食因子；4、有必要的营养成分和适当的营

9、养比例；5、有良好的防腐效果。第二节昆虫人工饲料的类别和成分一、人工饲料的理论二、昆虫人工饲养优点1、不受季节的影响。2、不受寄主和土地的限制。3、能减少或避免微生物感染及农药等因子的干扰。4、易获得生理标准一致的试验用虫。5、能控制饲料的组成，研究昆虫的取食和发育。三、人工饲料的类别人工饲料是与天然食料或天然饲料相对的一种通称，从广义上来说，凡是经过加工配制的任何饲料都称为人工饲料，以饲料的纯度为基准，将昆虫的人工饲料分为三大类型。1、全纯饲料化学规定饲料、规定饲料 由已知化学结构的纯物质组成的饲料，称化学规定饲料。由大多数纯化学物质加上一种或数种未知结构，但已知纯度的精制产品（如经提纯的干

10、酪素、植物油、淀粉等）组成的饲料，称为规定饲料。 2、半纯饲料多数成分为纯化合物，另含一种或几种粗制的动植物材料（如肝脏、叶子粉、酵母以及它们的粗提物等）3、实用饲料这类饲料主要由未经提纯的天然营养物质组成，这些天然物质能提供昆虫所需要的全部或大部分营养成分，但是也含有一些昆虫不能利用的或对昆虫取食或生长发育有害的物质。四、人工饲料中常用的天然营养物质 1、酵母用得最早，最广泛的天然物质，常用啤酒和面包酵母，营养成分大致相同，其中蛋白质和核酸的含量50%；糖类37%40%；脂类23%灰分7%左右，水溶性维生素可达0.5%。 2、麦胚麦胚含有昆虫所需要的各种营养成分，如蛋白质、糖、脂肪酸、磷酰脂

11、类、生育酚、胡萝卜素和维生素和20余种无机盐，其中以不饱和脂肪酸为主的脂类含量可高达10%左右。 未发现麦胚中抑制昆虫取食的有毒物质。3、大豆丰富的蛋白质（4050%）脂肪酸（可高达20%）还有些昆虫必需的固醇、生育酚和各种维生素营养成分。 含有一些对昆虫的取食和生长发育有害的物质。一、种虫1、在引选种虫时必须进行严格挑选，选取生活力、繁殖力、抗病力较强的品系进行杂交产生优良后代；2、繁育过程中逐代逐一虫期严格挑选具有代表性和生活力强的试虫留作种虫；3、需要换种。有时选留少数虫种进行繁育，其后代常有退化，如试虫的繁殖力和适应环境的能力显著下降，或试虫群体抗药力不稳定或试虫退化等，则必须换种。第

12、三节标准目标昆虫室内大规模饲养的定向控制二、营养条件营养条件是试虫生活中必需的基本条件。营养条件的好坏对试虫的生长发育、大量繁育、生活力、群体质量均匀性和抗药力稳定等都有很大的影响。1、蛋白质和氨基酸（1）作用功能构成昆虫虫体的主要物质；促进昆虫生长发育，提高生殖力，生活力。从本质上讲：昆虫对蛋白质的需要就是对氨基酸的需要。 （2）必需氨基酸与非必需氨基酸非必需氨基酸昆虫在体内代谢过程中，这些氨基酸可以依靠其他物质来制造，当食物和饲料中，缺乏这种氨基酸时，昆虫的生长发育还不会停止。必需氨基酸不能在昆虫体内制造的，必须由食物来提供的氨基酸。（10种）精氨酸，组氨酸，赖氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，甲硫

13、氨酸，苏氨酸，缬氨酸，苯丙氨酸，色氨酸。2、糖类，又称碳水化合物功能：生物体内能量的主要来源；也作用于脂类和非必需氨基酸的合成；对昆虫的取食行为有重要的影响。对于植食性昆虫，糖类是重要的取食刺激物质，特别是蔗糖的刺激作用最显著最广泛，其次是果糖和麦芽糖。在大多数情况下，在人工饲料配方的设计中，用蔗糖或辅以另一种糖就能获得较好的效果。 人工饲料中常用的糖类的种类有：蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、淀粉。3、脂肪酸和固醇 功能：是构成虫体脂肪的主要成分；代谢水的来源；建立合成贮存脂肪体与肝糖或组成卵黄。例如：鳞翅目中多数蛾类都需要亚油酸或亚麻酸。少这类不饱和脂肪酸，蛹发育不好，成虫的羽化和展翅都受到影响。直

14、、鞘翅目中的很多种类也需要这类不饱和脂肪酸。除了化学规定饲料或用于研究脂肪酸定性、定量需要的规定饲料，要使用纯的不饱和脂肪酸外，一般饲料中都用植物油、玉米油、大豆油作为脂肪酸的来源。4、维生素分为水溶性和脂溶性两大类：水溶性维生素：昆虫体内辅酶的组成部分；与酶一起参与机体的代谢过程，对昆虫的生长发育有重要的意义。5、无机盐昆虫的血淋巴和各部分组织中都含有很多无机物，这些无机物质在昆虫的生理活动构成上起重要的作用。而所有的无机物质都是通过食物获得的。因此，人工饲料中必须含有无机物。不同种类和不同食性的昆虫对无机物的需要有一定的差异。 总体上，多数昆虫都必需K、P、Mg三种元素，其次是不同程度地需

15、要Ca、Fe、Zn、Na、Mn、Cu等这些元素。植食性昆虫血淋巴中K的含量高于Na，而肉食性昆虫血淋巴中Na的含量高于K，因而用于植食性昆虫的无机盐类中的K的含量都比Na高。 饲料中使用最早的韦氏盐，韦氏盐中的NaF对昆虫有害，所以有些饲料中删除了这一成分。三、饲养中的环境条件 1、温度：最适温度是2025 温度过低，昆虫死亡；温度过高，对很多成虫的繁殖力有不利的影响，对饲养质量也受到影响。虫架上装日光灯时，不要使饲养容器靠近日光灯，否则会使温度上升。最适宜的昼夜变温环境（白天温度高，夜晚温度低）对昆虫比恒温环境中饲育的更优越而稳定。提高饲养温度方法：阳光、电灯、电炉、火炉降温：空调、冰块2、

16、湿度各种昆虫对湿度的要求差异很大。饲养过程中保持70%左右的湿度是适宜的，过高的湿度会滋生霉菌，对电器装置也会造成影响，湿度过低，卵不易孵化。增加湿度：喷雾、洒水、放置水盆降低湿度：加强通风，减少水汽3、光照 主要是光周期的影响。 光周期主要影响农业昆虫的滞育，饲养中要很好地控制光照的时间。 四、饲养目标昆虫的一般技术饲养技术的环节很多，主要包括2个方面， 对昆虫各个虫态的处理如虫卵消毒、接种、移虫、收集虫蛹；对饲料和饲养环境的处理，如更换饲料，提供化蛹和产卵的场所条件等等。具体步骤：一般饲养要1代以上。按照通常的步骤，为防止避免寄生和感染，饲养通常从卵开始，因为对卵消毒比其它阶段消毒方便，容

17、易。1、卵的处理 常用的杀菌剂：12%次氯酸钠；12%过氧化氢；0.1%氯化汞；10%甲醛；福尔马林；酒精；怀特溶液12%次氯酸钠：是一种温和的表面消毒剂，多用于双翅目虫卵的消毒，也常与其他杀菌剂配合广泛用于各类虫卵的消毒。0.1%氯化汞：杀菌力强，渗透力也强。易杀伤虫卵，处理时间不宜过长。注意：对一些带有绒毛的卵块，连续使用杀菌剂消毒的效果， 比只用一种杀菌剂消毒要好的多。例：三化螟卵块用10%的甲醛，2%次氯酸钠，0.1%氯化汞各浸5分钟能取得较好的效果。玉米螟卵在2%的次氯酸钠2%甲醛液中浸10分钟效果也较好。注意事项：有效的消毒剂；适宜的浓度；适宜的消毒时间；最适宜的消毒的发育期。消毒

18、时间：根据卵的大小来确定，一般25，浸渍数分钟即可，最适宜的虫卵消毒时间是卵孵化424h。如鳞翅目昆虫一般选择黑头期，即孵化前半天或1天。过早地消毒不仅影响孵化率，而且对幼虫的存活和生长都有不利的影响。温、湿度卵在适宜的温、湿度条件下才能正常发育，在高湿季节或干燥环境中培育的虫卵一定要保湿，否则会使虫卵干死，多数昆虫的卵在70%的相对湿度下能正常发育，一般在容器中用浸水的棉花球；不过，容器加盖时要适当透气，防止湿度过大，引起卵表面或所依附的底物发霉。卵消毒后漂洗数次（灭菌蒸馏水）灭菌滤纸吸干低温处理：在大量饲养中，卵期是保藏昆虫最好的时期，适当贮存某些昆虫的卵，可以调节所需要的虫口数量，一般贮

19、藏温度为05，大部分在05冰箱中保存数月到1年，但也有一些不能贮存时间太长，如三化螟的卵块在10保存一星期，孵化率和幼虫存活率下降。2、接种地点：在无菌室（接种箱中）进行。接种前注意饲料的物理性状，饲料表面的湿、粘度不宜过大，划过沟槽或打过洞穴的饲料，要防止这些小环境中积水，否则会淹死刚孵化的小幼虫，容器壁上有水对小幼虫的活动不利，有时也会造成死亡。例如：不少鳞翅目昆虫的卵在水中或过湿的条件下不能孵化，通常不加这类昆虫的虫卵直接放在饲料上，而置于容器壁上，或先在饲料表面衬一块灭菌纸，将虫卵或卵块放在纸上；如将虫卵直接放在饲料上，必须先用灭菌纸将饲料表面的水分吸干。3、幼虫饲养 幼虫多采用集体饲

20、养。饲料供给：可一次性供给，也可添加或更换饲料，如所饲养昆虫的生活周期很短（如在一周内），可以不换饲料，如果饲养昆虫的生活周期较长的，必须更换新的饲料。注意：饲养期除必要的观察外，尽量少惊动。昆虫正在脱皮时，易造成昆虫的死亡，换饲料时可利用昆虫的习性使其聚集。 如鳞翅目低龄幼虫的趋光性，将它们集中到容器口边，利用家蝇等幼虫的避光性，使它们趋向容器底部。对有残杀行为和单栖习性的幼虫，通常采用单个饲养，不过多数情况下低龄幼虫能群聚取食，极少数残杀或排斥。因此，可集体饲养到三龄若虫再分开单个饲养。4、化蛹化蛹：全变态的昆虫都有化蛹阶段，为了使昆虫顺利化蛹，需要提供适宜的化蛹条件和场所。化蛹场所：在饲

21、料表面化蛹；在容器盖下或壁上化蛹；在饲料中化蛹；由于条件不适宜不化蛹。缺点：在饲料中化蛹时，不利于本身的羽化，也不利于控制其交配和产卵。所以一般化蛹前将老熟幼虫或预蛹收集起来，转移至化蛹的容器中，蛾科一些种类也在饲料中化蛹这些蛹个体大，容易拣出，但一般还是先将老熟幼虫或预蛹从饲料中取出，放至衬有皱纹纸或处理过的泥土中使其化蛹。有些种类化蛹需要提供特殊的场所，如三化螟老熟幼体要装入模拟水稻茎的蜡纸管，咬成羽化孔时才化蛹。5、成虫交配和产卵成虫羽化前，要将蛹按一定的性比和数量效到产卵笼中，进行羽化和交配，多数鳞翅目昆虫羽化时，以90%的相对湿度为好，成虫羽化时，应根据它们在自然界中的习性控制光照，

22、植食笥的蛾类要在黑暗或微弱光照条件下羽化。多数种类的成虫，羽化后不久即进行交配，交配和影响交配的因素很多，除了昆虫本身间的性信息素的作用外，还受外界温、湿气压、气流及寄主植物等因子的影响。在通常情况下，经交配的雌虫都能顺利的产卵，如卷叶蛾科、蛾科中的很多种类以及螟蛾科中的三化螟，玉米螟等，都能在蜡纸、滤纸或布条等片状物体上产卵。 饲养卫生：饲养环境过湿，空气污浊，不注意清洁和消毒，常常会引起霉菌的发生，造成昆虫生病而死亡，所以饲养中要认真保持卫生，并经常做好各种设备的消毒工作。饲养容器的小环境卫生也很重要，对需要常添换饲料的种类，注意清除粪便，死虫和变质的饲料，每隔一定时间要更换干净的饲养容器

23、，如容器中发现病原体感染，应立即连同容器一起处理，对饲养环境也要严格消毒，通常只是将分别成虫或生病的虫体移开是没有用的。褐飞虱全纯人工饲料的创制及氨基酸营养研究主要研究内容包括：1、研制出优化的褐飞虱全纯人工饲料，解决了国际上长期未能突破的专食性昆虫褐飞虱全纯人工饲料的难题。2、建立了全套褐飞虱全纯饲料继代饲养技术，首次实现连续6个世代的饲养，并形成了规范的褐飞虱全纯人工饲料生测技术体系。3、首次阐明了褐飞虱对氨基酸的基本需求及其机制，明确8种氨基酸为褐飞虱生长发育的必需，揭示体内共生酵母菌是形成褐飞虱氨基酸需求特征的重要原因，并与虫体的补偿能力相一致。4、首次明确致害性不同的褐飞虱种群(生物

24、型)对不同氨基酸种类、氨基酸总量与配比的需求均存在明显的分化，揭示了氨基酸在水稻抗虫性中的重要作用，是胁迫褐飞虱致害特性变异的有效选择。第四节 目标昆虫的基本操作方法一、目的 通过混匀移取、分离和处理，使试虫群体质量均匀一致，尽可能减少试验结果的差异。二、移取试虫的方法一般移取法：对于活动强度不大或具有假死习性的试虫。体型小，软体或易碰伤的幼虫，如蚜虫、红蜘蛛。趋光法：利用昆虫的趋光特性来移取试虫。缺点：均匀性差，先移出的试虫多为生活力强的个体，同时易造成虫体损失或飞逃。麻醉法：对于飞翔或活动强度大的试虫，移取有困难，用物理、化学方法麻醉处理。吸虫法：活动强度不大，微少的或易受机械伤害的目标昆

25、虫，用真空或喉管空气注射吸虫法。飞虱、蚜虫。自行迁移移虫法：利用试虫的自行迁移生活特性达到混匀移虫的目的。第三章 杀虫剂毒力测定技术 第一节 基本知识一、毒力测定与田间防治试验（一）区别1、目的：毒力测定是衡量杀虫药剂对某种昆虫的毒性程度，而田间防治试验是考虑该杀虫药剂在实际田间施用中对某种昆虫的防治效果的。2、要求：毒力测定要求在室内进行，控制环境条件（温、湿度、光照、营养等），并且还用生理状态（性别、年龄、发育阶段等）一致的昆虫。（二）联系 一般来讲，毒性程度越高，防治效果越好，但也有这种情况存在，即某一种杀虫药剂对某一昆虫在毒力测定中，毒性很高，而在实际田间防治中效果并不好，主要的原因是

26、环境因素引起了改变。二、毒性与毒效 毒性指某一种杀虫药剂对某种害虫所具有的内在致死能力。毒力毒性的一种数量表示，也即毒性程度。毒效该杀虫药剂的毒性在一定环境条件下所表现的杀死效果，是药剂本身和多种因素综合作用的结果。三、毒力或毒性程度的表示法 生物学中刺激与反应的关系有两种表现方式1、渐进关系刺激增大，反应也就相应增大一些。2、限阈关系刺激有一个阈值，在这阈值下的刺激不引起反应，而在这阈值上的刺激，不论多大，都引起同样的反应，这一种方式也就是全或无的方式。致死中量LD50：正好杀死这一群昆虫中的一半个体的药量量。 最高致死量：正好杀死这群昆虫的全部个体的最低的药量。最低致死量：正好不能杀死这一

27、群昆虫的全部个体的最高药。LD99LD30LD10四、杀虫药剂的毒力测定的基本数据 自变数x，依变数y第二节 初筛试验一、概念 又叫过筛试验（screen test），或初步综合杀虫毒力试验，是一种比较粗放的初步试验，目的是确定一种新杀虫剂（新化合物）对某一目标昆虫有否有毒，以便决定是否有必要进一步作毒杀作用方式或精密毒力测定，它不能判断杀虫剂的毒力大小，也不能区别其毒杀作用方式，对筛选新农药更为重要。 二、原理 将较高浓度或剂量的未知新农药，或已知的药剂品种剂型，大量而均匀地直接喷撒于目标昆虫及食料上。然后将目标昆虫置于恒定的温度（25）、湿度（6070%）条件下及通气良好的恢复室内，作用一

28、定时间(24h)，以充分发挥供试药剂的综合毒力触杀、胃毒、熏蒸、忌避等。处理设计：液剂浓度为0.1%，粉剂为1%，复筛试验时或毒力比较时，药剂的纯度在95%以上，最好是原药，可设5个浓度造成死亡率在20%80%范围内为宜。初筛试验一般每个处理2040头或更少，重复一次，就可获得正确的可靠的结果，每次试验仍需设立空白对照和溶剂对照（或标准药剂对照）。若空白对照的自然死亡率20%重新选虫做,表明虫体的生活力太弱。 在试验期间应注意观察试虫的中毒死亡征象。 死亡、中毒、击倒、复活及取食情况，并保证水分及食料的供应，以免试虫因食料不足而引起自相残杀或自然死亡，或植株萎蔫以及试虫逃离植株（蚜虫、红蜘蛛）

29、等现象。三、要求目标昆虫：人工饲养的标准目标昆虫或田间发生一致的昆虫。环境条件：温度25；湿度（一般农业昆虫为6080%）；处理设计：按上面的四、初筛实验的方法1、喷雾法：用定量的药剂通过喷雾器呈细雾状喷到盛有目标昆虫及食料的器皿内，待药液晾干后，再将目标昆虫及食料移入干净的器皿中，定时观察中毒死亡情况。2、浸渍法：将一定数量的目标昆虫放在一块干净的纱布袋或小沙笼里，再将纱布或纱笼连同食料浸入药液中，经过35秒后取出晾干，或用滤纸吸去多余的药液，最后将目标昆虫和食料移入干净器皿内，置于恒温恢复室内，隔一定时间后，观察记载试虫中毒死亡情况。3、食料混药法：将定量丙酮药液或粉剂与食料混匀，制成一定

30、浓度的药粉药粒或毒铒，再接入一定数量的目标昆虫，任其接触取食，定期观察效果。五、初筛试验结果分析 结果检查时，一般情况下，家蝇以不能正常飞翔或不能正常活动视为死亡。中毒的害蝇作为死虫，是因为在较短的药剂作用时间内（如24、48h）要严格区别中毒与真正死亡的界限是有一定困难和费时间，而且要严格区别中毒与死亡的意义也不大。通常试虫中毒后，药剂作用时间延长时，就接近死亡，因此以不能正常活动作为死亡标准可以大大节约观察时间，且不会影响测定结果。 拟谷甲的死亡标准，以不能正常爬行视为死亡。 蚜虫以毛笔轻轻拨动虫体，附肢无任何反应则视为死亡，粘虫、菜青虫等鳞翅目幼虫以不能正常活动视为死亡或者以轻轻触动虫体

31、，无任何反应作为死亡标准均可，具体的死活标准可以根据实验目的和要求来定，但应统一标准，以便相互比较。1、试虫死亡率高继续研究，进一步测定其毒杀作用方式.2、试虫死亡率低，又不取食（对照组）照常取食，杀虫剂有忌避作用。3、试虫死亡率低，又照常取食，杀虫剂毒力小或无毒力，则无必要进一步测定。 进行初筛试验，确定了药剂有毒，要进一步了解，需做毒杀作用方式测定技术。 初筛实验，它只判断药剂是否有毒，不能确定化合物的毒力大小，也不能区别其毒杀作用方式。但是，当某种杀虫剂经过初筛试验后，其毒效接近标准药剂时，就有价值进一步其对昆虫的毒杀作用方式。第三节 毒杀作用方式测定技术目的：了解药剂对目标昆虫的毒杀作

32、用方式。在初步毒力测定中，只解决药剂对目标昆虫是否有毒，但不了解它是怎样毒杀昆虫的。为了正确有效的使用这种杀虫剂，必须了解它对目标昆虫究竟是以什么作用方式杀死的，因此，需要进一步做杀虫剂毒杀作用方式的鉴定。分类依据:杀虫剂进入虫体的部位及途径的不同。毒力作用的方式可分为：胃毒毒力测定、触杀毒力测定、熏蒸人、忌避、内吸作用测定 一、胃毒作用测定技术1、无限取食法原理：目标昆虫可以无限制地取食混有杀虫剂的饲料，不计算目标昆虫实际吞食的药量。A、饲料混药喂虫法 将定量的药粉同谷物混和均匀，然后每个处理放入目标昆虫2050头，或将药剂溶于有机溶剂如丙酮制成药液，将定量药液同食物混匀，待溶剂全部挥发后，

33、置于适宜条件下培养，经710d检查死亡情况，比较毒力。浓度表示法：以药剂相当于食物的比例作为含药浓度。目标昆虫：拟谷甲、米象、锯谷盗、麦蛾（仓贮害虫及一般农业害虫） B、培养基混药法用人工培养基与不同浓度的药剂混合，然后接一定数量的目标昆虫，定时观察死亡情况。目标昆虫：果蝇（麻醉后）琼脂混药法：琼脂混药法琼脂2克白糖6克水100毫升煮成琼脂冻液（取5毫升）杀虫剂不同浓度（5毫升）冷固后加50头（吸虫管）果蝇苏醒后便飞到冻胶上取食，24小时检查死亡情况。 其他方法如种子拌药或浸药处理法、糖浆混药饲虫法、毒铒法。2、定量取食法 是使供试目标昆虫按预定杀虫剂剂量取食，或在目标昆虫取食后能准确测定其吞

34、食剂量。A、叶片夹毒法应用很广，由坎贝尔1929年提出来的。目标昆虫：植食性的、取食量大的、咀嚼式口器的目标昆虫，如粘虫、蝗虫、玉米螟、斜纹叶蛾和家蚕。方法：把厚薄均匀的而光滑的植物叶片用钻孔器（直径为2厘米）打孔制成5060片，或用剪刀剪成一定面积的叶片，放入喷粉玻璃罩或转盘沉降喷粉器内，进行定量喷粉，同时放入一定面积的纸片或铝片（先称量）喷粉后将硬纸片或铝片）取出再行称量，测定每一张叶片上药粉的沉积量（或换算成单位面积上的药量）把圆叶片放在培养皿中并保湿。原理：两张叶片，中间均匀地放入一定量的杀虫剂饲喂目标昆虫，然后计算被吞服的叶片面积，计算出吞食的药量。优点：结果准确，避免发生触杀作用，

35、操作方便。缺点：计算吞服面积较费时间。注意：尽量选用试虫原来的寄主植物，以免有拒食情况；有几种寄主植物时，应选用叶片较大及光滑者，以免药剂在上面分布不均匀；尽量用同一生理状态的叶片及新鲜的叶片。步骤：钻孔器打孔制成片，用微量进样器吸取10微升药液（已知含量丙酮药液）均匀地涂抹在圆叶片上（叶片面积尽量小直径6mm），自然晾干，另取一片无药的圆叶片那一面对合，研成夹毒叶片，或将杀虫剂配成不同浓度的丙酮药液，用微量点滴器定量滴加至小叶片上，待丙酮挥发后，制成夹毒叶片，饲喂已知体重试虫，让其全部吞食，然后再给试虫喂以新鲜无毒叶片。此法虽然计算吞服面积较费时间，但它仍然是目前比较理想的胃毒毒力测定技术。

36、B、液滴饲喂法目标昆虫：舔食性昆虫，如家蝇、果蝇、蜜蜂。方法：将一定量的杀虫剂加入到糖浆或糖汁中，用微量注射器形成一定大小的液滴（0.010.001毫升），直接饲喂目标昆虫，或将形成的液滴放在玻璃片上，让目标昆虫自行舔食，舔食前后称重，确定取食量。药剂处理后，放入干净的培养皿中，定期观察中毒反应情况，计算死亡率。缺点：没有完全排除触杀作用的干扰，测定结果偏高，在实践中很少应用。此法适应舔食性昆虫不适应于植食性昆虫。二、触杀作用测定技术原理：将较高浓度或剂量的杀虫剂施于虫体的全部或局部合适部位，使虫体充分接触药剂而发挥触杀作用。有直接施药法和局部施药法。直接施药法：药剂通过体壁进入虫体而致死的称

37、为触杀毒力，但实际上并不能完全避免一部分杀虫剂自气孔进入或口器吞入消化道内。以下这几种方法药剂接触至昆虫整个体表，昆虫体表越大，接触量越大，但其中有可能有胃毒及对呼吸的影响，甚至有物理窒息作用，很难与单纯的触杀毒力比较。注意在喷雾塔及喷粉塔下进行，否则也是不均匀的。A、喷粉及喷雾法定量的粉剂喷撒在盛有目标昆虫及食料的器皿内，再将目标昆虫及食料移入干净的器皿中，用纱布盖好，定时观察中毒死亡情况 。用定量的药剂通过喷雾器呈细雾状喷到盛有目标昆虫及食料的器皿内，待药液晾干后，再将目标昆虫及食料移入干净的器皿中，定时观察中毒死亡情况 。B、浸渍法将虫体直接浸入药液，浸液一段时间后，取出，晾干或吸干，置

38、于合适的温、湿度条件下及通气良好的环境中，隔一定时间后（5h、24h或48h），观察记载死亡情况，计算死亡率（或校正死亡率），求得国LC50。优点：快，浸渍时间短，常用于有效筛选新农药、有效化合物的筛选试验；1980年被FAO推荐为蚜虫抗药性的标准测定方法。可以把大批昆虫一同处理，甚至于5个浓度一同浸液。操作简单，不需特殊仪器。适应性广，可适应用水生昆虫、粘虫、拟谷甲、家蝇、蚜虫、介壳虫等多种昆虫和螨类。药液在昆虫体表的分布是均匀的，假如各个昆虫体表面积相差不大。 蚜虫、红蜘蛛以及介壳虫等，可以连同植株寄主一起浸入药液。红蜘蛛有吐丝成球现象，药液不易均匀沾湿体表影响结果。可先将带有红蜘蛛的叶片

39、置于豆苗（35cm高）上，等叶片枯萎时，红蜘蛛自行迁移至豆叶片，然后进行浸液。目标昆虫：适用于多种昆虫的卵和幼虫，如水生昆虫、粘虫、拟谷甲、家蝇、蚜虫、介壳虫。缺点：毒力只能用药液的浓度来表示，而不能精确地用每一昆虫体重所获得的剂量来表示，这是不够精确的。这种方法测得的毒性虽然是接触毒性，但其中也有可能有胃毒和呼吸作用的影响。不适于活动性极强的或大型昆虫（要先麻醉，而麻醉后浸液多少有影响），大型昆虫测用量较多，不甚经济。毒力大小与昆虫种类性别虫期生理状态及营养条件、浸药时间等条件关系极大，测试时应可能控制条件一致使测试条件达到相对稳定。 注意：配制药液的溶剂、方法、剂型要一致，否则会影响虫体表

40、面粘的药量及穿透能力，从而影响触杀毒力；浸渍时间长短因虫而异，浸渍时间长，会增加死亡率，时间过短，又可能使药液在昆虫体表上湿润粘着不充分，拟谷盗、锯谷盗、蜚蠊、果蝇等试虫浸23分钟为宜，粘虫幼虫、蚜虫等浸液10秒，红蜘蛛浸5秒即可；药液不能重复利用；一个浓度的药液不可一个个地依次浸液处理，但可以同时浸入几个处理重复、浸液试虫体表上的多余药液应先除去，以免湿度过大，待体表上的药液晾干后，再移入干净的器皿中。浸玻片法亦称粘胶法，适用于雌成螨（35天龄的雌成螨）的测定，被FAO推荐为螨类抗药性的标准测定方法。二、局部施药法原理：将药液或药粉均匀地施于虫体的合适部位，使其充分发挥触杀作用，由于药剂不接

41、触目标昆虫的口器，因此，基本上可以避免胃毒作用的干扰。A 药膜法基本原理：将定量的杀虫剂，采用浸渍、点滴、喷洒等方法施于物体表面上，形成一个均匀的药膜，然后放入一定量的供试目标昆虫。让其爬行接触一段时间，再移到正常的环境条件下，在规定的时间观察试虫的中毒死亡率。计算死亡率或击倒率。优点：最接近实际防治情况；方法简单，操作方便；应用范围广，几乎一切爬行的昆虫都适用；结果准确，是目前常用的一种方法。缺点：昆虫与药膜接触时主要是足部（特别是足跗节）的接触，如果昆虫的足部是杀虫剂穿透的主要部位，采用药膜法测得的毒力就偏高，如家蝇药膜法的毒力高于点滴法，家蝇果蝇蚊类是药膜法最理想的试验昆虫，而对于那些足

42、部表皮不是杀虫剂穿透的主要部位或不能穿透的目标昆虫，采用此法测得的结果就偏低。 药膜法测得的结果不能表示准确的剂量，即不能表示单位体重昆虫接受的药量，只能用单位面积的药量来表示，而单位面积的药量并不等于药剂进入虫体的药量；昆虫的活动习性对试验结果的影响较大。不同物体表面接触毒性及残留药效都有很大差异，因此应尽量控制条件一致。B 点滴法原理：是将一定量的药液点滴到供试目标昆虫体壁的一定部位来测定杀虫剂穿透表皮而引起昆虫中毒致死的触杀毒力。是特里万1920年首先发明了微量注射器，它是一个螺旋推动千分尺进而推动注射器的内柱，从针尖挤出液滴来。方法：一般点滴胸部背面。点滴器常用的器械：微量点滴器；微量

43、点滴仪；电动手动微量点滴器；毛细管微量点滴器优点：精确度高，因为处理的剂量可能控制得十分准确，一般误差在5%上下；可以避免胃毒作用的干扰；试验昆虫数目可以大为减少，一般用20个昆虫一组，就可以获得相当一致的结果；药剂用量少，用于新杀虫剂的初步测定，这是一个很大的优点（比药膜法）；由于仪器装置上的改进，目前操作方便，迅速，所用的仪器装置也十分简便。缺点：不能处理很大数量的目标昆虫，准确性在很大程度上决定于昆虫本身的生理状态，因此，必须用生理状态十分一致的目标昆虫，否则会大大影响其准确性；点滴部位与点滴量；目标昆虫处理前的麻醉方式等都有影响；操作技术难掌握。对微小昆虫操作困难，不如使用浸渍法。三、

44、内吸作用测定技术 内吸杀虫剂可以通过植物的根、茎、叶以及种子等部位渗入植物内部组织，随植物体液传导整株，不妨碍植物的生长发育，而对害虫具有很高的毒效的化学物质。具有内吸杀虫作用的药剂很多，但不一定是属于内吸杀虫剂 。直接测定法根系内吸法茎部内吸法叶部内吸法种子内吸法四、熏蒸毒力测定技术 使药剂以气态经呼吸系统进入虫体，在作用部位产生毒力反应，以测定熏蒸毒力的杀虫剂生物测定。 五、忌避作用测定技术 将定量的药剂施于植株上或部分植株，再接入一定量的目标昆虫，置于正常环境下，定期观察目标昆虫的取食情况，用坐标纸法测量被目标昆虫取食面积计算忌避程度。 第四章 试验结果的统计与分析一、毒力的表示方法1、

45、死亡率 (Mortality） 反映杀虫剂药效的一个最基本指标。 校正死亡率死亡率表示受试目标昆虫经药剂处理后的死亡百分数，它可以直接反应药剂的效果。但昆虫中往往也有自然死亡的个体，即有自然死亡率存在。因此 ，需要对药剂处理的死亡率进行校正。这就是Abbott提出的校正死亡率。局限性：只有当自然死亡与药剂引起的死亡没有关系时，自然死亡率在5%-20%之间时才适用。2、虫口减退率（大田） 3、致死中量(LD50)/致死中浓度(LC50)致死中量(medium lethal dosage)是指杀虫剂杀死供试昆虫一半(50%)时所需要的药量。致死中浓度(medium lethal concentra

46、tion)是指杀虫剂杀死供试昆虫一半(50%)时所需要的药剂浓度。TLM 忍受极限中浓度（Medium tolerance limit）鱼对有药的水体接触一定的时间50%个体死亡的极限浓度（48h） 20-28度 水生生物。4、相对毒力指数孙云沛1949年提出，几种农药不同时间不同条件下作生物测定，生物测定影响因素很多，用同一种标准农药作比较。二、毒力回归线LDP线1、试验设57个不同剂量（或浓度）系列，对多组昆虫分别测得死亡率。2、剂量（浓度）-死亡率毒力曲线。昆虫对杀虫剂敏感性分布是一个偏常态性分布，也就是说，杀虫剂对昆虫的效应增加不是和剂量的增加成正比，而是与剂量增加的比例成比例。因此，

47、一个群体昆虫的累积死亡率和杀虫剂浓度的关系是一条不对称的“S”形曲线。特点是：不对称S型，中部较值，不易精确求得LD50值。缺点： 用5-7个浓度作一条“S”形曲线很难得到准确的LD50。 用5-7个剂量死亡率的点来确定S型曲线，可以画出很多条适合这57点的曲线。 S曲线的特点是两端平缓，中间一段很陡，因此在死亡率靠近50%时，剂量对数值只要很小的变化，死亡率就会有很大的变化，即死亡率在45-55%处的剂量与LD50十分接近，不可能准确求出LD50。剂量转换成对数：为了计算方便，通常把浓度换算成对数值，使偏常态分布变成正态分布，使不对称的“S”曲线变成对称的“S”曲线 。(3)将S型曲线变成直

48、线：将死亡率转换成机率值，则对称的S型曲线变成一根直线，则称剂量对数死亡率机率值曲线，亦称毒力回归线LDP线，又称临时毒力回归线。Y=a+bx死亡率转换成机率值：机率值就是机率的单位，范围1-9，其实质常态等差加上5。常态等差即正态分布的平均数加减标准误所得的数值范围，投射在底线常态等差点上各个常态等差。由于常态等差有正有负，为计算方便，将常态等差加上5即为机值。 结果：将转换成的对称“S”型曲线进一步转换成一条直线。坡度(slop)：直线的倾斜度，代表昆虫群体对杀虫剂敏感性的差异程度.坡度大，分散程度小，即表示昆虫群体对杀虫剂的反应较均匀。坡度小，分散程度大，即表示昆虫群体对杀虫剂的反应具有

49、很大的异质性，即对杀虫剂的反应不均匀，即杀死95%昆虫种群的剂量远远大于坡度大的需要的剂量。如果两种杀虫剂的致死中量相同，两条毒力回归线不是平行而是相交的，A、B两线的坡度不同，LD75和LD25的剂量差别很大，比较时b具有重要意义， 不能用LD50，必须考虑曲线的坡度。引起75%的虫子死亡与95%的虫子死亡，需要的药剂剂量相差越小，表明反应均匀，如A与B相比较 AB三、毒力回归线的求取方法（一）作图法1、目测画出对数-机率值回归直线直接从实验得到的结果，将药剂剂量转换为对数，死亡率转换成机率值，用目测的方法绘制LDP线，画直线须遵守的原则：所画的直线应尽量与各点接近。主要照顾死亡率在16%-

50、84%之间对应的机率值的点。2、求出LD50自机率值5处引出横轴的平行线与直线相交，自相交点引出纵轴的平行线与横轴相交，交点的值为LD50的对数值，反对数后即得LD50值。3、求毒力回归式(直线方程)毒力回归式可用y=a+bx表示y：机率值，x：剂量或浓度对数，a：截距，b：直线的斜率从计算回归线的坡度值(斜率b) ，在直线上任意取两点，可得到x1、y1和x2、y2两组数值4、卡方(2)检验将各剂量的对数值x代入求得的回归方程式中，求出相应的机率值(理论值)；根据求得的理论机率值，从死亡率-机率值表中查出死亡率p;求各剂量的理论死亡数np(供试虫数理论死亡率)不求各剂量的实际死亡数r与理论死亡

51、数np的差，即r-np；求5、求致死中量的标准误Sm根据各剂量的理论机率值，查权重系数表，查出相应的权重系数w；求权重nw，并求权重总和nw代入下式中式中x为各剂量的的对数值，x为各剂量的的对数值的平均数，m为致死中量的对数值。6、致死中量95%的置信限致死中量的置信限即致死中量的可靠范围，变即药剂对供试昆虫种群致死中量真值的波动范围。当p=0.05，自由度为N(供试昆虫数)，查得t分布表得t值，致死中量的置信限=LD50tSm因供试昆虫数一般大于50，可认为自由度为+，t值为1.96，故致死中量真值的波动范围为：M1=LD50-1.96SmM2=LD50+1.96Sm注意：式中的LD50及S

52、m均为对数值，需查反对数表才是剂量的数值。（二）最小二乘法求a、b时以(y-y)2最小为原则 以点滴法测定高效氯氰菊酯对菜青虫的毒力为例：菜青虫3-4龄，每个处理为三个重复，每个重复10头试虫，放入干净的培养皿中待处理，以丙酮为对照，由低浓度向高浓度依次点滴，点滴量为0.04-0.06微升，处理完毕，给定量新鲜叶片，置25-27恒温培养48小时后记录观察死亡率。 浓度(g/l) 点滴量(g/头)重复处理虫 数48小时平均死亡率校正死亡率死亡率机率值Y剂量对数X0031010%-3.718400.0103025.3610-431030%22.22%4.2345-3.270.0206041.071

53、0-331046.67%40.74%4.7647-2.970.041212.1410-331056.67%51.86%5.0476-2.670.082424.2810-331066.67%62.97%5.3319-2.370.164848.5610-331080%77.78%5.7655-2.07按照下列公式求回归方程Y=a+bx中的a和b注意：公式中的N不是供试虫数，而是处理剂量数。求得后再将Y=5代入方程式中，求得LD50。卡方检验与LD50的95%置信限求取如作图法。剂量对数X理论机率值Y理论死亡率% P供试虫数n实际死亡数r理论死亡数np相差r-n p (r-n p)2 n p(1-

54、p)-3.274.303324.3303022.22%2.4330.570.18-2.974.666336.9303040.74%3.6930.980.41-2.675.029351.2303051.86%5.1230.550.12-2.375.392365.2303062.97%6.5230.150.00992-2.075.755377.5303077.80%7.7530.250.0362=0.767.815 (=5-2=3) 四、杀虫剂混用联合作用的判断增效剂：凡是在一般浓度下单独使用时对昆虫并无毒性，或毒性很小，但与杀虫剂混用时，则能增加杀虫剂的效果。这类化合物称为增效剂。一般可以用测定

55、相对毒力的方法来表示增效剂效能的大小，即用增效比值（增效倍数）来表示。凡增效比值明显大于1时，即证明有增效作用。增效倍数=单独药剂LD50 / (药剂+增效剂) LD50例：增效磷分别与氧乐果、溴氰菊酯混用对桃蚜的毒力氧乐果+增效磷的共毒系数=1.110-2 /3.810-3100 =289.47溴氰菊酯+增效磷的共毒系数= 1.6410-4 / 3.2910-4100 =49.85杀虫剂LD50(g/头)共毒系数氧乐果1.110-2氧乐果+增效磷(1：2)3.810-3289.47 (增效)溴氰菊酯1.6410-4溴氰菊酯+增效磷(1：2)3.2910-449.85 (拮抗)共毒系数法(CT

56、C法)孙云沛1960年提出共毒系数法 Co-Toxicity Co-efficient毒力指数=(标准药剂的LD50/供试药剂的LD50) 100混剂理论毒力指数（TTI）=A的毒力指数混剂中A药的百分含量+B的毒力指数混剂中B药的百分含量实际毒力指数(ATI)= （标准药剂的LD50/A+B的LD50）100 CTC= ATI / TTI 100 CTC100 相加作用 CTC100 增效作用由于存在实验误差，很难判断CTC略大于100为增效，因此国内通用的是CTC120增效，80-120相加，80拮抗。例：溴氰菊酯、乙酰甲胺磷及其混用对甘蓝上桃蚜的毒力混剂的ATI=3.42 10-4 /5

57、.9810-3100=5.72混剂的TTI=100 1/81+1.0680/81=2.28共毒系数(CTC)=ATI / TTI100=4.72/2.25100=250.88杀虫剂LD50(g/头)TI溴氰菊酯3.4210-4100乙酰甲胺磷3.2210-21.06溴氰菊酯+乙酰甲胺磷(1：80)5.9810-35.72第五章 杀菌剂生物测定技术杀菌剂生物测定作为一种测定药剂对病原菌生物活性的技术具有以下特点：研究材料较易获得。病原菌分离培养、菌种保存容易。测定技术趋向成熟，条件稳定，结果的重现性好，不受外界因素影响。方法容易标准化。杀菌剂生物测定有二类，一类是离体生物测定(bioassay

58、in vitro)病原菌在脱离寄主环境条件下，在人工培养条件下来进行的一类药剂生物活性测定方法。这类方法损伤简便，测定快速，易标准化，重现性好。多用于药剂对可人工培养的病原菌作用的测定。结果与生产应用有较大差异，特别是无直接毒性的药剂。一类是活体生物测定(bioassay in vivo)这类测定在寄主植物上测定药剂对病原菌的活性，因此，与上类不同的是增加植物，不间单纯的药剂对病菌的作用。如果是温室中的测定，环境条件基本可以控制。如果是田间试验，还增加了环境条件在不可控制的情况下药剂的表现。测定条件与大田接近，结果实用性好，对药剂在田间应用的参考价值较大。受环境因素影响大，易出现结果的不稳定。

59、一、杀菌剂(离体)生物测定的基本要求与基本操作1、试验器材的清洁一般洗涤：肥皂水或洗衣粉或洗洁精，常用的洗涤剂。碱、酸洗涤：对于器皿上粘有焦油、树脂等物质，用一般洗涤不易去掉，可用浓硫酸或40%氢氧化钠溶液先浸泡，再清洗。铬酸洗涤：强氧化剂，去污力极强，有腐蚀性，使用时要注意避免洗液溅到皮肤或衣物上，以防灼伤。铬酸洗涤液是实验室常用的强去污剂，配制方法：重铬酸钾60g， 浓硫酸460ml，水300ml先将重铬酸钾溶于温水中，冷却后徐徐加入浓硫酸。配好的洗液呈红色、浓厚，有均匀的红色小结晶。稀洗液则为重铬酸钾60g，硫酸60ml，水1000ml。2、试验器材的灭菌1)干热灭菌：主要是利用干热的空

60、气灭菌。烘箱干热灭菌：主要用于玻璃器皿及不易变形(性)或燃烧的材料灭菌，灭菌温度一般控制在160-180，灭菌时间1-2小时，如150，则需2小时。对于土壤这种材料，灭菌时往往体积大，则一次灭菌的效果常常会不理想，就要采用间歇灭菌的方法进行灭菌。火焰灭菌：是将器具在燃烧的火焰上进行灼烧，如接种针、接种环、打孔器等可以在火焰上灼烧的器具。2)湿热灭菌：常用的是高压蒸气灭菌。密闭的高压蒸气灭菌锅中的水回执后产生蒸气，水蒸气温度和水的沸点，随着锅内压力的增高而提高，蒸气压力的大小与蒸气温度有一定关系。蒸气锅的压力是可以控制的，一般灭菌时的压力为15磅/吋2。对于土壤这种材料，可以用间歇灭菌的方法才能